GNA和ACA双价转基因烟草培育及其抗蚜研究

蚜虫是一种常见的农作物害虫,作为多种植物病毒的载体而成为影响农业发展的重要害虫之一,对蚜虫的防治一直是众多科学工作者所面对的难题。构建了雪花莲凝集素(GNA)和苋菜凝集素(ACA)双价植物表达载体pBI121-GA,在农杆菌介导下,叶盘法转化烟草NC89,得到卡那霉素抗性植株65株。通过基因组PCR、ELISA、RT-PCR和Western-blot等分子生物学检测,从中筛选出外源凝集素不同表达水平的转基因烟草5株。对筛选出的5株转基因烟草植株进行初步蚜虫抗性实验,证实转基因烟草对桃蚜表现出一定的抗性,最高抑制率达85.8%,为农作物双价抗蚜基因的应用研究提供一定的理论基础。     

大豆KTi基因和SBA基因双价RNAi表达载体的构建

本研究采用RT-PCR技术克隆大豆KTi和SBA基因的核心保守序列,序列分析表明,KTi基因片段为324bp,SBA基因片段为515bp;利用RNAi技术,结合种子特异性启动子,构建同时具有KTi基因和SBA基因反向重复结构的双价RNAi种子特异性表达载体pCAMBIA3301-KTi-SBA(pKTi-SBA)。通过酶切检测及测序,证明双价RNAi种子特异性表达载体构建成功。本研究为通过RNAi技术同时降低大豆种子中胰蛋白酶抑制剂和凝集素含量,改良大豆品质奠定基础。     

α-半乳糖苷酶在饲料工业中的应用与基因工程研究进展

<正>我国饲料类型大多以玉米-豆粕型为主,其中原料大豆具有粗蛋白含量高、富含赖氨酸及氨基酸含量平衡等营养特点,是很好的蛋白质饲料来源。但豆粕及杂粕类饲料中α-半乳糖苷糖类含量也相对较高。α-半乳糖苷在饲料中是一种抗营养因子,简单的加工方法难以将其分解,当摄入之后,因微生物的厌氧发酵导致动物肠胃胀气、腹痛、肠鸣、腹泻等,不仅会导     

猕猴桃GalUR表达与抗坏血酸积累的关系

 通过RT-PCR从美味猕猴桃（Actinidia deliciosa）果实中克隆了D–半乳糖醛酸还原酶（GalUR）全长 cDNA序列,并分析其序列特征,进行原核表达,制备特异抗体,分析其mRNA及蛋白表达水平与果实发育过程及不同组织中抗坏血酸（AsA）合成和积累的关系。结果表明：克隆的GalUR cDNA（GenBank登录号为GU339035）包含的最大开放阅读框（open reading frame,ORF）为990 bp,编码329个氨基酸残基,预测分子量为37 kD,与报道的草莓等其他植物GalUR具有较高的相似性。构建的pET-32a（＋）-GalUR载体在大肠杆菌BL21（E. coli BL21）中异源表达后,获得了主要以包涵体存在约58 kD的融合蛋白GalUR-His（His约21 kD）。以该蛋白制备抗体,与重组蛋白的Western杂交表明该抗体能与GalUR蛋白发生特异反应。对猕猴桃可溶性蛋白杂交显示,猕猴桃体内GalUR蛋白的分子量约37 kD。在猕猴桃不同组织和发育过程中,GalUR表达水平与AsA含量表现为高度一致,但前体饲喂发现,与L–半乳糖相比,D–半乳糖醛酸并不能有效促进猕猴桃AsA的合成。这些结果表明以单体形式存在的GalUR与猕猴桃AsA合成有着密切关系,但它可能并不是猕猴桃AsA积累的主要调控环节。     

用于筛选植物PGIP的酵母双杂交PGase诱饵载体

对真菌抗性较强的植物能利用自身的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(po lyga lacturonase-inh ib iting prote in,PG IP)来抑制真菌分泌的、降解植物细胞壁的主要物质——多聚半乳糖醛酸酶(po lyga lacturonase,PG ase)的活性.目前,快速、有效的获取植物PG IP的方法是通过酵母双杂交技术来进行的,而这首先要获得真菌PG ase的酵母诱饵载体.以真菌——互格链格孢PG ase的cDNA的为基础,将其克隆到M ATCHM AKER L exA Tw o-Hybrid System的诱饵载体中,并将诱饵载体(pL exA-PG ase)成功转化酵母菌株EGY 478[p8op-lacZ],经检测无自激活作用,可直接用于快速、大量地筛选植物PG IP.     

