HSN2与H5N1禽流感油乳灭活疫苗免疫鹅群对H5N1流行株攻毒的保护效力及母源抗体对免疫效力的干扰

应用HSN2和HSN12种类型禽流感油乳灭活疫苗分别免疫鹅群，观察比较了二者对HSN1型高致病性禽流感病毒的攻毒保护效力。结果表明，在同等剂量免疫条件下，从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律3项指标综合评价来看，HSN1灭活苗水禽免疫组对高致病性禽流感HSN1流行株攻毒的保护妓率较HSN2灭活苗理想，且水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

大肠杆菌F18菌毛F亚单位基因的多样性分析

根据已经发表的F18ab菌毛F亚单位(FedF/ab)的基因(fedF/ab),设计一对引物,利用PCR技术从本实验室保存的10株大肠杆菌(F107/86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到一段序列,并克隆至pGEM_T载体,获得重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、TEF、T12FF、T8813F、T8199F、T2134PF。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,该10个序列大小均为903bp。通过与已发表的fedF/ab进行比较,可将这10个菌株分为2个主要遗传分支;其中F107/86、YCED1、YCED2、C、D、12F与fedF/ab具有高度同源性,属于fedF/ab;另外E、8813、8199、2134P虽与fedF/ab具有99.4%的同源性,推导的氨基酸序列具有98.3%的同源性,但通过基因树分析证明其已成为一个单独的分支,属于fedF/ac。     

间接免疫荧光试验(IIF)检测PRRSV方法的应用

用PRRSV ATCC VR-2332株人工单独感染了3头3周龄仔猪,并用PRRSV ATCC VR-2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染了2头3周龄仔猪,同时设立了3头健康对照猪.攻毒后每日记录试验猪体温、采食、临床表现等,并用HerdChek IDEXX Kit测其血清抗体.PRRSV+PCV2联合感染猪分别在感染后1周、3周剖杀,PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1周、2周和3周剖杀.对肺组织进行灌洗处理以获得肺泡巨噬细胞(PAM),用PAM进行抹片,同时用肺组织直接进行触片作IIF检测.IIF试验结果表明,用所获得的3株单抗均检测到了人工感染猪肺组织中的PRRSV抗原.另外,用IIF检测临床疑似PRRS的7头猪的PAM抹片,其中沭阳2头猪呈现阳性反应.对这2头猪的肺组织进行病毒分离,结果在盲传到第四代时在Marc-145细胞上产生明显的细胞病变,进一步证实了所获得的3株单抗检测临床样品的准确性和可靠性.综合以上试验结果,证实了所获得的3株单抗均可通过IIF试验用于临床检测肺组织中的PRRSV抗原.     

致断奶仔猪腹泻、水肿病大肠杆菌F18菌毛a因子单克隆抗体的研制及其初步应用

以表达 F18ac菌毛参考菌株 2 134(O15 7∶ H19)为研究对象 ,摸索出了 F18ac菌毛表达的最佳条件 ,采用热洗脱法获得了较纯的 F18ac菌毛 ,并以之免疫小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,用直接玻板凝集法筛选出 1株杂交瘤细胞株 19B4 ,能稳定分泌针对 F18ac菌毛和 F18ab菌毛共同抗原表位 a因子的单克隆抗体。细胞培养上清对 F18ac菌毛参考菌株 2 134和 F18ab菌毛参考菌株 10 7/ 86的直接凝集价均可达 1∶ 8,腹水单抗直接凝集效价可达 1∶ 10 2 4 ,而与猪源产 F4、F5、F6和 F4 1粘附素大肠杆菌菌株、鸡源产 型菌毛大肠杆菌菌株及沙门氏菌不发生凝集反应。免疫印迹试验结果显示 ,腹水单抗可同时特异识别 F18ac菌毛 170 0 0和 F18ab菌毛 15 0 0 0左右的主要亚单位多肽。应用所研制的单抗对 2 15株断奶仔猪腹泻大肠杆菌分离株进行了检测 ,结果上述分离株 TSB培养物的 F18菌毛的检出率为13.4 % ,TSA培养物的检出率为 8.4 %。F18菌毛阳性分离株的 O血清型除了常见血清型 O139、O14 1外 ,还有非常见血清型 O10 7、O131和 O9等。TSB培养物的 F18菌毛检出率明显高于 TSA培养物的检出率 ,表明 F18菌毛在 TSB培养基中比在 TSA培养基上更容易表达 ,TSB培养基是适合 F18菌毛检测、流行病学调查的培养基     

