同源GnRH对无血清培养鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用

选用产蛋规律的鸡，在一个产蛋序列中，排卵前１～３ｈ剖腹收集各级卵泡，分离颗粒层建立卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型。在此基础上，用不同剂量鸡促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ－Ⅱ）单独处理或与羊ＬＨ（ｏＬＨ）协同处理，并使用ＧｎＲＨ－Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ（ＧＡ），以观察ＧｎＲＨ－Ⅱ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。研究获得了以下结果：（１）ＧｎＲＨ－Ⅱ对鸡不同卵抱（Ｆ１、Ｆ３、Ｆ５）颗粒细胞孕酮分泌均有促进作用，并呈现剂量－反应关系；（２）ＧｎＲＨ－对ｏＬＨ促鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌有明显的协同作用；（３）ＧｎＲＨ拮抗物使ＧｎＲＨ－Ⅱ的促卵泡颗粒细胞孕酮分泌作用受到阻断。     

牛腔前卵泡在体外无血清培养中发育为有腔卵泡

用无血清培养系统研究了牛腔前卵泡的体外培养。直径为100－200μm的牛腔前卵泡在添加L－谷氨酰胺、BSA、睾酮、转铁蛋白和硒的McCoy′s 5a培养液中培养，卵泡保持正常的形态结构并持续生长，培养10d左右形成贸泡腔，成腔率约50％。培养液中添加胰岛素对卵泡直径的增长和卵泡腔的形成有明显的促进作用，但添加FSH对腔前卵泡的生长未表现促进作用。     

鸡卵泡细胞GnRH受体定位和定量分析

本实验采用免疫组织化学ＰＡＰ法对体外培养的鸡卵泡细胞ＧｎＲＨ受体定位检查,证明了卵泡颗粒细胞和膜细胞上均存在能与鸡ＧｎＲＨ结合的阳性物质。     

牛卵泡颗粒细胞无血清培养的形态学观察

McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 ( 4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养。McCoy’s5a无血清培养中的颗粒细胞形态与分化特点类似于体内情况 ,说明颗粒细胞在该培养条件下 ,其功能可能更接近体内的生理状况     

牛卵泡颗粒细胞无血清培养的形态学观察

以McCoy＇s 5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺，对牛卵巢上大（直径＞8mm）、中（4mm＜直径＜8mm）、小（直径＜4mm）非闭销卵泡的颗粒细胞进行无血清培养。结果表明，McCoy＇s 5a无血清培养中的颗粒细胞形态与分化特点类似于体内情况，说明颗粒细胞在该培养条件下，其功能可能更接近体内的生理状况。     

适应无血清培养的HEK293细胞系的培育

为培育适合腺病毒增殖的无血清培养细胞系,本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(293SF),经检测293SF细胞具有稳定的支持腺病毒增殖与表达外源蛋白的能力;平均病变时间为97 h,比HEK293细胞缩短12.9%;毒价达到107.48TCID50/mL,比HEK293细胞提高43.3%;并且稳定性良好,连续传16代后293SF细胞状态与易感性未发生变化。该细胞系为腺病毒的无血清培养奠定基础。     

Vero细胞无血清培养基研究进展

Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的生产人和动物疫苗的细胞系。为了避免外来污染和血清中不确定成分对细胞生长及其下游工作带来的影响,用无血清培养基或化学成分明确的培养基培养Vero细胞已成为病毒疫苗生产的一个重要发展趋势。Vero细胞无血清培养基的组成包括基础培养基和添加因子两大部分,常见的添加因子有转铁蛋白、胰岛素、微量元素、生长因子和维生素等。论文对Vero细胞无血清培养基的研究进展做一综述,以期为Vero细胞的无血清培养基研制及疫苗的生产提供参考。     

昆虫细胞无血清培养基的研究

为开发昆虫细胞无血清悬浮培养基,以基础培养基Grace's Insect medium为基础,添加葡萄糖、水解乳蛋白、酵母粉和PF-68等组份后,分别接种Sf-21、Hi-five两种昆虫细胞进行无血清悬浮培养。结果显示:两株昆虫细胞生长均较好,均能够很好的全悬浮生长,Sf-21细胞最高密度可达(39.8±2.6)×105/ml,Hifive细胞最高密度可达(44.4±1.0)×105/ml。本研究为昆虫细胞培养提供一种无血清悬浮培养基配方,为我国利用昆虫细胞杆状病毒表达系统生产生物制品提供基础保障。     

