H9N2亚型禽流感病毒NS1基因真核表达载体的构建及其在293细胞瞬时表达

在293细胞中瞬时表达A/Chicken/Henan/1001/2010（H9N2）NS1基因蛋白,并对表达蛋白活性进行测定。试验利用PCR技术从NS1-T载体质粒上扩增NS1基因,将其克隆至pCAGGS载体,构建重组质粒NS1-pCAGGS;经酶切和测序鉴定正确后,重组质粒NS1-pCAGGS与脂质体按照一定比例混合后转染293细胞,用间接免疫荧光方法对瞬时表达细胞进行荧光信号反应。结果显示,禽流感NS1基因可以很好地在293细胞中瞬时表达,具有良好的反应原性。     

重庆市禽白血病及禽网状内皮组织增生症的血清流行病学调查

禽白血病和禽网状内皮组织增生症均为禽的肿瘤性免疫抑制疾病,是危害养鸡业的两种非常重要的病毒性传染病。为调查重庆市肉鸡中禽白血病及禽网状内皮组织增生症的流行情况,在北碚区、涪陵区、开县、垫江县、潼南县五个区（县）的8个活禽交易市场采集260份血清样本,采用酶联免疫吸附试验检测了所有血清中禽白血病病毒（ALV）和禽网状内皮组织增生病毒（REV）的抗体。检测结果显示：禽白血病病毒和禽网状内皮组织增生病毒抗体阳性率分别为16.5%（43/260）和5%（13/260）,双抗体阳性率为4.61%（12/260）。与全国其他地区相比,重庆市肉鸡中这两种病原的感染率相对要低,但仍应重视这两种疾病的防控,以控制病原的进一步传播。     

H9亚型禽流感病毒钦州株HA基因的克隆与遗传进化

采集钦州活禽交易市场的鸡气管和泄殖腔的棉拭予样品,用H9亚型分型引物进行PCR初步筛选,阳性样品经SPF鸡胚尿囊腔接种分离病毒,通过RT-PCR方法扩增HA基因,并将其克隆到pMD—18T载体后进行序列测定和分析。结果表明,获得1株H9亚型禽流感病毒命名为：A／Chicken／Guangxi／qz40／2009（简称qz40）。测序结果表明qz40的HA基因片段全长1683bp,编码560个氨基酸;序列同源性比较结果表明,该毒株与参考毒株的核苷酸序列同源性为82．8％．99．9％,推导氨基酸同源性为87．5％．99．6％;HA基因的裂解位点氨基酸顺序为RSSRIGLF,为低致病性毒株;含有7个潜在的N-糖基化位点,其中5个位于HAl部分、2个位于HA2部分;基于H9亚型HA基因的进化树分析表明,qz40株属于欧亚种系的A／Chicken／Beijing／1／94（Ck／Bei—like）群系。     

一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒分离株的全基因组序列分析及致病性的研究

本研究对2012年从湖南活禽市场中分离到的一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒(AIV)A/duck/HuN/S3160/2012(H8N4)进行全基因组序列和进化分析,并对其进行SPF鸡、SPF鸭和BALB/c小鼠的致病性试验.序列分析显示:HA裂解位点序列为339pSIEPK ↓ GLF347,为典型的低致病性AIV特征.内部基因来源较复杂,HuN/160/12的PB1、NS基因分别与A/spot-billed duck/Xianghai/427/2011 (H5N2)和A/wild bird/Korea/A81/2009(H5N2)的同源性最高,其余内部基因同源性最高的病毒株来自H2、H3、H4、H7、H10等亚型分离株,呈现明显的异源性.感染性试验结果显示,病毒在SPF鸭体内可以通过呼吸道和消化道向外排毒,并且能够在气管、肾脏、盲肠扁桃体及法氏囊检测到病毒,而不能在鸡体内有效复制及排毒.对小鼠的感染性试验结果显示,仅在鼻甲和肺检测到病毒存在,其他脏器病毒滴定结果为阴性,体重呈一过性下降,表明该病毒为低致病性AIV.     

