恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在猪粪便及尿液中的排泄研究

给猪连续3d饲喂含无味恩诺沙星的饲料后，对其排泄的粪便和尿液进行了药物含量测定结果表明，粪便和尿液中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的排泄量都比较高，粪便中排泄的药物浓度显著高于尿液中药物排泄的浓度，停止给药后第15天，在猪粪中可检测到恩诺沙星，停止给药后第10天，猪尿液中可检测到环丙沙星。     

应用ELISA(双抗体夹心法)检测猪流行性腹泻病猪粪便中的病毒抗原

应用猪流行性腹泻(PED)—ELISA直接法(双抗体夹心法)对120头健康猪和5头猪传染性胃肠炎(TGE)病猪粪便标本进行检测,均不出现交叉反应;对15头PED病毒实验感染仔猪粪便标本检测,全部呈阳性;将对3(?)份ELISA阳性粪便标本和3份阴性标本的检测结果与电镜观察结果比较,其阳性符合率为97.37％,阴性符合率为100％;对在PED发病季节从不同地区采集的腹泻病猪粪便标本112份检测结果,阳性率为60.71％,而阴性反应的标本,绝大多数是在病愈后15～20d采集的。     

牦牛IGFBP4对肝细胞增殖的调控及功能分析

旨在探究牦牛胰岛素样生长因子结合蛋白4(Bos grunniens insulin-like growth factor binding protein 4, BgIGFBP4)在牦牛肝细胞增殖及小鼠生长中的作用。本研究构建了pET-28a-BgIGFBP4原核表达载体，对其进行表达、鉴定，用终浓度为0.002、0.02、0.2、2、20 μg·mL^-1的BgIGFBP4蛋白处理肝细胞，采用CCK8法、细胞集落形成试验检测BgIGFBP4蛋白对肝细胞增殖能力的影响。再根据试验结果选取浓度蛋白处理肝细胞，检测24、48、72 h时肝细胞活性、肝细胞上清生长类激素和肝细胞PI3K-Akt信号通路的变化。选取30日龄((18±1)g)健康雄性KM小鼠，试验组每2 d灌喂100 μL 50 μg·mL^-1 BgIGFBP4蛋白，对照组用等量0.9%的生理盐水进行灌喂，每组40只，共80只。试验前进行饥饿处理12 h，试验周期为28 d，在试验28 d时检测各项生长性能指标、血清生长类激素水平和肝PI3K-Akt信号通路的变化。结果显示，获得大小约28.86 ku的BgIGFBP4蛋白，并纯化鉴定得到该目的蛋白。2 μg·mL^-1 BgIGFBP4蛋白可促进牦牛肝细胞增殖及集落形成。与对照组相比，试验组(2 μg·mL^-1BgIGFBP4蛋白处理)肝细胞上清GH、VEGF含量显著升高(P<0.05)，肝细胞中PI3K-Akt信号通路细胞增殖相关基因ERBB2、IRS1、PIK3R1、AKT1、RAF1、MAPK3转录水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比，试验组(100 μL 50 μg·mL^-1 BgIGFBP4蛋白处理)小鼠平均日增重显著增加、料重比显著降低，肝、脾、肺、肾、小肠器官指数显著增加(P<0.05)。试验组小鼠血清GH、ISN、VEGF含量显著升高(P<0.05)，小鼠肝中PI3K-Akt信号通路相关基因ERBB2、IRS1、PIK3R1、AKT1、RAF1、MAPK3的转录水平显著升高(P<0.05)。综上表明，BgIGFBP4可通过调控PI3K-Akt信号通路促进牦牛肝细胞增殖、并能促进小鼠生长。这为深入研究IGFBP4在牦牛肝生长发育过程中的作用提供了参考。     

两种免疫酶试剂盒检测猪抗E型肝炎病毒IgG的比较

目的比较两种免疫酶试剂盒recomWell HEV IgG(swine)ELISA(recom Well )和recomLine HEV IgG(swine)(recom Line )检测猪抗E型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)IgG的准确性。方法分别采用基因3型和基因4型人HEV(human HEV,hHEV)人工感染无菌猪各2头,采用上述试剂盒检测猪感染后不同天数的血清样品中抗HEV IgG,同时对两头接种PBS液的无菌猪血清样品18份和4头未感染猪的18份血清进行了检测。结果 2头猪人工感染基因3型hHEV后,recomWell检测均于感染后21d出现阳性,并持续56d;recomLine检测,其中1头猪于感染后14d呈阳性,而另1头于感染后21d呈阳性,且均持续56d。2头猪人工感染基因4型hHEV后,两种试剂盒检测,其中1头猪于感染后21d呈阳性,另1头35d呈阳性,并均持续56d仍为阳性。18份对照血清两种试剂盒检测均为阴性。18份未人工感染猪血清中,只有1份两种试剂盒检测均为阳性。两种试剂盒同时检测的共72份样品中,recomWell检出阳性样品23份,阳性率约为32.0%(23/72),recomLine检出阳性样品24份,阳性率约为33.30%(24/72),检出阳性率两者差异不显著(P>0.05);在recomWell检出的23份阳性样品中,recomLine检测均为阳性,两者阳性检出符合率为100%(23/23);recomWell的漏检率约为4.1%(1/24)。结论 recomWellR和recomLine均可用于猪抗HEVIgG的检测,recomLine检测灵敏度略高于recomWell,且操作更简便,不需要特殊昂贵的检测设备,特别适合用于基层检测猪抗HEV IgG。     

