大豆KTi基因和BBi基因双价RNAi表达载体的构建

以KTi基因的ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GUS-KTiS为模板,采用PCR技术克隆含有KTi基因的完整ihpRNA构件,并将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并进行序列比对;然后以BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS为基础,利用限制性内切酶BstⅪ单酶切,将KTi基因的完整ihpRNA构件连入其中。最后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。结果表明:PCR扩增得到含有KTi基因的完整ihpRNA构件,构建成重组克隆载体pMD18-T-KRNAi,并构建成双价ihpRNA种子特异性表达载体pKTi-BBi-RNAi,并转化得到含有pKTi-BBi-RNAi的农杆菌EHA105。成功构建同时具有大豆胰蛋白酶抑制剂KTi基因和BBi基因的双价RNAi种子特异性表达载体,KTi基因和BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入农杆菌中。     

NPR1基因植物表达载体构建及对玉米的遗传转化

为了提高玉米的广谱抗病性,从拟南芥中克隆NPR1基因,构建以bar基因为筛选标记的植物表达载体pCAMBIA3301-NPR1,通过农杆菌介导法将pCAMBIA3301-NPR1转入玉米自交系‘H99’的愈伤组织中,用含10mg/mL草胺磷的筛选培养基进行筛选,共获得34株再生植株;经过PCR和RT-PCR鉴定,得到14株RT-PCR阳性植株。结果表明,NPR1基因在玉米中得到表达。     

冠突曲霉flbD基因功能研究

冠突曲霉是茯砖茶上的优势菌,可通过渗透压调控获得纯的无性和有性阶段,是研究真菌产孢的好材料.flbD基因广泛存在于丝状真菌中,是调控丝状真菌无性孢子形成的关键基因.为了探究flbD基因在冠突曲霉(Aspergillus cristatus)发育阶段的功能,以冠突曲霉为试验材料,构建flbD基因敲除载体,利用根癌农杆菌介...     

春尺蠖小热激蛋白基因AcinHsp19.4的表达与序列分析

小分子热激蛋白(small heat shock protein,sHSP)在昆虫抵御外界不利环境中具有重要作用。为深入探究该基因在春尺蠖耐饥饿胁迫的作用机理,本研究基于已有不同时间饥饿处理下的转录组数据,筛选得到sHSP,命名AcinHsp19.4(GenBank登录号:MW336984),分析其分子特征并构建系统进化树,同时分析了该基因在不同时间饥饿处理下的表达谱。结果显示,春尺蠖AcinHsp19.4基因序列全长516 bp,共编码171个氨基酸,具有小分子热激蛋白保守的α-晶体结构域,在N端不含信号肽且无跨膜区。系统进化结果表明,春尺蠖AcinHsp19.4与桦尺蛾BbetHsp19.4亲缘关系最近。该基因在饥饿处理72 h后,表达量显著上调。研究结果说明,AcinHsp19.4参与春尺蠖的生长发育过程,并可能在春尺蠖应对饥饿胁迫的抗逆机制中扮演重要角色。     

抗菌肽Cryptonin基因真核表达载体的构建

根据Cryptonin氨基酸序列,选用毕赤酵母偏爱密码子,人工设计并合成了抗菌肽Cryp-tonin基因。按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA上,经PCR、双酶切验证及序列分析,所转化的DH5α中含有插入Cryptonin基因的重组质粒pPICZαA-Cry,结果表明:成功构建了抗菌肽Cryptonin基因真核表达载体pPICZαA-Cry。     

高产海藻糖突变菌株YUV3海藻糖合酶基因克隆及原核表达

海藻糖合酶(Trehalose synthase,TreS)属于α-淀粉酶家族(α-amylase family),是生物体内通过TreS途径生成海藻糖的一种酶类。利用PCR技术,从本试验室筛出的高产海藻糖突变菌株YUV3中扩增了海藻糖合酶基因(TresY),将其克隆到原核表达载体pET-28a(+),得到重组质粒P-TresY,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子量约为110kDa的特异条带,并经Western blotting分析鉴定,表明成功构建重组质粒P-TresY并在大肠杆菌中表达,为进一步的研究奠定基础。     

