牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5＇UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化.该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1mL,敏感性比病毒分离法高10倍.而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应.用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1％,表明该方法具有良好的重复性.采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致.因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持.本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染.     

鲤鱼春季病毒血症的诊断与防治方法

鲤鱼春季病毒血症(Spring Viremia of Carp:SVC)是流行于欧洲各国,严重危害鲤鱼养殖业的病毒病。病原为弹状病毒科狂犬病毒属的鲤弹状病毒(Rhabdovirus Carpio)。该病毒有鲤春弹状病毒(SVCV)和棱子鱼苗弹状病毒(PFRV)两个血清型。近年来,日本等亚洲国家养殖的鲤鱼也出现了类似该病的症状,     

辐照含脂食品中2-十二烷基环丁酮测定方法研究

辐照含脂食品中2-十二烷基环丁酮测定方法研究结果表明:随着离心转速提高,目标物回收率呈下降趋势,但下降趋势不大;随着温度的降低,去脂率逐渐升高,回收率逐渐降低。层析柱的条件确定为:佛罗里硅去活化水为10%,弗罗里硅土用量为3 g,淋洗液为45 mL,柱直径为1.5 cm。方法的检出下限为:7μg/kg。不同样品、不同添加量,回收率在84.26%~112.30%,回收率总体情况满意。不同样品,在辐照剂量均为10 kGy的情况下,2-十二烷基环丁酮的含量不同,在所选择的7种样品中,花生、饼干、沙琪玛中2-十二烷基环丁酮的含量较高,而以鱼肉中2-十二烷基环丁酮的含量最低。     

三黄鸡CD8α/βcDNA克隆与表达及其多克隆抗体的制备

为了获得鸡CD8α/β蛋白及其多克隆抗体,进一步研究其结构与功能,本实验从三黄鸡cDNA文库中克隆了其CD8α/β胞外区片段,构建了pQE30/ChCD8α/β原核表达系统,并经诱导表达、亲和层析纯化,获得了纯化的重组蛋白(rChCD8α/β),然后用rChCD8α/β分别免疫Balb/c小鼠制备了其多克隆抗体。结果表明:本实验克隆的ChCD8α长483 bp、编码161个氨基酸、可在E.coliJM109中高效表达,蛋白质分子质量为24.0 ku,表达量占菌体蛋白量的25.0%,由该蛋白质所制备的多克隆抗体抗rChCD8α的ELISA效价为1∶1 024 000;另外,克隆的ChCD8β长447 bp,编码149个氨基酸,蛋白质的分子质量为18.5 ku,表达量占菌体蛋白量的20.0%,抗rChCD8β多克隆抗体ELISA效价为1∶64 000。本实验所得鸡CD8α/β的多克隆抗体将用于四聚体研究。     

美国食葵栽培技术

1、玉米为独棵单穗,穗数调节能力差的作物。分蘖力强或者分枝多的作物如小麦等,它们的分蘖能成穗,穗多的自动调节能力比较强,每亩播种量不同,最后形成的穗数却比较接近,获得较高的产量。可是目前推广的玉米品种很少有分蘖,多为1棵1穗,虽然有时也有个别植株能形成2个穗,但为数太少,玉米穗的自动调节能力太差,基本上是留苗棵数就是收获时的穗数,有时还会由于病虫危害,管理过程的损伤、空秆等原因,造成收获的穗数往往少于留苗的棵数。因此,玉米通过增加种植棵数来保穗数比小麦、水稻、棉花、大豆等作物更重要。     

两种植物生长调节剂及用量对烟草幼苗根系发育的影响

为了研究植物生长调节剂在烟草育苗过程中的作用,探究其对烟草幼苗根系生长发育的影响。在烟草漂浮育苗营养液中分别添加两种植物生长调节剂ABT（主要成分为萘乙酸和吲哚乙酸）和GGR（主要成分为吲哚乙酸）,分别划分五个浓度梯度(0、10、20、30、40、50 mg·L^-1),研究其对烟草幼苗根系发育的影响。随着ABT和GGR浓度的增加,烟草幼苗根系生理、根系活力和酶活性指标均呈先增加后减少的趋势。植物生长调节剂ABT和GGR均在20 mg·L^-1处理时显著提升了根系活力,显著增加了烟苗的根鲜重、根长度、根表面积、根体积,提高了烟苗根系SOD、POD和CAT活性,增加了可溶性蛋白含量,降低了MDA含量。研究结果表明,ABT与GGR相比,GGR对烟草幼苗各项指标的提升效果更佳,因此在该试验条件下,推荐在实际育苗生产中,向烟草漂浮育苗营养液中添加浓度为20 mg·L^-1的植物生长调节剂GGR,可大幅度促进烟苗根系发育。     

北京长白杂交猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建

根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2 CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2 CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2 CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2 CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%.     

Mx蛋白研究进展

Mx蛋白是干扰素诱导表达的抗病毒蛋白家族中的成员之一。人、哺乳动物、鱼类、家禽体内都有Mx蛋白。Mx蛋白具有GTP酶活性 ,在其肽链氨基端均包含一个氨基酸序列高度保守的的三联GTP结合区域 ,羧基端存在有亮氨酸拉链区域。人和鼠的Mx蛋白有抗病毒活性。家禽中鸭的Mx蛋白无抗病毒活性 ;鸡的Mx蛋白的抗病毒活性受 6 31位氨基酸的影响 ,当 6 31位氨基酸为天冬酰胺时有抗病毒活性 ,为丝氨酸时则无抗病毒活性。文章最后对禽类Mx蛋白的应用和展望进行了探讨     

鳗鲡淋巴细胞表面存在不同表型的免疫球蛋白

鳗鲡淋巴细胞表面存在不同表型的免疫球蛋白夏春（中国农业大学动物医学院，北京１０００９４）川合研，楠田理一（日本高知大学农学部，日本７８３）关键词鳗鲡，淋巴细胞，单克隆抗体，表面免疫球蛋白ＥＥＬＬＹＭＰＨＯＣＹＴＥＳＤＩＦＦＥＲＥＮＣＥＩＮＴＨＥＥＸＰ...     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究——疫苗株的免疫原性及其有效免疫剂量的比较

本文比较了疫苗株FR—854和FR—836—w的免疫原性,及其对三寸左右草鱼种的有效免疫剂量。疫苗株FR—854和FR—836—w均有较强的免疫原性,其保护力可达70%以上。但试验结果初步证明,FR—854疫苗比FR—836—w疫苗免疫原性更强。经统计分析,FR—854疫苗的免疫保护力可达88.9±12.0（6）%,血清中和抗体效价为160.5±58.9（6）;而FR-838-W疫苗分别只有71.3±14.2（6）%、88.3±26.2（6）;二者有显著的差异（0.05>P>0.01）。注射免疫三寸左右的草鱼种,FR—854的免疫剂量在3—5×10^4.5TCID0/尾左右,FR—836—w在3—5×107.5TCID₅₀/尾左右,其免疫保护力可达80%左右,同时我们测得ER—854的半数免疫量为10^5.1TCID₅₀/ml。