液相色谱-电喷雾质谱检测猪尿液中的蓖麻碱

试验建立了猪尿液中蓖麻碱的液相色谱-电喷雾质谱检测方法。尿液样本经聚合物填料固相萃取小柱(反相保留机制)净化,消除了基质的离子抑制效应,达到使用外标法定量蓖麻碱的目的。蓖麻碱的检测使用阳离子方式,以m/z165为定量离子,m/z138、84和82为佐证离子,做选择离子检测。在考察的浓度范围内(0.005～1.00μg/ml),方法有良好的线性(R2>0.99),检出限为6pg,定量限为15pg,添加回收率96.4%～101%,相对标准偏差3.74%～5.29%。动物试验显示,猪每千克体重饲喂0.2g的蓖麻粕后,在监测的5～20h内,其尿液中蓖麻碱保持相对较高的浓度。     

钩吻提取物对猪肝脏药物代谢酶活性的影响

为了研究钩吻提取物对猪肝脏细胞色素P450(CYP450)和醌氧化还原酶(NQO1)活性的影响，本试验选用95%乙醇溶液制备钩吻醇提取物和0.5%硫酸溶液制备钩吻酸水提取物，将56日龄仔猪随机分为5个组，每组15只，分别为T1组(基础日粮)、T2组(基础日粮+150μg/mL钩吻酸水提取物)、T3组(基础日粮+25μg/mL钩吻醇提取物)、T4组(基础日粮+50μg/mL钩吻醇提取物)和T5组(基础日粮+100μg/mL钩吻醇提取物),连续饲喂47 d,取肝脏制备微粒体和胞液，通过比色法分析钩吻提取物对肝微粒体中氨基比林-N-脱甲基酶(AND)和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性的影响，并探究钩吻提取物对肝胞液中NQO1活性的影响。结果显示，与T1组相比，T2组对AND和ERND活性无显著影响(P>0.05),而T3组和T4组对两者活性均具有诱导作用(P<0.05或P<0.01);2种提取物均能极显著抑制NOQ1活性(P<0.01)。结果表明，钩吻醇提取物对CYP450活性具有诱导作用，钩吻提取物对NQO1活性有抑制作用。本试验揭示了钩吻对药物代谢酶存在影响，...     

急性感染猪瘟病毒猪体外排毒规律的观察

为研究CSFV感染后在体外的传播途径、排毒规律,针对CSFV基因组设计了一对引物和一条探针,建立了一套CSFV荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并以质粒为标准品得到扩增标准曲线.对18个CSFV阳性质控样本检测全阳性,6个CSFV阴性质控样本检测全阴性,显示良好敏感性和特异性.应用此方法对石门株感染的16头60日龄长白猪和1头阴性对照猪的粪便、尿液、眼分泌物和唾液中病毒含量进行了动态测定,结果表明从感染后第1天到频死前第8天,粪便中均能检测出病毒;尿液和眼分泌物至少能从第3天,唾液从第4天开始检测出病毒,且病毒含量呈增加趋势.本研究对急性感染猪瘟病毒猪体外排毒规律进行了系统研究,为弄清CSFV感染病程、致病机理及临床诊断奠定了重要理论基础.     

蹄病奶牛血液与尿液部分指标的检测及病因分析

针对广西某奶牛场蹄病发病率高的现状,选择34例蹄病奶牛采集其尿液和血液,应用尿常规快速自动分析仪对部分尿液指标和血浆钙、磷水平进行检测与分析。结果表明:尿糖、尿胆红素呈阴性,尿血微量,尿比重、尿pH、尿酮异常者占23.5%(8例),尿蛋白呈阳性者占35.2%(12例);血浆钙平均值为8.3 m g/d l,低于正常参考值(9~12 m g/d l)的下限;血浆磷平均值为6.8 m g/d l,高于正常参考值(4~6 m g/d l)的上限。经过综合分析,认为本病例的发生与亚急性瘤胃酸中毒有关。     

中药复方汤剂对犬草酸钙尿结晶形成的影响

12只雄性中华田园犬随机分为对照组、模型组和治疗组。对照组饲喂基础日粮,模型组和治疗组在饲喂基础日粮的基础上,饮食中添加乙二醇、氯化铵、碳酸钙和维生素D。待试验犬尿液中出现大量草酸钙结晶后,对治疗组犬只灌服中药复方汤剂。试验过程中检测试验犬血液生化指标(包括血清中钙、镁、磷含量)和尿液指标(包括尿液晶体数量变化、尿比重、尿蛋白和尿液pH值)。结果显示:试验开始21d后,模型组与治疗组尿沉渣中出现大量草酸钙结晶;经药物治疗后,治疗组尿沉渣晶体数量比模型组逐渐减少;与模型组相比,治疗组能降低血清中钙、磷含量,降低尿液比重,增加尿液pH值。结果表明:对试验犬连续灌服该中药复方汤剂,可以降低尿液饱和度、减少尿液晶体的形成,从而不同程度的抑制犬尿结石的形成。     

