禽流感病毒N3亚型神经氨酸酶基因的克隆

本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOLL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT-PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18-T载体上,并进行鉴定和序列测定.测定结果表明所获得的NA基因DNA片段长1451bp,编码469个氨基酸残基,与其他亚型的NA基因编码的氨基酸长度相一致.根据推导的氨基酸序列进行预测,该蛋白具有6个潜在的糖基化位点和19个半胱氨酸残基.与其他亚型的NA基因相比较发现克隆的NA基因符合神经氨酸的分子结构特征,本研究首次获得N3亚型NA基因全序列.     

复方中药防治禽流感试验

因为流感病毒易发生变异，所以该病的预防和控制十分困难，根据禽流感病毒引起鸡发病的病因机制和临床表现进行辨证施治，在体外试验基础上总结出一个方剂，为使中医学理论和现代实验研究有机的结合起来，用H5N1病毒感染SPF鸡建立禽流感发病的病理模型及模拟现地鸡群正常发病情况，对自行研制的复方中药效果进行观察，为临床应用奠定基础。     

A/African Startling/England-Q/983/79(H7N1)与我国H7N2亚型禽流感病毒分离株的比较

本研究通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增了禽流感病毒A/AfricanStartling/Eng-land-Q/983/79(A.S/E.Q)(H7N1)的8个基因片段即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA基因,将其分别克隆到PMD18-T载体后进行序列测定;并将克隆到的8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较分析。结果表明所克窿到的8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架;HA、NA基因的序列分析表明A.S/E.Q符合低致病力禽流感病毒的特征;与我国H7N2亚型AIV分离株A/chicken/Hebei/1/02的序列比较发现,A/chicken/Hebei/1/02的HA、M、NP、PB1、PA基因与A.S/E.Q同源性最高,说明我国北部分离的AIV起源于A.S/E.Q。     

SYBR Green I荧光 RT-PCR方法检测禽流感病毒

为建立检测禽流感病毒(AIV)的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞,收集感染6、12、24、48、72 h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测,试图建立快速检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,并与普通RT-PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明:此次建立的检测AIV的SYBRGreen I荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72 h的AIV,对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5.33%(9/169),而普通RT-PCR方法检出率为6.51%(11/169),病毒滴定检出率为5.62(9/160)。对其他病毒(NDVI、BDVI、BV、VA)则未检测到,且整个检测过程只需4 h,表明该方法特异、准确、快速。     

鸡贫血病—法氏囊病疫苗免疫母鸡后子代雏鸡的免疫学变化

本项目应用现代免疫学新技术对鸡传染性贫血病（CIA）-传染性法氏囊病（IBD）疫苗联合免疫母鸡后,其子代雏鸡外周血液T、B细胞数量和IgG、IgM、IgA含量法及法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺的T细胞和IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量以及泪液、气管液、胆汁、肠液的IgA、IgM、IgG含量的变化进行了动态研究。结果发现,CIA-IBD疫苗联合免疫母鸡后,其子代雏鸡外周血液、免疫器官组织和局部体液的上述各项指标均不同程度地高于未免疫的相应对照雏鸡。表明CIA-IBD疫苗免疫母鸡后,其子代雏鸡的体液免疫和细胞免疫功能明显增强,而CIAV-IBDV强毒攻击后,未免疫的子代雏鸡,其外周血液,免疫器官组织和局部体液的各项免疫学指标均明显低于疫苗免疫攻毒的子代雏鸡,这与未免疫雏鸡缺乏特异性抗体,强毒攻击后,雏鸡免疫器官组织广泛损害,淋巴细胞变性坏死等有关。     

