聚γ谷氨酸生物合成与DegR关系及其免疫佐剂效果研究

为探讨调节因子DegR对聚γ谷氨酸(γ-PGA)生物合成产量的影响,比较聚γ谷氨酸佐剂和传统铝佐剂的辅助免疫效果,利用P43启动子构建了穿梭表达载体pHY-degR,通过电转化地衣芽胞杆菌WX-02获得重组菌株WX-02/pHYdegR。同时以福尔马林灭活的金黄色葡萄球菌蛋白疫苗作为免疫原,分别以不同分子质量聚γ谷氨酸佐剂和铝佐剂制备相关疫苗并免疫小鼠,7d后注射金黄色葡萄球菌,根据小鼠死亡数,计算其相对免疫保护率。结果显示,过表达degR后,聚γ谷氨酸生物合成产量提高至28.5g/L,相比对照菌株WX-02/pHY300提高22.6%。分子质量2×10~3 ku聚γ谷氨酸作为佐剂的相对免疫保护率效果最好(78.9%),优于铝佐剂免疫保护率(52.6%)和未添加佐剂免疫保护率(42.1%)。结果表明,过表达degR基因能提高聚γ谷氨酸生物合成量,且聚γ谷氨酸作为疫苗佐剂能增强疫苗免疫效果,可作为理想的疫苗佐剂。     

牛流行热病毒法国佐剂灭活疫苗的研制

用法国赛比克公司提供的ｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５０佐剂和白油司盘佐剂配蝗灭活疫苗对牛进行免疫试验，通过临床观察和血甭中和抗体跟踪检测，结果表明，用Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５０佐剂配制的疫苗在保持免疫效果的基础上，在降低疫苗接种反应上明显优于白油佐剂灭活苗，同时该轩在４℃保存４个月仍能保持良好免疫效果。     

新型农用有机硅喷雾助剂在苹果上的安全性研究

对美国迈图高新材料集团开发的Silwet系列有机硅农用喷雾助剂杰效利、喜施和丝润在不同品种苹果上套袋前单独使用、与不同杀虫剂混用及套袋后单独使用的安全性进行了评价。结果表明:杰效利、喜施和丝润套袋前单独使用对不同品种苹果幼果安全性表现一致,不同参试浓度对"嘎啦"、"乔纳金"幼果均未产生药害,但在苹果"红富士"品种上,500～2 000倍产生药害,且药害程度随用量提高而增加;与48%毒死蜱EC混用及单独喷施毒死蜱,在幼果表面果点处均产生不同程度的药害;套袋后使用有机硅助剂对果实和果袋均无不良影响。     

猪IL-10的表达及其免疫原性鉴定

为探明原核表达的重组猪IL-10对仔猪的免疫原性,根据GenBank公布的猪IL-10基因序列(登录号:L20001)设计并合成了扩增猪IL-10基因的引物。利用ConA刺激猪外周血淋巴细胞,通过RT-PCR扩增出pmIL-10完整基因及其成熟蛋白基因片段(pmIL-10),分别插入质粒pVAX1和pET32α(+),对猪IL-10基因进行原核与真核表达。利用纯化的重组蛋白免疫仔猪,制备抗血清,利用间接ELISA检测血清效价。将pVAX-pIL-10转染COS-7细胞,利用RT-PCR检测pmIL-10的转录,以间接免疫荧光(IFA)鉴定其与原核表达产物制备抗体之间的反应。结果显示:该试验成功获得了猪IL-10基因,重组菌pET-pmIL-10/Rosetta经IPTG诱导后,猪IL-10获得表达,目的蛋白表达量以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的39.7%;以白油佐剂重组蛋白免疫仔猪可产生高水平的抗猪IL-10的抗体,经ELISA检测,P/N值可达到8,OD630吸光值可达1.875,该抗体与转染pVAX-pmIL-10的COS-7细胞发生明显的荧光反应,说明原核表达的重组猪IL-10免疫产生的抗体具有生物学活性,为日后利用猪IL-10抗体消除病毒感染中产生的内源性IL-10研究奠定了基础。     

猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗保存期试验

将猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗在2～8℃保存12～15个月后,进行了物理性状、无菌检验、安全检验及效力检验,检验结果符合<中华人民共和国兽用生物制品质量标准>.     