刺槐种子中凝集素的纯化及性质研究

从刺槐(RobiniapseudoacaciaL.)的种子中分离纯化出2种凝集素RPsAⅠ和RPsAⅡ。种子经磨碎、过滤、离心、硫酸铵分级、透析、Sepharose4B离子交换和SephadexG 150分子筛层析,即可获得在PAGE和SDS PAGE上均呈现单一蛋白染色带的凝集素纯品,分子筛层析测得RPsAⅠ和RPsAⅡ的分子量分别为132000和130000,SDS PAGE测得亚基分子量分别为38000和31000。当2种凝集素的质量浓度分别达到7 80μg/mL和15 60μg/mL时能凝集兔血红细胞,凝集活性均可被L 阿拉伯糖、D 果糖、D 半乳糖、麦芽糖抑制;热稳定性实验结果表明2种凝集素对热处理均具有一定的稳定性;当pH>9和pH<5时,它们的活性都明显降低。     

香蕉和药草有助于阻止艾滋病毒传播

2010年3月19日发表在《生物化学》上的一项研究报告指出,一种结合到糖上的蛋白质——香蕉凝集素（lectin）也可以结合被艾滋病毒（HIV）感染的细胞,阻止其复制和传播。已有几项研究发现,从其他多种药草和植物如牛膝草、松果、美洲商陆、     

人工合成gna基因在小麦中的表达及其抗蚜虫效果研究

利用经密码子优化的、人工合成雪花莲凝集素(Galanthusnivalisagglutinin),gna基因及RbcS启动子构建了高效特异表达载体pBAC202,通过基因枪轰击小麦幼胚和幼穗,将外源gna基因导入到3个高产小麦(TriticumaestivumL.)品种中,获得42个转基因后代株系。对转基因后代植株进行了DNA点杂交、PCR及PCR-Southern验证,确认外源gna基因已成功地整合到小麦基因组中。进一步的凝集素活性检测表明,小麦叶片中表达的凝集素可使红细胞凝集,并具有正常的生物学活性。转基因植株在人工饲养条件下进行抗蚜虫(Rhopalosiphumpadi)试验,蚜口密度抑制率从19%～73%不等,部分株系抑虫效果较好。利用转基因的方式可将外源抗虫基因gna导入到小麦中,并可有效地增强小麦的抗蚜能力,为选育具抗虫特性的优质小麦提供新的途径。     

中药复方对衰老小鼠部分组织中SOD活性和MDA含量的影响

衰老是生物体在生命周期中随着年龄的增长而发生的全身组织、器官功能减退和稳态下降的过程。随着衰老的发生,动物表现为生产能力下降,抵抗力下降,血液中一些酶的活性降低[1]。研究表明,随着年龄的增长,体内超氧化物歧化酶(SOD)的活性降     

小麦条锈菌吸器分离方法研究

[目的]从小麦条锈菌侵染的叶片中分离纯度较高且结构较完整的吸器.[方法]根据锈菌吸器表面含有可以与伴刀豆球蛋白凝集素(Concanavalin A)结合的糖类物质的特性,参照蚕豆锈菌吸器的分离方法对小麦条锈菌吸器进行了分离.[结果]从被条锈菌侵染小麦叶片中成功分离出条锈菌吸器,提取吸器的纯度为83.3％,提取率为5.0×105个/g小麦叶片鲜重.[结论]根据蚕豆锈菌吸器的分离方法,稍作改进,成功分离得到小麦条锈茵吸器,为小麦条锈菌功能基因组学及其致病机制的研究奠定了基础.