哺乳动物细胞无血清全悬浮培养技术研究进展

随着生物制品行业的快速发展,哺乳动物细胞无血清全悬浮培养技术已经运用到越来越多的领域中。该技术能够扩大哺乳动物细胞培养的规模,提高生物制品的产量及质量,拓宽哺乳动物细胞的应用领域,并促进哺乳动物细胞生产实现工业化与产业化。但悬浮驯化后的细胞,与父母代细胞相比,蛋白表达水平与生长调节通路均发生了不同程度的改变,使其生产性能受到影响。对此,国内外学者开展了大量的研究并取得了较好进展。作者阐述了哺乳动物细胞无血清全悬浮培养技术的研究现状以及临床生产工艺的优化策略,以期为哺乳动物细胞无血清全悬浮培养技术的发展提供参考。     

体外无血清培养牛垂体细胞分泌催乳素的调节—性腺激素的作用

本实验对牛垂体混合细胞进行24小时体外无血清培养,对其分泌催乳素的功能进行了观察,并分别在培养介质中加入0、1、10、100ng/ml的孕酮、脱氢表雄酮、雄烯二酮、雌二醇和睾酮,用放射免疫测定法测定培养液介质中催乳素含量,以研究这些性腺激素和中间产物对垂体细胞分泌催乳素的影响。结果表明:孕酮对离体牛垂体细胞无血清培养条件下分泌催乳素的功能没有影响。而脱氢表雄酮、雄烯二酮、睾酮和雌激素均引起催乳素分泌量显著升高,说明这些性腺类固醇激素对牛垂体细胞离体培养分泌催乳素具有促进作用,可能是垂体前叶催乳素分泌调节的重要组成部分。     

鸡球虫广东清远分离株对七种药物的抗药性试验

为了了解广东清远某鸡场球虫抗药性的产生程度,并制定出合理的用药方案,给延长药物的使用周期提供科学的依据,我们从该鸡场现场采集了新鲜粪便,实验室分离和繁殖卵囊,并在实验室进行球虫的抗药性研究.经检测粪中含堆型艾美耳球虫(E.acervulina)和变位艾美耳球虫(E.mtvati)共81.3%,柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)18.7%.试验选择目前常用的7种抗球虫药物,分别为球佳(地克珠利Diclazuril)、杜球(马杜拉霉素Madu-ramicin)、欲可胖(莫能菌素Monensin)、球安(拉沙里霉素Lasalocid)、氨丙啉(Amprolian)、球克(海南霉素Hainan-mycm)、氯苯胍(Robenidine).试验设7个药物组和感染不用药、不感染不用药2个对照组,每组10只鸡.在15日龄,除不感染不用药组外,每组接种孢子化卵囊12×104个.以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)、最适抗球虫活性百分率(POAA)为试验指标,进行综合评定.结果显示鸡球虫广东清远株对球佳为轻度抗药,对杜球、欲可胖、球安、氨丙啉为完全抗药,对球克、氯苯胍为中度抗药.     

成年型牛淋巴肉瘤淋巴样细胞的细胞化学研究

应用过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)免疫酶标技术及酸性α-萘酯乙酸酯酶(ANAE)、Mg~( )-ATP酶技术等细胞化学方法,研究了10例乳牛成年型淋巴肉瘤淋巴样细胞的细胞化学特性。结果显示,绝大多数淋巴样细胞具有表面膜免疫球蛋白(Smlg)及膜Mg~( )-ATP酶活性,证明南京及皖南地区乳牛地方流行性白血病系B淋巴细胞增生。肿瘤组织中淋巴样细胞以弥散性增生为特证,在形态上存在大小两种细胞类型,虽均带有Smlg,但小型细胞又多呈ANAE阳性,提示后者是起源于B淋巴细胞的ANAE活性异常升高的类型,ANAE技术不适用于牛白血病T、B淋巴细胞的鉴别。     

