催乳素对促性腺激素诱导的鸡卵泡膜细胞类固醇激素合成的抑制作用

利用无血清培养的鸡卵泡（Ｆ３）膜细胞模型研究了催乳素（ＰＲＬ）对卵泡膜细胞类固醇激素合成的作用。用不同剂量的ＰＲＬ、黄体生成素（ＬＨ）及促卵泡激素（ＦＳＨ）分别或共同处理在无血清培养液中培养了４８ｈ的鸡卵泡膜细胞，２４ｈ后收集培养液，测定培养液中睾酮（Ｔ）和雌二醇（Ｅ２）含量。结果表明，ＬＨ能明显刺激膜细胞合成Ｔ和Ｅ２，并具有剂量依赖关系；ＰＲＬ单独对膜细胞类固醇合成无明显作用，但可抑制ＬＨ诱导的Ｔ和Ｅ２合成，以及ＦＳＨ刺激的Ｅ２合成。本研究证明ＰＲＬ能作用于鸡卵泡膜细胞，并能抑制促性腺激素ＬＨ和ＦＳＨ诱导的类固醇激素的合成     

LRH─A3、hCG和PMSG对体外培养条件下牦牛垂体组织LH和FSH分泌的调节

促卵泡素３号（ＬＲＨ－Ａ３）、人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）等３种外源性激素均可增加体外培养条件下牦牛垂体组织分泌ＬＨ和ＦＳＨ的能力。培养液中ＬＨ和ＦＳＨ含量与加入的ＬＲＨ－Ａ３量呈正相关，与加入的ＰＭＳＧ和ｈＣＧ的量无显著关系     

LRH—A3,hCG和PMSG对体外培养条件下牦牛垂体组织LH和FSH分泌的调节

促卵泡素３号（ＬＲＨ－Ａ３）、人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）等３种外源性激素均可增加体外培养条件下牦牛垂体组织分泌ＬＨ和ＦＳＨ的能力。培养液中ＬＨ和ＦＳＨ含量与加入的ＬＲＨ－Ａ３量呈正相关，与加入的ＰＭＳＧ和ｈＣ的量无显著关系。     

外源激素对间情期毕格犬发情及妊娠的影响

给６只间情期雌性毕格犬注射外源激素雌酮（Ｅ１）、孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）、人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和雌二醇（Ｅ２），结果有５只犬发情，３只受孕，产仔１４只。发情前期、发情期与自然发情犬无明显差别。发情犬血浆ＬＨ高峰出现在阴门见有血样分泌物后（１１．６±１．６）ｄ；在ＬＨ高峰期血浆孕酮（Ｐ４）明显升高，其后１２ｄ，Ｐ４含量达峰值；８０％阴道上皮细胞角化后（６．４０±０．６８）ｄ出现ＬＨ峰     

几种动物血清作为CEF培养天然培养基的比较研究

测试了６种不同动物血清作为鸡胚成纤维细胞（ＣｈｉｃｋｅｎＥｍｂｒｙｏＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＣＥＦ）培养天然培养基的效果。其结果为：所试各血清对ＣＥＦ均具有促细胞贴壁作用。胎牛血清、鸡血清、兔血清促细胞生长作用较强，２４ｈ可使ＣＥＦ长满单层；胎牛血清支持细胞生存期最长（２０ｄ），其次是成牛血清和山羊血清（１７ｄ）。     

同源GnRH对无血清培养鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用

选用产蛋规律的鸡，在一个产蛋序列中，排卵前１～３ｈ剖腹收集各级卵泡，分离颗粒层建立卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型。在此基础上，用不同剂量鸡促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ－Ⅱ）单独处理或与羊ＬＨ（ｏＬＨ）协同处理，并使用ＧｎＲＨ－Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ（ＧＡ），以观察ＧｎＲＨ－Ⅱ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。研究获得了以下结果：（１）ＧｎＲＨ－Ⅱ对鸡不同卵抱（Ｆ１、Ｆ３、Ｆ５）颗粒细胞孕酮分泌均有促进作用，并呈现剂量－反应关系；（２）ＧｎＲＨ－对ｏＬＨ促鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌有明显的协同作用；（３）ＧｎＲＨ拮抗物使ＧｎＲＨ－Ⅱ的促卵泡颗粒细胞孕酮分泌作用受到阻断。     

体外无血清培养的鸡卵泡细胞GnRH样肽分泌的研究

本实验通过^125I标记的鸡GnRH与同源血清（抗体）反应,建立了鸡GnRH放射免疫分析法（ＲＩＡ）,并用以检测体外无血清培养的鸡卵泡细胞,证明卵泡膜细胞（ＴＣ）和颗粒细胞（ＧＣ）培养液中均存在GnRH-Ⅱ样肽样肽物质,并发现ＴＣ细胞培养液中的GnRH-Ⅱ样肽含量在７２h内随培养时间加长而增多,而ＧＣ细胞培养液中GnRH样肽含量变化不明显。实验结果表明卵泡细胞能产生GnRH-Ⅱ肽样物质。     

我国1株鹦鹉幼稚病毒的细胞培养特性

为进一步研究鹦鹉幼稚病病毒（ＢＦＤＶ）的分子生物学特性奠定基础,对ＢＦＤＶ湖北分离株进行了２种原代细胞的适应性培养。首先在鹦鹉胚成纤维细胞盲传至第５代后再过渡到鸡胚成纤维细胞培养,建立了ＢＦＤＶ的适应细胞培养体系。观察了３种不同温度对细胞病变（ＣＰＥ）的影响,结果表明,ＢＦＤＶ在３８．５℃培养４８～９６ｈ可产生明显的ＣＰＥ。再将该培养液做免疫扩散试验结果出现明显的免疫复合物沉淀线,抗体中和试验显示     

催乳素调节鸡卵泡膜细胞功能的机理

在明确催乳素（ＰＲＬ）对鸡卵泡膜细胞功能调节作用的基础上,探讨了酪氨酸激酶活性,ｃＡＭＰ系统和钙离子在ＰＲＬ调节膜细胞功能中的作用。结果表明,酪氨酸激酶抑制剂Ｇｅｎｉｅｓｔｉｎ能部分阻断ＰＲＬ对ＦＳＨ促膜细胞雌二醇（Ｅ２）合成的抑制作用,磷酸二酯酶抑制剂ＭＩＸ亦能部分消除ＰＲＬ对ＦＳＨ促Ｅ２合成的抑制作用,而细胞外钙离子浓度和电压依赖式钙通道在ＰＲＬ调节的膜细胞功能中无明显作用。     

猪卵丘卵母细胞复合体和壁层颗粒细胞上LHR/hCGR的检测及性腺激素的分泌

用取自 ３～５ ｍ ｍ 卵泡的处于减数分裂阻抑状态的猪卵丘卵母细胞复合体（ｐ Ｃ Ｅ Ｏ），培养 ４８ ｈ，用 Ｆ Ｓ Ｈ（１００ Ｉ Ｕ／ Ｌ）或 ｈ Ｃ Ｇ（０、５０、１００、２００、５００ Ｉ Ｕ／ Ｌ）刺激 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 分泌甾体激素；用放射受体测定法（ Ｒ Ｒ Ａ）比较 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 的卵丘细胞及壁层颗粒细胞（ Ｍ Ｇ Ｃ）上促黄体激素受体／人绒毛膜促性腺激素受体（ Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ）的数量； Ａ Ｍ ｅ Ｘ 石蜡切片、免疫组织化学染色，检测 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 在 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 以及 Ｍ Ｇ Ｃ 的分布情况。在 Ｆ Ｓ Ｈ 作用下，ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 分泌的孕酮明显高于 ｈ Ｃ Ｇ 作用组和对照组 （ Ｐ ＜ ００５）； 平均每个壁层颗粒细胞上的 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ是每个卵丘细胞的 １０５ 倍； Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 在基膜两侧分布较多，且卵母细胞上没有 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ，临近卵母细胞的卵丘细胞膜上较少被染色。以上结果表明，在体外试验中，可能由于 Ｃ Ｅ Ｏ 上 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 的数量不足或生理活性降低， Ｌ Ｈ／ｈ Ｃ Ｇ 不能促进卵母细胞恢复减数分裂。     

传染性支气管炎病毒在鸡胚成纤维细胞中适应及复制的生物学特性研究

将传染性支气管郯病毒ＩＢＶ－ＮＨ、Ｔ、Ｈ５２、Ｍ４１适应鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,连续传代获得毒价稳定细胞适应毒并对其生物学特性进行研究。观察了ＩＢＶ致ＣＥＦ细胞病变效应的特征,测定ＴＣＩＤ５０滴度为１０６．０～１０６．０。细胞培养病毒提纯后负染置电镜下进行形态学观察,见到典型的冠状病毒粒子。病毒经胰酶处理显示出血凝特性,该血凝性能被特异性血清所抑制。表明ＣＥＦ细胞病变（ＣＰＥ）确为ＩＢＶ所致。通过对４株ＩＢＶ在ＣＥＦ细胞中最佳培养时间及繁殖量关系的摸索,证实了３６～７２ｈ释放到培养液中有活性的病毒粒子达高峰,ＴＣＩＤ５０最高可达１０７．０／ｍｌ。     

类阿片肽对山羊生殖内分泌的调节Ⅱ．吗啡和纳洛酮在体外对促性腺激素的影响

利用含早卵泡期山羊血清或中黄体期山羊血清的培养液，对山羊腺垂体细胞进行２４ｈ体外培养，并在培养液中分别加入阿片受体兴奋剂——盐酸吗啡和其拮抗剂——盐酸纳洛酮，研究了类阿片肽对山羊垂体细胞分泌促性腺激素功能的影响。结果表明，在两种培养条件下，吗啡或纳洛酮对垂体促性腺激素的分泌均无显著影响（Ｐ＞０．０５）。因而认为，在山羊，类阿片肽对垂体细胞促性腺激素的分泌无直接调节作用。     

IGF-Ⅰ对山羊睾丸间质细胞分泌睾酮的调节机理

以３０～４０日龄山羊的睾丸间质细胞为研究对象,采用体外细胞培养的方法,用胰岛素样生长因子－Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）和ｈＣＧ进行不同的处理,用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定了睾酮和ｃＡＭＰ的含量,用荧光分光光度分析法测定了ＤＮＡ含量。结果表明,ＩＧＦ－Ⅰ能促进体外培养的山羊睾丸间质细胞ｃＡＭＰ生成、睾酮分泌及ＤＮＡ合成,以上作用随ＩＧＦ－Ⅰ剂量的增大而加强,并且与ｈＣＧ有协同作用。根据以上结果首次提出ＩＧＦ－Ⅰ调节山羊睾丸间质细胞分泌睾酮机理的假设：ＩＧＦ－Ⅰ与其膜受体结合引起ｃＡＭＰ增多,ｃＡＭＰ通过激活一系列合成ＤＮＡ和睾酮所需酶类而使ＤＮＡ和睾酮的合成增加。这与催乳素（ＰＲＬ）和白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）等含氮激素（因子）调节间质细胞分泌睾酮的机理不同,而与ＦＳＨ、ＬＨ等含氮激素调节性腺分泌类固醇激素的作用机理相似。     

GnRH促鸡卵泡颗粒细胞孕酮合成功能作用机制的研究

本实验选用掌握产蛋规律的莱航鸡，在排卵前１６－１８ｈ剖腹取卵泡，分离和纯化颗粒细胞。采用无血清贴壁培养法，初步探讨了鸡促性腺激素释放激素促颗粒细胞孕酮合成的作用机制。获得以下结果：（１）ＰＫＣ阻断剂Ｈ７（２５－５０μｍｏｌ／Ｌ）能阻断ＧｎＲＨ－Ⅱ促颗粒细胞Ｐ４合成作用；（２）磷酸二酯酶抑制剂ＭＩＸ（１０＾－５－１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ）能促进Ｐ４分泌，但对ＧｎＲＨ－Ⅱ促Ｐ４合成效应无明显影响；（３）钙     

乙型脑炎病毒HW_1克隆纯化株的鉴定及外源性污染的检定

应用病毒蚀斑技术，将乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）ＨＷ１株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层培养上连续挑斑纯化３次，对纯化后的克隆株进行血清学、免疫生物学鉴定及外源性污染检定。毒株对ＢＨＫ－２１细胞感染滴度≥１０６．１５ＴＣＩＤ５０；对８～９ｇ小鼠脑内感染的毒力≥１０７．１０ＬＤ５０／０．０４ｍＬ；与ＪＥＶＰ３株阳性参考血清的中和指数≥２０００；克隆株对猪有较好的免疫原性，无外源性污染。     

