非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究

对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物索标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针.PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进...     

羊消化道线虫病的诊断与防控

<正>羊消化道线虫病可导致肉羊消瘦或贫血,影响羊只正常发育,并可造成死亡。寄生于羊消化道的线虫种类较多,主要有食道口线虫、仰口线虫、毛尾线虫和细颈线虫。一、病原特征1.食道口线虫也称为结节虫,寄生在羊的大肠。羊感染后,肠壁上出现大量呈米粒到蚕豆粒大小不等的结节;结节里面存在虫体,并继续生长发育为成虫。     

大肠杆菌F18菌毛FedE蛋白的表达与鉴定

根据已经发表的F18菌毛E亚单位的基因序列(fedE)设计1对引物,利用PCR技术从重组质粒TFl07E中扩增到一段序列,并按预定的阅读框架插入到表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedE,并转化大肠杆菌BL21获得重组菌PPFedE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明：该序列大小为459bp,与GENEBANK中的FedE结构编码序列(Z26520)完全一致。通过对菌体裂解物的SDS—PAGE电泳分析以及Western blotting鉴定,证明重组大肠杆菌PPFedE的可以表达融合蛋白形式的FedE(命名为GST-FedE),即FedE蛋白(16．297ku)与谷胱苷肽转移酶(27．335ku)相连组成分子量为43．632ku的融合蛋白。     

牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达及条件优化

根据已发表的牛气管抗菌肽(bTAP)序列和酵母密码子偏爱性设计并合成一段bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母pPIC9K质粒连接后构建了分泌表达载体pPIC9K-bTAP.获得重组质粒经Sal Ⅰ酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选获得了阳性转化重组菌.通过对重组菌培养条件的进一步优化,揭示了重组...     

非洲猪瘟病毒（Malawi LIL20／1株）k8R基因的表达与鉴定

蛋白多肽二级结构的电脑预测表明，非洲猪瘟病毒ｋ８Ｒ基因编码带有多个疏水氨基酸小区的２７ｋＤａ蛋白质。该基因的ＰＣＲ产物克隆入质粒ｐＧＥＸ－２Ｔ后，在大肠杆菌中表达４２－５４ｋＤａ不溶性ＧＳＴ－ｋ８Ｒ融合蛋白。此表达蛋白能被针对不同非洲猪瘟病毒侏的猪免疫血清识别。     

致奶牛乳房炎链球菌快速鉴别及耐药试验用选择培养液的培养特性研究

奶牛乳房炎是影响世界奶牛业发展的主要疾病之一，虽然其病原菌有数十种之多，但以金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌为主。标准的链球菌鉴定程序包括增菌培养、血琼脂平板培养、革兰氏染色镜检和生化试验，然后用细菌纯培养进行纸片扩散法药敏试验或最小抑菌浓度（MIC）测定，整个过程不仅需要5d左右的时间，而且需要必要的细菌学试验条件和技术。因此，很多奶牛场在治疗乳房炎前很少进行必要的细菌学鉴定和药敏试验，长期、盲目、超量使用抗生素已导致细菌耐药现象日益普遍。     

致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌快速鉴别及药敏试验选择培养液的培养特性

本研究在Baird-parker培养基基础上,研制出致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌(SA)快速鉴别培养及药敏试验用选择mBP培养液.在此培养液中,除SA生长良好外,链球菌等4种革兰氏阳性茵和大肠杆茵等6种革兰氏阴性菌均不生长;将10μL奶样接种入mBP培养液,37℃培养24 h后即可根据培养液是否浑浊和产生黑色产物判断奶样中有无SA,检测灵敏度为60个细菌:经与标准纸片法药敏试验对比证明,mBP培养液对常用于奶牛乳腺炎治疗的7类8种抗生素的抑茵活性无明显影响:将10μL奶样或选择培养物接种入含标准抑茵浓度抗生素的mBP培养液中,35℃培养24 h后即能根据培养液是否浑浊和产生黑色产物判断奶样中SA对所试抗生素的敏感性.以mBP培养液为基础建立的致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球茵快速鏊剐及药敏试验方法具有简单、快速、价廉和不需专门设备等优点,特别适合我国中、小型奶牛场和基层兽医站使用.     

奶牛乳房炎样品金黄色葡萄球菌分离株的基因分型

为了掌握上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌基因型,本文采用ERIC-PCR分型方法,对从患有乳腺炎的奶牛乳汁中分离所得的74株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。结果显示,74株金黄色葡萄球菌可扩增出4~9条带,共分为4个聚类群,亲缘关系相同或相近的菌株占97.7%。发现在同一牛群中的分离株可以是相同的基因型,也可以存在不同的基因型,而不同牛群中的分离株也可属于同一基因型。但总的来说,上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌多为同一基因型,在某个或某些牛群中存在金黄色葡萄球菌的优势基因型,而不同地区、不同环境和条件下同一种病原菌的基因型也存在一定差异,可能存在多个金黄色葡萄球菌基因型。     

仔猪水肿病的PCR快速诊断

根据GenBank发表的志贺毒素2型变异体(shiga-toxin 2e,Stx2e)的基因序列设计1对特异性引物,建立了一种检测STEC的PCR方法.通过对已知毒素类型参考菌株的扩增,证明所建立的PCR方法能够特异鉴定STEC.采集临床疑似仔猪水肿病未死亡病例(5例)的直肠棉拭子样品和死亡病例(15例)的十二指肠病料,接种LB内汤于37℃增菌培养4～6 h后,运用所建立的PCR方法对增菌培养物进行快速检测,结果表明有19例为STEC感染.通过与细菌分离后再鉴定的比较,证明了该诊断方法具有的速度快、检出率高的特点,尤其适合于临床活体检测.