禽病原性大肠杆菌Ⅰ型菌毛单克隆抗体的研制及其对分离株的检测

从禽病原性大肠杆菌分离株 TK3 ( O1 )提取 型菌毛免疫 BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ,获得 4株能稳定分泌针对 型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,分别命名为 a B6 、b G5 、c F3和 c G3。单抗阻断甘露糖敏感血凝试验、免疫胶体金和 Western blot试验证明 ,单抗是 型菌毛特异的。这些单抗培养上清及腹水的 ELISA效价为分别为 1 0 - 2～ 1 0 - 3和 1 0 - 5～ 1 0 - 6 ;腹水的平板凝集价为 1∶ 1 2 8～ 1∶ 2 56。上述4株单抗对 77株带 型菌毛的禽病原性大肠杆菌优势血清型分离株进行了检测 :O1 8分离株阳性率为72 %,O78分离株阳性率为 1 7%,O2分离株阳性率为 3 3 %,O88分离株阳性率 89%,O1 1分离株阳性率为60 %,O2 6分离株阳性率为 3 3 %。表明研制的 型菌毛单抗能检出大多数 O1 8、O88、O1 1分离株的 型菌毛 ,而对 O78、O2、O2 6分离株相应菌毛的检出率较低     

家养野猪断奶多系统衰竭综合征的诊断

江苏某养殖户养殖18头野猪,2007年10月20日到本院动物医院就诊.据该养殖户介绍,该猪为2月龄,18头中有10头发病,已死亡2头,主要是断奶后发育迟缓、消瘦、气喘,剖检可见淋巴结水肿、出血;肺脏淤血、水肿;大、小肠出血;肾有出血点;肝淤血、水肿;胆汁浓稠;脾、胰腺萎缩.     

嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0.07～0.60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组(3头)肌肉注射免疫103.5TCID50的PCV1-2/头,2组(2头)肌肉注射真核表达质粒200μg/头,3组(2头)肌肉注射空载体(pcDNA3.1)200 μg/头,4组(2头)不免疫作为攻毒对照组.于免疫后42 d,PCV1-2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体.免疫后42 d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×104.5TCID50/头和106TCID50/头.攻毒后21 d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒载量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组.这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒江苏株的分离与鉴定

从暴发猪高热病的江苏盐城地区某养殖户送检病料中分离到一株致Marc-145细胞病变的病毒,细胞培养物裂解上清经浓缩、负染后电镜观察可见直径约50 nm,有囊膜的球形病毒粒子;间接免疫荧光试验结果表明,该分离株与美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清反应发出强特异性荧光;以特异性引物对分离的病毒进行RT-PCR扩增于600 bp～700 bp出现单一条带,序列分析显示Nsp2缺失了87 bp.结果表明,该分离株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株,暂命名为JYC.     

鸡传染性法氏囊病中等毒力活疫苗对H9亚型禽流感灭活疫苗体液免疫应答影响的研究

将150只维扬麻鸡商品雏鸡随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 5组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组对应免疫A、B、C 3种IBD活疫苗和同一种H9亚型AI灭活疫苗,Ⅳ组为免疫对照组,只免疫H9亚型AI灭活疫苗,Ⅴ组为空白对照组。IBD中等毒力活疫苗二免后,定期监测鸡群H9亚型AI灭活疫苗免疫后的HI抗体消长情况,以评价这3种IBD活疫苗对H9亚型AI灭活疫苗体液免疫应答的影响。结果发现,45日龄前（即IBD疫苗二免后23 d前、H9亚型AI灭活疫苗二免后20 d前）,Ⅰ组与Ⅳ组、Ⅱ组与Ⅳ组H9亚型AIV抗体水平均差异显著（P<0.05）,Ⅲ组与Ⅳ组间差异不显著（P>0.05）。在45日龄后（即H9亚型AI灭活疫苗二免20 d后）,试验鸡的H9亚型AIV HI抗体水平均无显著差异。     

盐城地区鹅源大肠杆菌的致病性试验

从盐城地区临诊上有典型鹅大肠杆菌病变的病、死鹅和鹅炕坊的死胚蛋中分离培养出256株大肠杆菌。为了从盐城地区临诊上有典型鹅大肠杆菌病变的病、死鹅和鹅炕坊的死胚蛋中分离培养出256株大肠杆菌。为了解这些鹅源大肠杆菌的致病性情况,用不同地区、不同血清型的51株分离株做致病性试验。所测分离株对1日龄鹅均有致病性。3个优势血清型分离株中,对1日龄鹅高度致病者占77.8%,中度致病者16.7%,低度致病者占5.5%。