免疫鸡羽毛根中火鸡疱疹病毒的分离与鉴定

用常规剂量的商用火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗经腹腔免疫１日龄非免疫鸡，于第３周采集羽毛根，分别采取直接法和间接法（即经过滤获取脱细胞的游离物）接种次代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），以进行病毒的分离。结果显示，在免疫后第３、４、５、６周，２种方法都分离到病毒，第７周仅直接法分离到病毒，而第８周２种方法都没有分离到。根据分离到病毒的细胞病变（ＣＰＥ）特征，结合地高辛标记的Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ－１）核酸探针检测结果，表明ＨＶＴ免疫鸡羽毛根中含有可脱离细胞的、具有感染性的疫苗株ＨＶＴ粒子，且其可检出时间具有阶段性。     

pCMV－TNFα的构建及其在动物细胞中的表达

以ＸｂａⅠ和ＥｃｏＲＶ双酶消化ｐＢＴ１获得肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）ｃＤＮＡ基因片段，以ＸｂａⅠ和ＳｍａⅠ酶切点定向克隆入质粒载体ｐＣＭＶ４，构建了人ＴＮＦα重组质粒ｐＣＭＶ－ＴＮＦα。采用ＤＮＡ—磷酸钙共沉淀法转染ＣＯＳ７和ＮＩＨ３Ｔ３细胞，收集转染后不同时间的细胞培养上清，检测ＴＮＦα的表达水平和生物学活性。ＥＬＩＳＡ检测表明，两种细胞转染后，其培养上清中均有ＴＮＦα抗原存在，而载体等对照则测不出ＴＮＦα。以Ｌ９２９细胞检测其细胞毒活性，发现ＣＯＳ７细胞于转染后４８ｈ表达水平最高，活性高达１６Ｕ／ｍＬ以上，但７ｄ时测不出ＴＮＦα活性；ＮＩＨ３Ｔ３细胞于转染后２４ｈ活性最高（８Ｕ／ｍＬ），９ｄ时尚有表达，但不足１Ｕ／ｍＬ。     

LRH－A_3诱导初情期前母猪发情排卵的效果和机理研究

本研究探讨了ＬＲＨ－Ａ３诱导初情期前北京黑猪发情排卵的效果及其内分泌机理。对６头１５０日龄母猪肌注ＬＲＨ－Ａ３，７５μｇ／头。在注射后０，１，２，３和４ｈ及注射后１，２，３和４ｄ采血测定ＬＨ、ＦＳＨ、Ｅ２和Ｐ４浓度。注射后１０ｄ取卵巢，根据卵巢上黄体数计算排卵率。结果表明：注射ＬＲＨ－Ａ３后，出现排卵和卵巢囊肿的母猪分别为４头（６６．７％）和２头（３３．７％）。４头排卵母猪中的３头和２头卵巢囊肿母猪中的１头有发情表现。排卵的母猪，分别在注射后１ｈ和３ｈ出现ＬＨ和ＦＳＨ峰；注射后２ｄＥ２浓度最高，３ｄ和４ｄＰ４浓度上升。发生卵巢囊肿的母猪，注射后１ｈ出现明显低于排卵母猪的ＬＨ峰，而ＦＳＨ浓度没有上升，Ｅ２和Ｐ４在３ｄ和４ｄ都增加。通过试验认为，初情期前母猪的卵巢对ＬＲＨ－Ａ３至少有两种反应，即排卵或卵巢囊肿。     

鸡血液激素与抗病力相关性研究

本试验以ＡＡ肉鸡父母代和商品代为试验材料，对其自浆中皮质酮，三碘甲腺原氨酸（Ｔ３），甲状腺素（Ｔ４）和生长激素（ＧＨ）进行测定，并对部分鸡进行马立克强毒接种，以探讨血浆激素与抗病力关系。结果表明，７周龄不同基因型鸡间存在明显差异。血液Ｔ淋巴细胞活性在商品代明显高于父母代。马立克强毒接种后血浆高，低皮质酮水平间Ｔ淋巴细胞活性有明显差异。相关估计结果表明，血浆激素大多与Ｔ淋巴细胞呈低正相关，而皮质酮与     

促卵泡激素和胰岛素对牛卵泡颗粒细胞长期培养的影响

以McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺，对牛卵巢上大（直径〉8mm）、中（4mm〈直径〈8mm）、小（直径〈4mm）非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养，研究添加不同浓度的促卵泡激素（FSH）和胰岛素对颗粒细胞增生、分化和激素分泌的影响。结果，FSH能诱导颗粒细胞增生及提高其雌二醇合成能力，颗粒细胞雌二醇的合成能力与生理浓度的FSH存在剂量依赖关系。胰岛素对大、中、小卵泡颗粒细胞增生和雌激素分泌有促进作用。