Development and characterization of monoclonal antibodies to subgroup A avian leukosis virus

Avian leukosis virus subgroup A (ALV‐A) is a retrovirus which infects egg‐type chickens and is the main pathogen of lymphoid leukosis (LL) and myeloid leukosis (ML). In order to greatly enhance the diagnosis and treatment of clinical avian leukemia, two monoclonal antibodies (MAbs) to ALV‐A were developed by fusion between SP2/0 and spleen cells from mice immunized with expressed ALV‐A env‐gp85 protein. Using immunofluorescence assay (IFA), two MAbs reacted with ALV‐A, but not with subgroups B and J of ALV. Western blot tests showed that molecular weight of ALV‐A envelope glycoprotein recognized by MAbs was about 53 kD. Isotyping test revealed that two MAbs (A5C1 and A4C8) were IgG1 isotypes. These MAbs can be used for diagnosis and epidemiology of ALV‐A.     

鸡白细胞介素-18对H9亚型禽流感灭活油乳苗的免疫增强作用

[目的]探索鸡白细胞介素-18（IL-18）在H9禽流感（AI）灭活油乳苗免疫中的免疫佐剂作用.[方法]从鸡脾淋巴细胞中克隆鸡IL-18基因,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建真核表达质粒pIL-18.将重组真核表达质粒pIL-18、H9亚型AI灭活油乳苗及其二者联合分别免疫14日龄SPF鸡,检测其细胞免疫和体液免疫水平,评价鸡IL-18在H9亚型禽流感灭活油乳苗中的免疫增强作用.[结果]成功克隆了鸡IL-18全基因,大小为597 bp.质粒pIL-18和H9亚型AI灭活油乳苗联合免疫的SPF鸡所产生的HI抗体效价在接种第4周后明显高于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组;其T淋巴细胞的增殖反应也强于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组.[结论]质粒pIL-18能提高H9亚型禽流感灭活油乳苗诱发的免疫应答,为研究防制禽流感的新型疫苗提供了新思路.     

法氏囊在鸡淋巴细胞性白血病发生发展中的作用

用鸡淋巴细胞性白血病病毒ＲＡＶ－１株接种３５只１日龄伊莎鸡雏，于接毒后不同批次扑杀，采取法氏囊做组织学、免疫细胞化学、透射电镜观察。结果：接毒后１个月，法氏囊滤泡髓质淋巴细胞开始转化，接毒后２～５个月更明显，在法氏囊滤泡髓质区形成成淋巴细胞克隆增殖灶。接毒后６个月，法氏囊萎缩。生物素－亲和素（ＢＡ）法染色表明法氏囊一直存有病毒和群特异性抗原，以接毒后３～４个月含量最高。电镜观察，在接毒后１～４个月的实验鸡法氏囊滤泡髓质淋巴细胞、巨噬细胞和网状细胞中观察到淋巴细胞性白血病（ＬＬ）病毒粒子。组织学、免疫细胞化学和电镜观察都表明法氏囊是该病的主要靶器官之一，法氏囊在鸡淋巴细胞性白血病的发生发展中起一定的作用     

PCR／PFLP鉴别伉禽白血病病毒

用PCR方法从禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALY）亚群毒株RAV－1、RAV－2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞（CEF）分别扩增出1．2kb基因手段。RAV－1囊膜基因可初BglⅡ分为2条相近的600bp片段，RAV－2囊膜基因被BamHI分为2条约600bp片段，对照组基因片段（内源性病毒）不被BglⅡ和BamHI切割。结果显示，ALV囊膜基因PCR／RFLP可用于诊断禽白血病和鉴别不同的AVL毒株。     

应用ELISA双抗体夹心法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

本试验建立了检测鸡病毒性关节炎病毒的ELISA双抗体夹心法.取代反应、阻断试验均为阴性,与NDV、MDV和IBDV无交叉反应,对已知阳性标本的检测均为阳性;其敏感性比琼扩试验高80倍以上,这表明ELISA夹心法具有较高的特异性和敏感性.在人工感染后2～27d,关节滑膜、腱鞘和脾脏中病毒检出率为100％;还从肝脏、法氏囊和脑组织中检测到病毒.     

The fat content of milk from dairy cattle infected with bovine leukosis virus

Two groups of cows infected with the bovine leukosis virus (BLV) were kept on two different diets and the fat content of their milk was assayed. The results were compared with those obtained from two comparable groups of BLV-free cows. The cows in each group were of similar ages, those in the groups on the poorer diet being 1–4 months post partum, while those on the richer diet were 5–7 months post partum. The mean percentage of fat in the milk from uninfected cows on the poorer diet was 2.94 while that from the similar infected cattle was 3.06. Uninfected cows on the richer diet produced milk containing 3.39% fat, while those that were infected produced milk containing 3.30% fat. No statistical differences in milk fat production were observed between the BLV seropositive and seronegative cows.