德式乳杆菌D-乳酸脱氢酶基因的克隆与表达

利用PCR的方法从德式乳杆菌的DNA中扩增得到D-乳酸脱氢酶基因,构建重组克隆质粒(pMD19-T-DLDH),转化DH5α进行蓝白斑筛选,得到阳性克隆提取质粒双酶切验证。连接pET-32a表达质粒,构建重组表达质粒,提取质粒双酶切、测序验证,测序结果与原序列基本相符。得到重组表达质粒pET-32-DLDH转化BL21大肠杆菌IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有明显大小约为19Ku特异蛋白条带。     

再生水利用对环境中抗生素抗性基因影响的研究进展

基于再生水利用对抗生素抗性基因的迁移转化规律及机制研究的大量文献,对当前再生水利用对环境中抗生素抗性基因影响的研究进行了较为系统的总结与分析,并对再生水利用过程中影响抗生素抗性基因传播扩散的再生水系统、环境污染物和环境因子等因素进行了简要分析。同时,在分析目前研究进展的基础上展望了今后的研究重点:灌溉技术、灌溉制度对土壤和作物体内抗生素抗性基因的影响;长期利用再生水对地下水中微生物群落结构和抗生素抗性基因的影响;抗生素抗性基因在再生水-土壤-作物系统中的迁移转化。     

不同外源性试剂对大豆种子萌发的影响

根据外源性试剂对大豆种子萌发影响的试验和研究,探讨大蒜鳞茎浸提液、丁香酸、阿魏酸、中药材浸出液等外源性试剂对大豆种子萌发和幼苗生长的影响及其规律,为进一步开展大豆种子萌发相关研究提供理论参考。     

大豆种子清选机的设计及改进

在简介国内外大豆清选技术的基础上,设计3LD-ZP型大豆种子清选机。介绍大豆种子清选机的结构组成、工作过程及主要影响因素,提出结构改进方案,为提高大豆种子的分选质量提供适用机具。     

毕赤酵母高表达载体与高产β-甘露聚糖酶菌株的构建

本研究利用基因工程技术对pPIC9K载体进行改造,以提高β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达量,从而得到高产的β-甘露聚糖酶基因工程菌。     

大豆种子颗粒物理性质对其运动的影响研究

介绍了一种对种子运动的分析方案,在对该方案进行系统的阐述及其合理性的分析的基础上,找出其中存在的不足,运用数学手段和物理方法做进一步分析。同时,考虑多方面的因素,以大豆种子为研究对象,对其做一系列理论分析,得出大豆种子运动速度的表达式并提出影响其运动的各内在因素和外在因素,以说明实例中分析方案的不足之处,并对起决定作用的内在因素进行了分析。之后,从大豆种子自身的影响因素出发进行了一系列实验和统计分析,说明了种子的物理性质对其运动产生显著影响,即质点化研究对于种子来说是不可取的。最终,提出种子颗粒自身物理性质对其运动的影响方式和影响力度,从而为相关的机械设计提供理论参考。     

利用Shuffling技术改良纤维素葡聚糖内切酶(EGI)酶活

本文以纤维素葡聚糖内切酶基因为基础,利用shuffling改组技术,经过DNaseI降解、PrimerlessPCR、TouchdownPCR对纤维素内切酶基因进行了突变和改组,然后将改组的纤维素内切酶基因插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建了重组子突变体库。通过羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基的分离筛选,得到活性比较高的纤维素葡聚糖酶菌株。对这些菌株通过3,5-二硝基水杨酸法(DNS)进行酶活检测,成功获到比原来酶活高5.75倍的菌株,酶活表达量56.52U/mL,对其诱导表达条件进行优化结果表明在50℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度为0.1mmol/L条件下,酶的产量最高。     

基于最小误差分析法的城市道路汽车行驶工况构建方法研究

为优化汽车行驶性能,构建反映真实道路情况的汽车行驶工况和汽车运动评估体系,本研究提出了一种基于最小误差分析的汽车行驶工况构建方法.首先利用删除或插值补充的方式对异常数据进行处理,消除数据采集时的误差,同时根据运动学片段的定义对处理后的数据进行运动学片段划分;其次为降低特征参数的数量,简化计算,采用主成分分析对所给9种特...     