水稻白叶枯病菌鸡卵黄抗体的制备及其初步应用

 通过免疫产蛋母鸡制备了针对水稻白叶枯病菌菌株ZJ-173的卵黄抗体(IgY),比较了一种中草药佐剂和福氏佐剂对抗体产生和效价的影响。结果表明:与福氏佐剂相比,中草药佐剂对免疫母鸡的生活力和产蛋影响较小,母鸡恢复产蛋较早(免疫后7天)。卵黄中抗体出现后,两种佐剂处理的抗体都能在抗体出现后15天达到较高效价,并维持较高效价达2个月以上。卵黄抗体经PEG方法提纯后可得到比较纯净的IgY。提纯的IgY蛋白含量平均为11.843mg/ml,双扩散效价为1:128~512。将卵黄抗体IgY作为包被抗体用于异动物抗体双夹心ELISA可有效地检测水稻病叶病种上的白叶枯病菌,其检测灵敏度为10⁴cfu/ml。     

犊牛腹泻大肠杆菌疫苗的研制与应用

根据南京地区犊牛大肠杆菌腹泻流行病学调查结果,用分离鉴定的犊牛腹泻菌株O78、O26、O15大肠杆菌作菌种,制备油乳灭活疫苗,接种初生犊牛预防犊牛大肠杆菌腹泻。结果表明制备的大肠杆菌油乳灭活疫苗接种初生犊牛能产生良好的免疫保护。     

三种佐剂对鸡体液免疫影响的比较

佐剂是疫苗的重要组成部分,不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用.选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力.本试验选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐剂分别与灭活的新城疫病毒制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐剂对鸡体液免疫的影响.结果表明,试验组鸡抗体水平高,饲养至61日龄均未发生新城疫,其中弗氏佐剂的效果最好,蜂胶佐剂的效果次之,油佐剂的效果最次.     

Toll样或非Toll样配体佐剂研究进展

有效的疫苗含有可活化天然免疫系统的佐剂组分,从而激发抗原特异性的免疫应答.Toll样受体(toll-like receptors,TLR)是一种重要的天然识别受体,大多数疫苗佐剂都是TLR配体.少数佐剂通过其他的识别受体和信号通路,以TLR非依赖性的方式来活化天然免疫系统.非Toll样配体佐剂的作用靶点主要是近来发现的NOD样受体(Nod-like receptor,NLR)、RIG(retinoic-acid-inducible gene)样受体(RIG-like receptors,RLR)等胞内天然免疫受体.文章对Toll样或非Toll样配体作为疫苗佐剂的研究进行了综述.     

鼻腔免疫禽流感灭活疫苗对鸡呼吸道肥大细胞分布的影响

用添加CpG的禽流感病毒（H5亚型）灭活疫苗对7日龄罗曼公鸡进行鼻腔免疫，14日龄加强免疫一次；分别于首免后第3、5、7周剖杀，取鼻腔、喉部、气管、气管叉及肺组织，通过甲苯胺蓝染色法显示肥大细胞，观察呼吸道各部位肥大细胞的分布及数量变化。结果显示，首免后第3周气管和气管叉黏膜中的肥大细胞数量显著增加（P〈0．05），第5周时喉部和气管叉黏膜中的肥大细胞数量显著增加（P〈0．05），气管黏膜中肥大细胞数量也极显著增加（P〈0．01），第7周肺中的肥大细胞数量显著增加（P〈0．05）；肥大细胞的数量在喉部最多，气管叉次之，气管和肺较少。试验结果表明，局部黏膜免疫可增加呼吸道肥大细胞的数量，肥大细胞可能参与黏膜免疫反应。