应用RT-PCR方法快速检测水泡性口炎病毒

针对水泡性口炎病毒(VSV)的两种血清型设计了2对引物，建立RT-PCR方法，用于检测VSV。VSV接种细胞出现明显的细胞病变，经RT-PCR检测为阳性，而检测口蹄疫、猪水泡病均为阴性，说明引物具有较好的特异性。     

己烯雌酚完全抗原的合成和多克隆抗体的制备

采用混合酸酐法,将己烯雌酚与牛血清白蛋白或卵清蛋白偶联形成完全抗原.经紫外分光光度计扫描鉴定,并通过聚丙烯酰胺电泳实验,推算出牛血清白蛋白与DES-HS的结合比是1:25～1:30.以己烯雌酚-牛血清白蛋白为抗原免疫家兔,制备出多克隆抗体,经酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验进行鉴定,并采用酶联免疫吸附方法进行效价测定,抗血清效价均超过了1:10 000.     

抗PRRSVGP5和M蛋白独特型抗体替代抗原诱导机体产生中和抗体的研究

制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2替代抗原对机体免疫调节作用的研究。用纯化的PRRSV-GP5(GP5-Ab1)蛋白和抗PRRSV-M(M-Ab1)蛋白单抗免疫大白兔,当免疫血清琼扩效价达1:16以上,加强免疫后心脏采血分离血清,分别纯化兔抗PRRSV-GP5IgG(GP5-Ab2)和抗PRRSV-MIgG(M-Ab2)血清,分别用GP5-Ab2、M-Ab2以及GP5-Ab2与M-Ab2混合型三种分别免疫未免PRRS疫苗的小猪,同时设PRRS弱毒苗、灭活苗和空白组作对照,免疫后21d采集猪血清,间接ELISA检测免疫Ab2和PRRS疫苗的猪血清全为阳性,空白组仍然为阴性。经细胞中和试验证明免疫Ab2及PRRS疫苗的猪血清都具有中和抗体,说明Ab2在体内具有替代PRRSV的作用诱导机体产生具有中和效应的中和抗体,从而起到保护机体免受PRRSV的感染作用,为猪繁殖与呼吸综合征病新型疫苗的研究提供了新的思路。     

多重RT-PCR检测猪口蹄疫病毒、猪水泡病病毒和猪水疱性口炎病毒的研究

建立了一种同时检测猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪水泡病病毒(SVDV)和猪水疱性口炎病毒(VSV)三种病原体的多重RT-PCR方法。参照文献报道的基因序列,设计合成了三对特异性引物;PCR扩增条件进行优化后,用这三对引物对同一样品中的FMDV、SVDV、VSVRNA模板进行扩增,结果同时得到了三条特异性条带,大小与试验设计相符:FMDV(208bp)、SVDV(862bp)、VSV(638bp),且对猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸扩增结果为阴性;三种病毒RNA模板检出的最小量均为10fg。试验证明,此方法经济、快速、敏感、特异,可用于FMDV、SVDV和VSV这三种猪水泡性疾病的鉴别诊断及流行病学调查。     

用RT—PCR检测新城疫病毒的研究

用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测新城疫病毒（ＮＤＶ）。研究结果表明ＲＴ－ＰＣＲ可检测出Ｆ４８Ｅ９株、Ｌａｓｏｔａ株、Ⅰ系疫苗株、Ｌ株、ＳＹ１株等５株ＮＤＶ尿囊液为阳性,其敏感性可测至１０－３倍稀释尿囊液病毒。ＲＴ－ＰＣＲ还能直接检测出发病鸡气管中的ＮＤＶ。     

己烯雌酚人工抗原的合成和酶免疫检测方法的建立

通过化学方法合成己烯雌酚单羧甲基醚，并通过核磁共振和质谱进行鉴定；分别用混合酸酐法和碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）偶联，合成己烯雌酚人工抗原，经紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳和动物免疫试验证实人工抗原合成成功，并制备了抗己烯雌酚的特异性多克隆抗体，同时建立了己烯雌酚的酶免疫检测方法，这对动物性食品中己烯雌酚的残留检测有重要意义。     

运用PCR检测猪圆环病毒的研究

设计和合成了一对引物，建立PCR反应，用于检测猪圆环病毒。结果表明，PCR对猪圆环病毒细胞毒，病毒基因克隆具有较好的特异性和灵敏性，提示用PCR试验检测猪圆环病毒是一种较好的方法。     

国内外常用新城疫活疫苗的毒力和血凝滴度测定试验报告

本试验通过对国内外常用新城疫弱毒疫苗最小致死量（MLD）测定、鸡胚平均致死时间（MDT）测定，对疫苗的毒力强弱和致病型进行分析。对疫苗的血凝试验（HA）滴度进行测定。根据疫苗的抗原含量推断免疫效力。测定新城疫不同毒株的弱毒疫苗单苗和与传染性支气管火H120等的二联苗或三联苗共14种，对其中9种疫苗进行了鸡胚最小致死量（MLD）测定和鸡胚平均致死时间（MDT）试验，对所有的疫苗都进行了HA试验。不管是进口疫苗还是国产疫苗其MDT有较大的差异，其毒力有强有弱，有的为中发型（中等毒力）疫苗，主要是温和型（低毒力）疫苗，最小致死量（MLD）范围为10^-8-10^-10/0.1ml。不同厂家生产的疫苗HA滴度有较大的区别。国产疫苗的质量与进口疫苗无明显的差异，有的比进口疫苗质量还好。对出口养禽企业选用低毒力、HA滴度高的疫苗具有较好的指导作用。     

接触传染性脓疱皮炎病毒B2L基因的克隆和序列分析

参照文献和 Gen Bank发表的接触传染性脓疱皮炎病毒 (CPDV ) NZ- 2株的 Bam H / B片段的基因序列 ,设计并合成 1对引物 ,通过 PCR扩增出国内 CPDV疫苗株和 3个分离株的 B2 L 基因 ,目的片段长约 1.13kb。将目的片段克隆到 p MD18- T载体后进行序列测定 ,并用 DNAStar软件比较分析国内的 CPDV株与 NZ- 2株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性。结果表明 ,国内疫苗株和 3株分离株的核苷酸序列同源性分别为 99.7%、96 .9%和 97.4 % ,与国外 NZ- 2株的同源性为 96 .1%。国内 CPDV株与 NZ- 2株的氨基酸序列同源性分别为 92 .0 %～ 96 .0 % ,表明CPDV Bam H / B2 L基因变异的幅度小。     

鸵鸟新城疫的临床诊断病毒分离和鉴定

鸵鸟新城疫的临床诊断病毒分离和鉴定＊尹燕博蔡丽娟孙淑芳李葳徐瑞（农业部动物检疫所,青岛２６６０３２）１９９７年春季,数个鸵鸟场发生严重传染病,从２～３月龄的小鸟到３～４岁的成年鸟均有发病,但小鸟的发病率高,有的鸵鸟场２～３月龄小鸟发病率达５０％,而成...