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71.
72.
PCR扩增猪圆环病毒2型(PCV2)的衣壳蛋白(Capsid)基因,鉴定后克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastBac-Cap,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,经转座作用,蓝白菌落筛选得到含cap基因的重组穿梭载体Bacmid-Cap,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒reBacCap,PCR能够扩增出相应大小的片段,间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使reBac-Cap感染的Sf9昆虫细胞出现特异性绿色荧光,表明reBac-Cap在Sf9细胞中成功表达PCV2-Cap蛋白.动物试验表明该重组病毒对小鼠有一定的保护力. 相似文献
73.
大肠杆菌F18菌毛FedE蛋白的表达与鉴定 总被引:5,自引:2,他引:3
根据已经发表的F18菌毛E亚单位的基因序列(fedE)设计1对引物,利用PCR技术从重组质粒TFl07E中扩增到一段序列,并按预定的阅读框架插入到表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedE,并转化大肠杆菌BL21获得重组菌PPFedE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明:该序列大小为459bp,与GENEBANK中的FedE结构编码序列(Z26520)完全一致。通过对菌体裂解物的SDS—PAGE电泳分析以及Western blotting鉴定,证明重组大肠杆菌PPFedE的可以表达融合蛋白形式的FedE(命名为GST-FedE),即FedE蛋白(16.297ku)与谷胱苷肽转移酶(27.335ku)相连组成分子量为43.632ku的融合蛋白。 相似文献
74.
75.
76.
鸡传染性法氏囊病中等毒力活疫苗对H9亚型禽流感灭活疫苗体液免疫应答影响的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
将150只维扬麻鸡商品雏鸡随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 5组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组对应免疫A、B、C 3种IBD活疫苗和同一种H9亚型AI灭活疫苗,Ⅳ组为免疫对照组,只免疫H9亚型AI灭活疫苗,Ⅴ组为空白对照组。IBD中等毒力活疫苗二免后,定期监测鸡群H9亚型AI灭活疫苗免疫后的HI抗体消长情况,以评价这3种IBD活疫苗对H9亚型AI灭活疫苗体液免疫应答的影响。结果发现,45日龄前(即IBD疫苗二免后23 d前、H9亚型AI灭活疫苗二免后20 d前),Ⅰ组与Ⅳ组、Ⅱ组与Ⅳ组H9亚型AIV抗体水平均差异显著(P<0.05),Ⅲ组与Ⅳ组间差异不显著(P>0.05)。在45日龄后(即H9亚型AI灭活疫苗二免20 d后),试验鸡的H9亚型AIV HI抗体水平均无显著差异。 相似文献
77.
利用F18菌毛a因子单克降抗体以及已建立的鉴定F18菌毛及其亚型的双重PCR法,对来自断奶仔猪水肿病和/或腹泻病例的60株VTEC、24株VTEC/ETEC以及24株ETEC的进行了F18菌毛检测,以了解F18ab^+和F18ac^+大肠杆菌在江苏省断奶仔猪群的分子流行病学。结果表明:通过F18菌毛a因子单克隆抗体,可检测出52株大肠杆菌为F18^+,检出率为48.15%;而通过双重PCIL方法,共检测出63株大肠杆菌为F18^+,检出率为58.33%,其中53株(49.07%)为F18ab^+10株(92.6%)为F18ac^+。另外还发现:在VTEC、VTEC/ETEC以及ETEC的菌株之间,这2种F18菌毛亚型的分子流行病学是不同的。在VTEC中,F18ab^+,菌株37株(61.67%),未发现F18ac^+菌株;在VTEC/ETEC中,F18ab^+菌株15株(62.50%),F18ac^+菌株8株(33.33%);而在ETEC中F18ab^+菌株只有1株(4.17%),F18ac^+菌株只有2株(8.33%)。以上数据表明:④PCR法检测F18菌毛优于单抗法;②F18菌毛是VTEC/ETEC、VTEC的重要致病因子,而在ETEC中则明显低于VTEC/ETEC和VTEC;⑧F18ab^+菌株一般为SLT-IIe^+,而F8ac^+菌株一般为STI^+。 相似文献
78.
应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0.07~0.60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组(3头)肌肉注射免疫103.5TCID50的PCV1-2/头,2组(2头)肌肉注射真核表达质粒200μg/头,3组(2头)肌肉注射空载体(pcDNA3.1)200 μg/头,4组(2头)不免疫作为攻毒对照组.于免疫后42 d,PCV1-2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体.免疫后42 d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×104.5TCID50/头和106TCID50/头.攻毒后21 d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒载量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组.这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗. 相似文献
79.
从暴发猪高热病的江苏盐城地区某养殖户送检病料中分离到一株致Marc-145细胞病变的病毒,细胞培养物裂解上清经浓缩、负染后电镜观察可见直径约50 nm,有囊膜的球形病毒粒子;间接免疫荧光试验结果表明,该分离株与美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清反应发出强特异性荧光;以特异性引物对分离的病毒进行RT-PCR扩增于600 bp~700 bp出现单一条带,序列分析显示Nsp2缺失了87 bp.结果表明,该分离株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株,暂命名为JYC. 相似文献
80.
大肠杆菌F18菌毛E亚单位基因克隆与序列分析 总被引:2,自引:2,他引:0
根据已发表的F18ab菌毛E亚单位的基因序列(fedE/ab),设计1对引物,利用PCR技术从10株大肠杆菌(F107/86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到1个片段,并克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒TF107E、TYCED1E、TYCED2E、TCE、TDE、TEE、T12FE、T8813E、T8199E、T2134PE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,这10个片段大小均为516bp。通过与已发表的fedE/ab序列进行比较,发现这10个菌株的fedE序列高度同源,其中F107/86、YCED2、C、D、E、8813、8199、2134P的fedE序列完全相同,只有YCED1株在第45位碱基处存在1个G—A转换、12F株在第316位碱基处存在1个G—A转换。这说明F18ab和F18ac菌毛的fedE基因相同,fedE是F18菌毛的保守性亚单位。 相似文献