国际间实验室禽流感能力验证样品制备技术的研究与应用

通过对禽流感病毒基因序列的比较分析,在其血凝素(HA)基因保守区,设计引物,通过基因克隆,体外转录等技术,制备出病毒HA基因的RNA片段,并对体外转录的RNA进行了定量、稀释,以作为用于国际间实验室禽流感能力验证的样品,并建立了绝对定量实时荧光RT-PCR检测方法。样品的均匀性和稳定性实验结果证明了样品制备技术的可行性,并为我国首次成功组织实施国际间实验室禽流感能力验证计划奠定了基础。     

对虾病毒病的研究进展

对虾病毒病的研究进展中国农业大学动物医学院夏春对虾病毒病的种类从１９７４年发现对虾病毒病以来，至今已先后有近２０种重要病原性病毒被报道。１９８８年后，太平洋沿岸日本、泰国、澳大利亚、美国及我国的海水养殖对虾都逐年暴发病毒性疾病。其中，报道最多、危害最...     

鸡II型干扰素存在亚型

采用RT-PCR法从惠阳胡须鸡克隆了II型干扰素基因(ChIFNγ2)。ChIFNγ2是含19个氨基 酸的信号肽和145个氨基酸的成熟蛋白，与已报道的鸡II型干扰素基因（ChIFNγ）长度一 致 ，核苷酸和氨基酸同源性分别为97%和92.7%；有12处氨基酸发生点变异。ChIFNγ2与禽类IFNγ和哺乳动物IFNγ在氨基酸水平上同源性分别为62.2% ～92.7%和26.5% ～31.8%。1980年国际干扰素命名委员会建议, 在一特定的干扰素型别内，氨基酸序列或组成方面有差异时可确 定为亚型。根据这些规定，惠阳胡须鸡ChIFNγ2可被定为一种新亚型的鸡II型干扰素。即II 型干扰素中存在亚型。     

新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展

在综述新城疫病毒(NDV) 的分子生物学特征、致病本质、复制机理以及利用反向遗传操作技术获得NDV的感染性克隆的基础上,着重介绍了以NDV作载体,将报告基因、功能基因包括鸡传染性法氏囊病毒VP2基因及流感病毒HA基因等插入NDV基因组的不同位置构建重组新城疫病毒,并对外源基因进行成功表达的研究进展。同时对DNV作为新的疫苗载体表达外源基因的可行性及未来应用前景进行了初探。     

长白山东坡的杂夜蛾亚科昆虫不同海拔高度分布情况分析

通过对长白山东坡采集的夜蛾科杂夜蛾亚科种类整理,初步了解了不同种类在不同海拔高度的分布情况。     

牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5＇UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化.该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1mL,敏感性比病毒分离法高10倍.而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应.用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1％,表明该方法具有良好的重复性.采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致.因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持.本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染.     

吉林省梅河口地区夜蛾科名录

近年来通过灯诱、网扫和食物诱引对梅河口地区鳞翅目昆虫采集调查,整理出154种夜蛾科种类,在此列出详细名录。     

猪瘟病毒E0基因在CHO细胞中的表达

将EGFPE0融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0。将重组质粒转染CHO(dhfr-),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功。通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,表明重组融合蛋白EGFPE0在CHO细胞中得到大量表达。高效表达重组融合蛋白细胞克隆的获得为进一步大量制备可溶性的猪瘟病毒E0糖蛋白、制备其单抗筛选抗原表位及研究E0蛋白的生物学功能奠定基础。     

珍珠鸡MHC Ⅰ轻链基因的克隆、可溶性表达与纯化

为了构建珍珠鸡MHCⅠ轻链β2m成熟肽基因的原核表达载体并在大肠杆菌中实现可溶性的表达,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从鸡脾脏中提取总RNA,以总RNA为模板,5’-ATC TAG AGG TAC CGG ATC C-(T)15-3’为反转录引物,采用T aK aR a AM V反转录酶合成F irst-strand cDNA(fcDNA)。根据G enB ank中登录的鸡的β2m基因序列,设计了分别含E coRⅠ和H indⅢ酶切位点的一对引物,分别扩增鸡β2m的成熟肽基因。PCR产物经纯化回收后,插入到含L acZ基因的原核克隆载体pGEM-T E asy中,转化至大肠杆菌JM 109感受态细胞,经E coRⅠ和H indⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆。再把所克隆的片断亚克隆到表达载体pM AL-p2X,构建重组表达质粒p2Xβ-2m。将重组表达质粒转化入大肠杆菌E.coli TB 1感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果表明,本研究克隆了鸡β2m成熟肽基因序列,全长约297bp,编码约98个氨基酸,并可溶性表达了鸡β2m成熟肽蛋白质分子。采用淀粉树脂柱亲和层析和DEAE凝胶过滤方法对表达产物进行了纯化,并对纯化的表达产物进行了W estern b lot鉴定。本研究为进一步利用BF 2的胞外区在体外共同构建MHCⅠ类分子结合筛选抗原表位肽平台奠定了基础。     

泸州烤烟单叶重现状分析与生产建议

为了分析泸州烤烟单叶重调查数据,明确的单叶重现状,提出生产建议,在烘烤工场对上、中、下3个部位的烟叶,以及在8个收购站点对X2F、X3F、C2F、C3F、C3L、C4F、B2F、B3F等8个收购等级的烟叶单叶重进行调查,并与我国烤烟单叶重进行对比分析。结果表明,泸州烤烟下部、中部、上部烟叶的单叶重分别在7.0g至9.0g、11.01g至13.0g、12.0g至14.0g之间。下部叶X2F、X3F等2个等级的平均值为8.65g,中部烟叶C2F、C3F、C3L、C4F等4个等级烟叶的单叶重平均值为11.85g,上部叶B2F、B3F等2个等级的平均值为9.39g。本结果说明,泸州烤烟单叶重基本适宜,但上部烟叶单叶重略低,应通过采取平衡施肥、合理密植、适时打顶、科学留叶等农艺措施加以调控。