黑龙江省大豆玉米轮作轮耕机械化生产工艺方案设计

随着种植大豆玉米效益的变化,黑龙江省垄作区种植结构也相应进行了调整。因此,根据玉米、大豆种植比例及生长需求,研究轮作轮耕制度及对应的机械化作业工艺与规范对地区农业生产及农业机械化发展具有重要意义。在充分调研和查阅大量文献的基础上,以构建黑龙江省土壤合理耕层结构,保证大豆、玉米生产需求为目标,筛选和凝炼了适合目前种植结构的大豆-玉米轮作方式,并结合大豆、玉米收后茬地特点及后茬作物生长需求,确定该区域不同轮作制度对应的机械化耕整地技术与模式,并以此为基础,研究确定与轮作耕作制度相应的大豆、玉米生产机械化作业工艺过程及规范。本研究旨在为推进黑龙江省垄作区大豆玉米生产机械化生产水平提供依据,为提高农业效益、促进种植结构调整提供技术基础。     

种子包衣机的结构及应用

种子常常会受到真菌、细菌的侵害或遭虫咬,因此,对种子进行化学药剂处理成为种子保护的重要措施之一,而最早的方法是用手工拌种,这种方法既增加了劳动强度,又存在不安全因素,因此种子用机械进行消毒处理是最有效、最经济的办法。种子进行化学药剂处理也叫种子包衣,它是以种子为载体、种衣剂(化学药剂)为原料、机械混合为手段,集生物、化工、机械等技术为一体的综合技术,该机适用于水稻、小麦、玉米、大豆、花生、高粱、蔬菜籽等种子的包衣。1种子包衣机的结构种子包衣机(以5BYJ-3.0型为例)是由药桶和供药系统,喂料斗和计量药箱、雾化装置…     

大豆种子精选的重要性与机械化精选技术特征

随着国民经济和社会生产能力的快速进步,社会对于生产生活资源的需求量明显增加,大豆作为重要的农业食品和原材料产物,其优产稳产的意义更为重大.种子是大豆生产实施的基础,种子的质量直接关系到大豆的最终产量与产出品质,传统的种子筛选技术无法实现高精度选种的要求,会在一定程度上影响播种质量.因此,从大豆精选的技术和方法出发,分析...     

我国转基因大豆研究进展

转基因大豆相较于传统大豆在产量、抗逆性、经济效益等方面具有明显优势,已被越来越多的国家和地区所接受。概述转基因大豆的遗传转化方法和转人大豆的外源基因类型,并对转基因大豆的发展趋势进行了展望。     

无人机在大豆植保作业中的适用性评价体系研究

本论文通过研究和分析构建大豆植保无人机的适用性评价体系,提出了评价大豆植保无人机适用性的3个指标:匀速飞行速度波动、喷雾沉降量、喷雾均匀性.并提出了各性能指标的量化方法.通过运用德尔菲法和层次分析法相结合构成的综合权重分析法以及yaAHP权重分析软件对大豆植保无人机适用性评价的3个性能指标进行了权重分析,研究结果显示对...     

大豆精选工艺与设备的研究

通过研究大豆种子的带式分选工艺,商品大豆的组合螺旋分选工艺和选后分级工艺,以及大豆精选中的带式分选机、组合螺旋分选机及开式提升机等关键设备的应用,可以显著提升精选后成品净度。