鸡贫血病灭活疫苗免疫后雏鸡免疫状况研究

应用鸡传染性贫血病灭活疫苗免疫雏鸡后,１０、２０、３５、４５天检测了空白对照组、免疫组的外周血液、胸腺、脾脏和法氏囊内ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、γδＴ细胞亚群、ＩｇＧ阳性细胞的变化;并且在３５天、４５天检测免疫攻毒组和攻毒组上述细胞免疫和体液免疫指标的变化。结果显示,应用贫血病灭活疫苗后免疫组雏鸡的Ｔ细胞亚群的ＣＤ４／ＣＤ８比值出现明显降低,ＩｇＧ阳性细胞有升高变化;免疫攻毒组雏鸡状态明显好于攻毒组。研究表明,鸡传染性贫血病疫苗可以激发机体体液免疫反应,并在一定程度上诱导ＣＴＬ活化,对ＣＡＶ攻击产生足够的免疫保护。     

华山松种子园无性系开花习性研究

云南楚雄华山松种子园的无性系,其雌球花着生在树冠外围枝条,而雄球花主要着生在树冠的内膛枝条。在水平方向上,雌球花多着生在树冠南部,雄球花的分布比较均衡;在垂直方向上,雄球花基本分布在树冠的中下部,雌球花则分布在树冠的中上部。大多数无性系的雄球花散粉期比雌花可授期早2~4 d;不同无性系间的雌雄花期具有一定的同步性。各无性系间雌、雄球花数量存在极显著差异,且有明显的偏雌或偏雄特性。雄球花量与无性系生长性状间存在显著正相关,雌球花量与树体生长相关性不显著。     

MRIDWI在胃癌诊断中的作用

目的了解MRI DWI在胃癌诊断中的作用。方法经病理证实为胃癌患者18例和正常者11人,全部做常规MRI扫描（包括横切位T1WI、T2WI、FLAIR、Wats和冠状位B-TFE）后,进行DWI扫描,对比正常胃壁和胃癌的ADC值差异。结果正常人胃壁平均ADC值为（2.5473±0.1706）×10^-3mm^2/s,胃癌的平均ADC值为（1.7632±0.2107）×10^-3mm^2/s（P〈0.01）。在DWI图上胃癌病变呈高信号优于常规MRI序列,但观察解剖细节的显示不如常规MRI。结论MRI DWI和ADC值测量对胃癌诊断有重要意义。     

4种禽病毒抗体可视化蛋白芯片的制备及应用

 【目的】研制可同时鉴别检测AI、ND、IB、IBD等4种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。【方法】用超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了4种病毒蛋白抗原,调整到合适浓度后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;分别用4种禽病阳性血清杂交,再与金标二抗杂交,银染显色后读取结果,建立4种禽病的可视化蛋白芯片工作平台;进一步对此芯片的特异性以及灰度值与抗体浓度的相关性进行了研究;最后对18个现地血清样品进行了初步应用检测。【结果】结果显示经过条件优化后,芯片检测探针可特异性的相应的抗体进行杂交,呈现较强的杂交信号,且无交叉杂交。信号灰度值在抗体浓度为50～300 μg?ml-1范围内成线性关系。用芯片和其它传统抗体检测方法同时检测18份现地样品,结果发现可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且灵敏性明显高于传统检测手段。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别4种禽病抗体,是一种有效的抗体检测新方法。     

种子包衣与施磷肥对烤烟生长及养分累积的影响

选用K326、云烟85、红花大金元等3个烤烟主栽品种进行种子包衣与施磷肥试验.结果表明,烟草种子包衣处理不仅能极大地提高种子的出苗率,而且能够促进种子萌发的速度;但从烟草植株的生物量、根系总根长来看,种子包衣处理都没有表现出较好的趋势,从烟草植株体内氮、磷、钾养分的累积来看,种子包衣处理也没有表现出较好的趋势,说明烟草种子进行包衣处理虽然能够在短期内促进植株的生长,提高其出苗率和缩短出苗时间,但长期效果并不理想.施磷肥能够显著促进供试烤烟品种的生长发育,增加烤烟植株体内钾、磷的含量,降低植株体内氮的含量.