本地毛形线虫49 ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取T.nativa肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码T.nativa49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的T.spiralis相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为T.nativa49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。     

禽流感病毒神经氨酸酶基因在重组杆状病毒中的表达

根据已知H5N1亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)基因序列设计并合成引物。从H5N1亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高保真DNA聚合酶扩增NA基因,构建转移载体pFastBacHTA-NA,并与大肠杆菌DH10Bac的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-NA。在脂质体介导下将rBacmid-NA转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。在sf9昆虫细胞中表达NA蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和激光共聚焦检测蛋白。结果表明:表达的NA蛋白分子量约为53 ku,该蛋白能与H5N1亚型AIV血清发生特异性反应,证明NA蛋白表达正确,具有良好的免疫反应性。     

两株H5N1亚型禽流感病毒的基因分析及其在不同宿主中致病性的比较

为了解两株高致病性禽流感病毒(HPAIV)的分子特征及其对不同宿主的致病性,本研究对DK/HuN/4/08和CK/GX/2/09进行全基因组序列的测定,分析结果表明:两个病毒分离株HA基因的裂解位点均具有HPAIV特有的基序(341RRR(R)KR345/346),并且均属于Clade2.3.2分支,基因组同源性在97.4%～98.3%之间。致病性试验显示,两个病毒分离株均能够以106EID50感染量在3 d内引起鸡全部死亡,并且各脏器均检测到高滴度的病毒含量;两者在SPF鸭中呈现不同的致病性,CK/GX/2/09在4 d内可以使感染鸭100%死亡,而DK/HuN/4/08只引起25%的死亡率;同样在小鼠试验中,两者致病力差异与在鸭体中的反应一致,其MLD50分别为1.63 log10EID50和6.2 log10EID50。本研究表明,这两株遗传背景相似的HPAIV在鸡、鸭和小鼠中的致病性不同,为进一步利用反向遗传技术研究这两株病毒对水禽和哺乳动物致病力差异的分子机制奠定了基础。     

氮、磷、钾肥配比对“金寿”杏产量及土壤养分吸收的影响

以6a生"金寿"杏为试材,通过4个氮、磷、钾肥配比田间试验:CK(N∶P2O5∶K2O=0∶0∶0)、处理A(N∶P2O5∶K2O=2∶1∶3)、处理B(N∶P2O5∶K2O=2∶2∶3)和处理C(N∶P2O5∶K2O=1∶1∶3),研究其对土壤养分含量、单果重、果实产量和品质的影响。结果表明:施肥可以提高100cm土壤养分含量、单果重和果实产量。在"金寿"杏收获后,A、B和C处理的100cm土层速效钾平均含量分别比CK处理提高了40.16%、37.59%和56.42%;可溶性固形物含量分别比CK提高了4.26%、6.65%和7.17%;单株产量也比CK分别提高了16.72%、28.46%和18.75%;B处理下单果重、单株产量及折合产量均为最高。综合经济效益,处理B(N∶P2O5∶K2O=2∶2∶3)的效果最佳。     

乐陵枣区枣树近年无花少花的原因和预防措施

近二年,乐陵枣区有部分树株或树株的部分校系出现无花少花的现象,造成局部减产和绝产,而且这种现象有蔓延加重的趋势,为保障枣区的正常生产,两年来,我们作了有关的调查和试验,解开了近年枣树无花少花之谜,并取得了预防的经验。 调查试验结果表明,乐陵县部分枣树无花少花的原因,除近年雨量偏少(由600毫米左右减为360—450毫米左右),影响长势以外,主要是枣叶壁虱的蔓延为害。枣叶壁虱虫体很小,肉眼看不到,而且其为害方式是以细小的口器刺吸叶片、花蕾和幼果的汁液,受害器官初期不显明显的受害症状,因而不易为人察觉,直到6月中下旬,才渐显症状:…     

表达禽流感HA和NP双基因重组禽痘病毒的免疫保护性

将分别来自禽流感病毒A／Goose／Guangdong／3／96(H5N1)毒株的HA基因和A／Goose／Guangdong／1／96(H5N1)NP基因重组到禽痘病毒基因组中，获得了能同时高效表达这两种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV—HA—NP)。将rFPV—HA—NP经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡，并设亲本禽痘病毒免疫和非免疫对照组。免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A／Goose／Guangdong／1／96(H5N1)和A／FPV／Rostock／34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒rFPV—HA—NP免疫鸡群后能够诱导产生高水平的特异性抗体，可完全抵抗H5N1毒株的致死性攻击，并可有效阻止H7N1病毒攻击后病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明NP在与HA共同表达时，在诱导交叉保护性方面有一定的免疫增强功能。     

北方设施杏高效栽培技术

近年来,杏果成为一种时尚保健果品,价格日趋上涨,但由于不耐贮藏,很难做到季产年销。因此发展设施杏具有重要意义。北方冬季寒冷漫长,杏树自然休眠早,解除休眠也早,开花结果、成熟期可以提前,就张家口而言,紧靠京津内蒙大市场,交通便利,鲜食杏设施栽培具有较强的区位优势。园地     

禽流感H5亚型病毒血凝素基因的表达和抗原性分析

参考已发表的Guangdong/96/1(H5N1)基因序列设计引物,用鸡胚扩增中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室保存的病毒,收集尿囊液,提取病毒RNA,经RT-PCR扩增HA基因,将PCR产物平端克隆到pMD18-T中,经酶切、PCR及测序鉴定后,定向亚克隆到pET-30a表达载体中。重组子经酶切和测序鉴定为正确后,用IPTG诱导表达,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析重组蛋白的表达情况。重组蛋白r5HA经Ni-NTA His.Bind Resins纯化,并复性,用Western Blotting分析重组蛋白的抗原性。结果表明:表达产物大小约为65 ku,主要存在于包涵体中,表达量约占总蛋白的30%;同时,表达的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性,可以用作检测H5亚型禽流感病毒抗血清的捕获抗原。     

枣锈病防治药剂筛选试验

自1984年,我们做了枣锈病防治药剂筛选试验,用退菌特替代波尔多液,其结果已在1985年二期山东果树发表。1985年,我们又进一步扩大了药剂种类和试验面积,再次药剂筛选,观察不同药剂的防治效果,再报如下。 一、材料、方法和结果 枣树90株,于发病前,每组处理随机取样无病枣叶200片。 农药有200倍石灰等量式波尔多液、800倍炭疽福美、800倍退菌特、800倍福美硫黄、800倍复方多菌灵、不喷药为对照。全年共喷药四次:即7月30日、8月13日、8月26日、9月6日。结果详见下表。 二、分析和讨论 从1985年试验结果看,以炭疽福美和波尔多液效果最好,防治效果…     

淮阴区推行“订单蚕业”的实践与体会

2003年秋,淮阴区蚕桑站借鉴“富安模式”的一些做法,开始在淮阴区尝试、摸索“蚕技服务单位＋蚕农”的“订单蚕业”的可行性。经过5年不懈努力,淮阴区的“蚕技服务单位＋蚕农”的“订单蚕业”从2003年秋的一个组31户50亩生产规模发展到2007年底的56个组2622户近4000亩生产规模。“订单蚕业”这种形式得到了广大蚕农的广泛认同和领导的肯定,并对淮阴区蚕桑生产的生存、稳定与发展产生了积极效应。