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禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因的克隆及其重组禽痘病毒转移载体的构建 总被引:10,自引:1,他引:9
采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒A/Guangdong/3/96(H5N1)[GD3/96]神经氨酸酶(NA)基因,并将其克隆到pUC18质粒中进行测序。核苷酸序列测定结果为:NA基因全长为1410bp,共编码469个氨基酸,从pUCNA中切下NA基因片段,将其亚克隆到质粒pSY538的EcoR I位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的Sma I位点,然后切下同位含有NA及LacZ基因的片段,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的Not I位点,经限制性内切酶分析,PCR鉴定等,证明含有禽流感病毒NA基因的重组禽痘病毒转移载体已构建成功,从而为进一步筛选表达NA蛋白的重组禽痘病毒及探讨该蛋白的免疫原性鉴定了实验基础。 相似文献
83.
抗鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及在诊断上的应用 总被引:2,自引:1,他引:1
鸡传染性喉气管炎王岗株病毒(ILTV)经SPF鸡肾细胞增殖,差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化;电镜观察,以纯化的病毒4次免疫BALB/c鼠,按常规方法进行细胞融合,采用有限稀释法克隆,经ELISA筛选出3株(8E2、13G6,9C4)分泌抗ILTV特异McAb的杂交瘤细胞,特异性试验表明经闪与鸡的传染性支气管炎,痘病毒,新城疫病毒马立克氏病病毒,白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得三株单抗建立单 相似文献
84.
为建立检测禽流感病毒(AIV)的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞,收集感染6、12、24、48、72 h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测,试图建立快速检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,并与普通RT-PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明:此次建立的检测AIV的SYBRGreen I荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72 h的AIV,对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5.33%(9/169),而普通RT-PCR方法检出率为6.51%(11/169),病毒滴定检出率为5.62(9/160)。对其他病毒(NDVI、BDVI、BV、VA)则未检测到,且整个检测过程只需4 h,表明该方法特异、准确、快速。 相似文献
85.
鸡贫血病灭活疫苗免疫后雏鸡免疫状况研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用鸡传染性贫血病灭活疫苗免疫雏鸡后,10、20、35、45天检测了空白对照组、免疫组的外周血液、胸腺、脾脏和法氏囊内CD3+、CD4+、CD8+、γδT细胞亚群、IgG阳性细胞的变化;并且在35天、45天检测免疫攻毒组和攻毒组上述细胞免疫和体液免疫指标的变化。结果显示,应用贫血病灭活疫苗后免疫组雏鸡的T细胞亚群的CD4/CD8比值出现明显降低,IgG阳性细胞有升高变化;免疫攻毒组雏鸡状态明显好于攻毒组。研究表明,鸡传染性贫血病疫苗可以激发机体体液免疫反应,并在一定程度上诱导CTL活化,对CAV攻击产生足够的免疫保护。 相似文献
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对云南楚雄华山松Pinus armandii Franch无性系种子园结实习性进行调查,结果表明,华山松球果生长期较长,最长约为170d.球果的年生长大致呈"S"型曲线,速生期较明显,为5~7月;华山松球果主要着生在树冠中上部1~2龄枝上,树冠内膛是结实稀疏区,树冠西、南方向结实量明显高于北方.定植密度对树体生长和结实量影响较大,5m×5m密度结实量是其它密度的5倍以上.树冠垂直方向上球果的饱满种子率和出种率无显著差异,而千粒重差异显著,树冠上部种子的千粒重最大,平均427.6g,下部次之,为400.8g,中部为383.9g. 相似文献