鸡Toll样受体15单克隆抗体的制备及其初步应用

旨在制备鸡Toll样受体15 (ChTLR15)的特异性单克隆抗体(mAb),并初步应用.利用PCR技术扩增ChTLR15第162-386位氨基酸,克隆于载体pET-30a中进行诱导表达,获得高纯度的重组ChTLR15 (162-386 aa)蛋白.然后采用皮下多点注射方式将ChTLR15免疫6周龄的雌性BALB/c小...     

应用DNA芯片技术筛选禽致病性大肠杆菌和尿道致病性大肠杆菌的差异表达基因

为研究禽致病性大肠杆菌强毒株E058的毒力相关基因在鸡体内、体外表达情况以及E058和尿道致病性大肠杆菌HEC4在LB和尿液中培养的表达情况,本研究分别提取E058株在SPF鸡体内及E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养的总RNA,与构建的DNA芯片杂交,检测和分析RNA的差异表达情况。芯片的检测结果表明:E058株在鸡体内和LB中培养差异表达基因共有9个,上调基因为5个,分别为neuC、iutA、cvaC、aes-15和iucCD;下调基因为4个,分别为aes-8、gyrB、aec-30和mdh。另外,芯片检测结果也显示E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养,具有相似的基因表达情况。     

禽病原性大肠杆菌温度敏感性血凝素(Tsh)突变株的构建

运用基因重组方法将庆大霉素抗性基因(GM)连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下目的片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APECE037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株。E037和E037(Δtsh)株的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明,E037(Δtsh)株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有了明显降低。     

盐城地区鹅大肠菌的致病性试验

从盐城地区临诊上有典型鹅大肠杆菌病变的病、死鹅和鹅炕坊的死胚蛋中分离培养出256株大肠杆菌。为了解这些鹅大肠杆菌的致病性情况,用不同地区、不同血清型的51株分离株做致病性试验。所测分离株对1日龄鹅均有致病性。3个优势血清型分离株中,对1日龄鹅高度致病者占77.8%,中度致病者占16.7%。低度致病者占5.5%。试验表明我们所获得的大肠杆菌分离株均为致病性。     

《兽医病理学》网络教学平台的构建与初步应用

本文介绍了扬州大学兽医学院《兽医病理学》网络教学平台的构建与初步应用情况。该网络平台设计时坚持自主性、开放性、双向互动性、先进性、科学性和实用性,平台包括课程概况、师资队伍、理论教学、实践教学、教学研究、学科建设、试题试卷、答疑系统、相关链接、最新动态、研究性教学等模块,经过四个学期的教学应用,取得了满意的效果。     

H9亚型禽流感重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护试验

应用表达H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒疫苗及其传代后第20、30代疫苗免疫5日龄无特定病原(SPF)鸡群,于免疫后采血测定HI抗体效价,并于免疫后第21天攻毒,攻毒后2～13d进行泄殖腔棉拭子采样,接种鸡胚测排毒情况。各免疫组在免疫后7～20d的HI抗体效价逐渐上升,但不同剂量组间、不同传代代次间有差异;攻毒后第5天各免疫组排毒的鸡数与对照组相比显著减少,且不同攻毒毒株组间无差异。重组苗组在攻毒后第2天仅有8%排毒,第5天则无排毒;灭活油苗组在攻毒后第2、5、7天分别有52%、12%、4%排毒,直到第9天才不排毒;空白攻毒组在攻毒后2～13d排毒率由92%缓慢降至8%。结果表明:研制的表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒载体疫苗具有较高的免疫保护效力,不低于灭活油苗,且在抑制早期排毒、防止群内传播方面优于灭活油苗。     

表达绿色荧光蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白 (GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。用EcoRⅠ和NcoⅠ将pEGFP质粒中的绿色荧光蛋白基因EGFP切下 ,克隆进表达载体质粒pYA3334的EcoRⅠ和NcoⅠ位点之间 ,构建成重组表达质粒pYAGFP ,然后转化大肠杆菌X6 2 12、中间宿主X3730、终末宿主X45 5 0。X45 5 0于LB培养基上呈绿色 ,在荧光显微镜下观察 ,整个菌体发绿色荧光。构建的表达GFP的重组鼠伤寒沙门氏菌为减毒沙门氏菌活载体基因工程疫苗的研制提供一个良好模型。     

表达致PWD和ED保护性抗原重组菌的免疫效力

重组菌BL21（pFsFaeG）是能够同时表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原（F4、F18、Stx 2e）基因的基因工程重组菌。由IPTG诱导的重组菌制成抗原，经甲醛灭活后腹腔免疫小鼠，用间接ELISA法定期检测小鼠血清中的抗体产生情况，结果显示重组菌能够诱导小鼠产生针对上述3种保护性抗原的特异性抗体IgG。免疫攻毒保护试验表明，用大肠杆菌标准强毒株C83907（F4）、108／86（F18）和Stx 2e毒素攻毒后，重组菌诱导产生的抗体能够对小鼠提供80％以上的保护。     

禽病原性大肠杆菌的致病机理

1885年,Escherich氏分离并描述了大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli),它构成了所有温血动物大肠中主要的需氧微生物菌群.……