影响鸡羽毛中锌含量因素的探讨

鸡羽毛中锌的含量,除了受饲粮中锌水平影响外,还与饲养用具(镀锌)、鸡的生理时期(周龄)、鸡体部位(样羽)、羽毛不同部分等因素有关。试验结果认为,影响鸡羽毛中锌含量的因素很多,应用羽毛锌含量作为鸡整体锌营养状况的诊断指标,必须慎重。只有严格控制各种影响因素,其结果才有可比性和实用性。     

地克珠利在雏鸡体内的药动学研究

目的应用高效液相色谱测定单次给药后雏鸡体内地克珠利的血药浓度,研究其药动学规律。方法44羽雏鸡按10mg／kg．BW经口单次灌服地克珠利预混剂,采用高效液相色谱系统的流动相为乙腈：0．1％三氟乙酸：水,流速1．0mL／min,分流比57：20：23,固定相为TC-C18柱,检测波长280nm,测定地克珠利血浆浓度,计算其药动学参数。结果在0．3125～20μg／mL范围内,地克珠利血药浓度呈线性关系,最低检测浓度为0．16μg／mL,回收率在79．75％以上,日内RSD小于5．68％。单剂量给药后地克珠利的主要药动学参数为：血药浓度峰值（Cmax）32．97μg／mL,达峰时间（Tpeak）1．64h,消除半衰期（T1／2β）24．29h,药时曲线下面积（AUC）349．47（mg／L）·h,血浆清除率（CL）0．03mg／kg·h。结论地克珠利在雏鸡体内代谢符合一级吸收的二室模型,药物吸收比较快和消除缓慢。     

马杜霉素在鸡组织中残留消除及临床毒性的研究

本文报道以3.0、5.0、7.0和9.0mg/kg马杜霉素剂量水平添加到饲料中饲喂AA肉鸡,研究马杜霉素对肉鸡的毒性作用及其在鸡组织中的残留消除。从临床症状、增重与饲料转化、死亡率、血清生化参数以及组织病理学等方面研究结果表明,饲料中添加3.0－5.0mg/kg剂量马杜霉素对肉鸡是安全的,未见任何毒副作用,而7.0-9.0mg/kg剂量则引起肉鸡中毒,中毒表现为,增重和饲料转化率明显下降,血清AST异常升高,心脏和肝脏出现病理变化。残留消除研究表明,马杜霉素主要残留于肉鸡的脂肪和肝脏,其次是肾脏,肌肉中残留最少。马杜霉素以5.0mg/kg剂量添加于饲料中饲喂肉鸡,停药2－3d,肉鸡组织中马杜霉素的残留量低于最高残留限量的规定。.     

氟对家蚕胚胎培养细胞毒性的研究

用细胞培养的方法,研究了氟对家蚕胚胎培养细胞的毒性。测得培养液中氟对细胞的半致死剂量(LD_(50))为21.63ppm,最大致死剂量(LD_(90))为56.94ppm,最小致死剂量(LD_(10))为8.22ppm。当培养液中氟浓度为LD_(50)时,家蚕胚胎培养细胞的死亡率与培养时间的关系为:Y(细胞死亡率)=0.1505X(培养时间)—0.0187,相关系数r=0.9966。同时还测定了氟对培养细胞增殖度的影响。为研究和防治家蚕氟中毒提供了依据。     

鸡组织中新霉素药物残留的微生物学检测方法的研究

新霉素（Neomycin）是由链霉菌属弗氏链霉菌（Streptomyces fradiae)经发酵培养产生的一种氨基酸糖甙类抗生素,目前,它作为一种常用兽药和具有发展前景的饲料添药物在畜牧业中广为使用。为了控制新霉素在动物性食品中的残留,保障食品卫生和公共健康,本研究首次在国内对鸡体内新霉素残留的微生物学检测方法进行了研究。本研究选择2倍于样本重量的0．1mol／L磷酸盐缓冲液（PH8．0）为组织提取液,经加热、离心除去蛋白质,用测试菌为表皮葡萄球菌（Stphylococcus eqidermidis)的微生物学杯碟法测定提取液中新霉素的含量。本方法的灵敏度为0．15－0．2μg/mL,检测限为0．5－0．75μg.g^-1组织,回收率为85．3％－93．2％,回收率比FDA的传统 显著提高。