山东省禽致病性大肠杆菌菌株的分离与鉴定

从山东省临沂、烟台、滨州、济南、聊城、德州等15地、市的解剖诊断门诊部收集临诊上有典型病变鸡(鸭)病的病料230余份中分离出大肠杆菌165株,115株大肠杆菌进行了O血清型鉴,共鉴定出84个分离株的O血清型,鉴定结果表明O78、O36、O6与O107是本次调查的优势血清型.挑选59株进行致病性试验.动物试验结果表明94.9%的菌株对7日龄内雏鸡具有很强的致病作用,多数菌株可使接种雏鸡100%死亡     

大肠杆菌F18菌毛A亚单位基因的多样性分析

根据已经发表的大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位(FedA／ab)的基因序列(fedA／ab)设计1对引物，利用PCR技术从本实验室保存的10株大肠杆菌(F107／86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到一段序列．并克隆至pGEM-T载体，获得重组质粒TF107A、TYCED1A、TYCED2A、TCA、TDA、TEA、T12FA、T8813A、T8199A、T2134PA。通过序列测定，并与已发表的fedA／ab进行比较、基因树分析，可将这10个菌株分为2个基因群，其中F107／86、YCED1、YCED2、C、D、12F与fedA／ab具有高度同源性，属于fedA／ab．大小为513bp；E、8813、8199、2134P构成另一单独的分支，属于fedA／ac．大小为516bp。     

禽病原性大肠杆菌tsh突变株的构建及分离株tsh基因的检测

运用基因重组方法将庆大霉素（Gentamycin,GM）抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APEC E037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株,命名为E037（Δtsh）。E037和E037（Δtsh）株对1日龄鸡的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明E037（Δtsh）株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有明显下降。在243株禽源分离株中,有167株为tsh＋菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%（146/167）、12.6%（21/167）和0%（0/167）;O1、O2和O78血清型的高致病株占所在血清型分离株的89.5%-100%,而其它血清型的高致病株仅占其它分离株的53.3%,差异极显著（P〈0.01）。结果显示tsh＋株大多数为高致病性菌株,且其致病性与血清型的种类有一定的相关性,温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子。     

江苏省部分地区鹅源致病性大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性分析

从江苏盐城、高邮等地区临诊上具有典型大肠杆菌病病变的病、死白鹅中分离到大肠杆菌99株,通过玻板凝集和试管凝集试验,除8株未能定型、3株自凝外,测定出88个分离株的血清型,这些分离株覆盖了34个血清型,其中以O107、O9这两个血清型为主,占定型菌株的34%(30/88),为我国禽源大肠杆菌的常见血清型。同时将这些分离株进行了15种抗菌药物的敏感试验,结果显示:99株分离株无多黏菌素耐药性,除1株对丁胺卡那耐药,2株中度敏感,其它均对丁胺卡那敏感,同时所有菌株均对多黏菌素有不同程度的敏感,可指导临床用药。     

SPF鸡人工感染禽源大肠杆菌、H9亚型禽流感病毒后的体液免疫应答和死亡率分析

SPF鸡经不同顺序、不同时间间隔人工感染MPAIV和E．coli 173株（04）后，对试验鸡的病死率和针对大肠杆菌不同抗原体液免疫应答水平等进行研究。结果表明：各混合感染组试验鸡病死率明显高于单独接种组，且以先接种MPAIV再接种E．coli组死亡率最高；各混合感染组试验鸡针对E．coli OMPs和LPS的抗体水平低于单独感染E．coli组，其中又以先接种MPAIV再接种E．coli组为最低，提示MPAIV和E．coli间存在协同致病作用，这种协同机理可能与因MPAIV的感染导致一定程度的免疫抑制并进而促进了E．coli在体内的定居与繁殖有关。     

应用DNA芯片技术筛选禽致病性大肠杆菌和尿道致病性大肠杆菌的差异表达基因

为研究禽致病性大肠杆菌强毒株E058的毒力相关基因在鸡体内、体外表达情况以及E058和尿道致病性大肠杆菌HEC4在LB和尿液中培养的表达情况,本研究分别提取E058株在SPF鸡体内及E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养的总RNA,与构建的DNA芯片杂交,检测和分析RNA的差异表达情况。芯片的检测结果表明:E058株在鸡体内和LB中培养差异表达基因共有9个,上调基因为5个,分别为neuC、iutA、cvaC、aes-15和iucCD;下调基因为4个,分别为aes-8、gyrB、aec-30和mdh。另外,芯片检测结果也显示E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养,具有相似的基因表达情况。     

病原性大肠杆菌人工感染鸡外膜蛋白抗体和脂多糖抗体的测定

以提纯的外膜蛋白（Ｏuter membuane puoteins,ＯＭＰs）作包被抗原,应用酶联免疫吸附试验（Ｅnzyme-linked immunosorbant assay,ＥＬＩＳＡ）,测定了禽病原性大肠杆菌Ｏ １８－５６６、Ｏ７８－１６６分离株人工感染鸡的ＯＭＰs抗体。上述分离株２次攻毒鸡的ＯＭＰs抗体高峰期在攻毒后的３～５周;同时,我们以间接血凝试验（Ｉndirict hemagglutination tist,ＩＨＴ）测定了其脂多糖（Ｌipopolysacchauide,ＬＰＳ）抗体,该抗     

我国部分地区105个禽病原性大肠杆菌的药敏试验

测定了来自国内部分地区１０５个禽病原性大肠杆菌分离株对１３种药物的敏感性。结果表明,丁胺卡那霉素、环丙沙星、氟哌酸的抑菌作用最强,高敏菌株占７７％以上,痢特灵、庆大霉素、卡那霉素、恩诺沙星、氯霉素敏感性居中,高敏菌株为４９％￣６５％之间;增效磺胺、痢菌净、氨苄青霉素、强力霉素、青霉素的抑菌作用最弱,高敏菌株低于２０％。     

农业院校动物医学专业主干课程动物寄生虫病学双语教学体系的构建与应用

动物寄生虫病学课程是动物医学、兽医公共卫生、实验动物等专业学生重要的专业主干课程,也是近年来国家实行执业兽医资格考试的主要课程。长期以来,该课程所采取的中文教学内容和方式已经难以适应培养现代化和国际化动物医学人才的要求,必须进行相应的改革。文章介绍了扬州大学以该课程为例建立的以培养国际化动物医学专业人才为目标的双语教学体系,重点介绍了该体系的设计构思、组织实施、教学中的实际应用效果及体会。通过改革,本课程初步成为一门有自身特色、教学内容新颖生动、教学方法与手段先进、考核方式和理念较好的双语课程,提升了本校人才培养的质量,也为其他专业课程的双语教学起到了一定的示范作用。     

嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头,2组（2头）肌肉注射真核表达质粒200μg／头,3组（2头）肌肉注射空载体（pcDNA3．1）200μg／头,4组（2头）不免疫作为攻毒对照组。于免疫后42d,PCV1—2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体。免疫后42d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×10^4.5 TCID50／头和10^6 TCID50／头。攻毒后21d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒栽量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组。这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗。