非洲猪瘟病毒E183L、B602L、K205R和A104R基因表达及诊断抗原筛选

为了获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)重组蛋白pK205R、pE183L、pA104R和pB602L,将Ba71V株的K205R、E183L、A104R和B602L基因分别亚克隆进行原核表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET-E183L、pET-B602L、pET-K205R和pET-A104R,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,纯化表达的蛋白,并进行Western blotting鉴定,结果4种重组蛋白与预期大小一致,且与ASFV抗体发生特异性反应。为了从表达的4种重组蛋白中筛选最佳诊断抗原,将其分别包被酶标板,间接ELISA检测ASFV阳性血清,发现重组蛋白pK205R、p54和pB602L血清学反应良好;在检测ASFV感染后第13天分离血清时,重组蛋白p54和pK205R效果更佳,这表明p54和pK205R重组蛋白是较好的诊断抗原,可用于ASFV感染后早期或中后期血清学诊断。     

微型水培人工气候箱环境监控系统设计

针对水培菜生长过程中对光照强度、环境温湿度及营养液的不同需求,设计了一种微型水培人工气候箱环境监控系统,可用于家庭园艺或餐厅农场。基于STM32F103ZET6控制器,设计了系统相关硬件电路及系统控制程序,主要包括外部环境检测模块、外部环境调节模块、营养液检测模块、营养液调节模块、LCD显示及按键模块及上位机显示界面。用户可实时监测微型人工气候箱中的光照强度、温湿度以及营养液的pH(酸碱度)值、EC(电导率)值、DO(溶解氧)值和主要养分离子浓度,相关执行机构工作,可将各环境参数自动调节至标准阈值内,由上位机界面显示各环境参数的变化情况。系统运行测试结果表明:系统能够在15min内完成对作物生长所需各项环境参数的调节,为作物生长提供稳定可靠的环境条件,同时可监测所得主要养分离子浓度的变化情况,为后续研究作物生长养分吸收规律和养分动态管理提供依据。     

马立克氏病病毒编码的类白细胞介素8研究进展

马立克氏病(Marek's disease,MD)是由马立克氏病病毒(MDV)引起的一种淋巴细胞增生性肿瘤疾病，病毒的许多成分参与了致肿瘤过程。最近的研究结果发现，MDV编码一种类似于白细胞介素-8的产物，称之为病毒性白介素-8（VIL-8)。这种vIL8与人类IL-8在结构上十分相似，但它对异嗜细胞的趋化作用微弱，而对外周血单核细胞有很好的趋化性，且在MDV溶细胞感染中起重要作用。vIL-8是否能象人类IL-8具有激活单核细胞、增强其吞噬作用、增进毛细血管增生和肿瘤生成等功能尚有待探索，本文就有关vIL-8的作用及作用机制进行了讨论。     

miRNA干扰gM基因对马立克氏病病毒体外复制的抑制作用

用miRNA Target Finder分析软件预测干扰RB1B株马立克氏病病毒（Marek’s Disease Virus，MDV）gM基因翻译的潜在靶序列，从中筛选出3个作为干扰对象，根据干扰载体pRFPRNAiC特点，设计合成3对单链DNA序列，经PCR反应扩增出双链DNA，并将其插入干扰载体pRFPRNAiC，构建重组干扰质粒pRFPRNAiCgM1、pRFPRNAiCgM2、pRFPRNAiCgM3。将质粒pRFPRNAiCgM1以不同的剂量转染鸡胚成纤维（CEF）细胞，确定最佳转染质粒量，试验结果表明1μg转染剂量转染效果最佳。以1μg剂量将3种重组干扰质粒分别转染CEF细胞，24h后感染RB1B株MDV，72h后用空斑计数MDV在CEF细胞上增殖数量，以此判定miRNA干扰效果，结果显示，重组干扰质粒中质粒pRFPRNAiCgM2干扰效果较好，能有效抑制MDV在CEF上的生长繁殖。     

无针注射器接种猪瘟活疫苗对猪免疫效果评价

为了评定无针注射器接种猪瘟活疫苗的免疫效果,将300头非免仔猪随机分为6个组,其中3组用无针注射器分别免疫1头份、1/2头份剂量的瘟倍安以及1头份剂量的STTM猪瘟活疫苗,剩下的3组将无针注射器替换成传统的有针注射器进行免疫。30日龄进行首次免疫,55日龄进行二次免疫,免疫后一周内观察猪有无不良反应。首免后第14天、二免后第25天分别采血、分离血清,ELISA试剂盒检测CSFV抗体,计算每组猪抗体阻断率及免疫合格率,统计分析各组之间的差异。实验结果显示,无针注射器与有针注射器接种疫苗均未对猪精神状态、采食、运动造成影响,无针注射器接种部位炎症发生率也低于有针注射器;无针注射器免疫组抗体滴度明显高于有针注射器接种组,即使疫苗使用剂量减半也能达到很好的免疫效果。     

非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究

对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物索标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针.PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进...     

禽腺联病毒序列对鸡输卵管细胞表达人溶菌酶基因的促进作用

将鸡卵清蛋白基因5′-调控区控制的人溶菌酶（hLYZ）cDNA表达盒插入禽AAV末端反向重复序列之间,将CMV启动子控制的rep表达盒插入其下游,获得的表达载体pRep2ITR-OV4-LYZ用聚乙烯亚胺包裹,经翅静脉注射产蛋鸡,待蛋清中rhLYZ表达水平下降至注射前水平时,用pRep2ITR-OV4-LYZ进行3次重复注射,以RBB-R染料标记比色法和Western-blotting检测蛋清中rhLYZ表达,以细菌生长抑制试验检测rhLYZ活性。结果,在相同试验条件下,pRep2ITR-OV4-LYZ表达rhLYZ的水平和时间优于不含禽AAV序列的pOV4-LYZ,rhLYZ表达水平和时间随载体注射次数增加呈上升和延长趋势,rhLYZ的分子质量与天然hLYZ相同,对致乳牛乳腺炎大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌具有显著的抑制作用。试验结果提示,禽AAV ITR和rep序列能促进hLYZ基因在鸡输卵管细胞中正确表达。     

马立克氏病病毒类白细胞介素8(vIL-8)基因的克隆和表达

用马立克氏病痛毒(MDV)感染鸡胚成纤维细(CEF)，提取总RNA，经RT—PCR扩增出由MDV编码的病毒类白细胞介素-8(vIL-8)基因，并将其克隆进pGEM—Teasy载体中，测序进行分析。将vIL-8基因片段插入表达性载体pGEX-5x-3中，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导。结果获得了重组vIL-8-GST融合蛋白的表达。表达产物活性分析表明，vIL-8基因重组产物具有趋化鸡外周血淋巴细胞的活性。提示，MDV在致瘤过程中，vIL-8能吸引易感细胞促进病毒感染，并可能参与肿瘤的扩散和发展。     

MDV CVI988／Rispens弱毒株VP22基因克隆和序列分析

血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV-1)的UL49h基因编码病毒被膜蛋白VP22在病毒的复制和传播过程中具有非常重要的作用。根据已发表的MDV-1 GA株的序列，从CVI988／Rispens弱毒株感染的鸭胚成纤维细胞中扩增VP22基因片段，结果获得大小为732bp的PCR产物。将PCR产物克隆T载体并测序分析，结果发现，与经典强毒GA株相比，弱毒株CVI988的VP22存在3个定点突变和一个缺失性突变。缺失的位点亲水性强，并位于VP22主要的抗原决定簇区。结果证明强毒株与弱毒株的VP22存在明显差异，为利用CVI988 VP22的蛋白传导域传导目的蛋白奠定了理论基础。