重组鸡痘病毒vFV282疫苗株在鸽体内的分布及毒性试验

采用翅内侧皮肤无血管处刺种途径给30日龄幼鸽接种重组鸡痘病毒vFV282疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸽体内的分布及其动态并对其毒性进行了研究。结果显示,接种后6 h即在脾脏检测到病毒DNA;接种后1 d,脾、肺PCR检测阳性;3 d,在心、肝、脾、肺、肾、皮肤均检测到病毒DNA;7 d,心、肝、脾、肺、肾、脑PCR检测均呈阳性;10 d,除脑外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA,15 d后所有内脏器官PCR检测结果均为阴性。而对照组在整个试验期间PCR检测结果均为阴性。毒性试验表明,重组鸡痘病毒vFV282疫苗株使用安全。     

副猪嗜血杆菌Apd-ELISA抗体检测试剂盒的制备和初步应用

旨在对副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）的黏附素蛋白（autotransporter passenger domain,Apd）ELISA抗体检测方法进行参数优化、临界值确定和应用评价,获得性能稳定的副猪嗜血杆菌病抗体检测试剂盒。首先通过猪的免疫攻毒试验获得HPS阴、阳性对照血清,优化Apd-ELISA的反应参数;然后用背景确认的阴、阳性血清确定其临界值,并对封闭液及酶标板的包装方式进行选择;最后用Apd-ELISA试剂盒对临床样品进行检测并与荷兰Biocheck的OppA-ELISA试剂盒进行比较。结果表明,抗原包被质量浓度为0.5 μg·mL^-1、被检血清以1：200倍稀释后反应45 min以及二抗稀释度为1：15 000时,Apd-ELISA的反应背景下降,区分度提高。根据背景确认的27份阳性和40份阴性血清的OD_{630 nm}值以及临界值计算公式（S-N）/（P-N）,得到Apd-ELISA的阴阳性临界值是0.33。证实用封闭液K封闭和真空包装的酶标板可以在50℃保存4 d（相当于在4℃保存22个月）。用Apd-ELISA试剂盒检测1 179份临床血清,表明母猪、后备和育肥猪以及仔猪的HPS血清阳性率分别为83.76%、61.09%和27.48%。与荷兰的Biocheck试剂盒进行比较,发现Apd-ELISA与Biocheck试剂盒（OppA-ELISA）对HPS临床阴性血清和疫苗免疫血清检测的符合率为100%,对HPS临床阳性血清的符合率仅为4.76%（6/126）。然而,Apd-ELISA与OppA Western blot的阳性符合率可达到73.02%（92/126）。本研究获得了能有效区分HPS阴、阳性血清和稳定保存的Apd-ELISA抗体检测试剂盒,可用于HPS灭活疫苗免疫后的抗体检测和副猪嗜血杆菌病的血清抗体检测。     

猪乙型脑炎间接ELISA与血凝抑制试验方法的比较

用血凝抑制试验和间接ELISA两种方法检测乙脑阳性血清均呈阳性反应,检测乙脑阴性血清均呈阴性反应。用间接ELISA对来自9个猪场74份送检血清进行了猪乙脑病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）抗体检测,并与血凝抑制试验（HI）进行对比,两种方法检测总符合率为85.1%(63/74),经统计分析,检测结果差异不显著(P＞0.05)。对来自无猪乙脑病猪场24头健康猪的血清进行检测,两种方法结果均为阴性,符合率为100%。对10份阳性血清进行检测,ELISA检测效价较HI效价高,表明ELISA比HI敏感。结果表明,ELISA与HI检测结果相符,前者更适用于猪血清中乙脑IgG抗体的大规模检测。     

摄食PRRSV感染的猪肉对PRRS病毒传播风险的评估

本研究的目的是确定在试验感染猪肌肉中多长时间能检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和评估猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）通过摄食经定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）鉴定为PRRS阳性的猪肉的传播风险。试验采集135头试验猪（试验组人工接种PRRSV,89头;阴性对照组46头）的血清、淋巴组织和肌肉（背最长肌）。接种后第28天~第202天,试验组中13头猪（14.6%）的肌肉样本出现qRT-PCR阳性,在其中4头猪的血清样本和3头猪的淋巴组织样本中分离到了PRRSV。另外,通过生物鉴定在该13头试验猪中6头的淋巴组织匀浆中检测到了该病毒。通过给13头3周龄的PRRSV阴性猪饲喂定量PT-PCR检测阳性的猪肉并利用定量PT-PCR检测监控该试验猪的PRRS感染情况,研究了PRRS的传播性。定量PT-PCR检测结果显示,食用PRRS阳性猪肉的试验猪没有感染PRRS。以上资料结果表明,定量PT-PCR在猪肉中检测到了非传染的PRRSV,通过食用PRRSV感染猪肉PRRSV没有极大的传播性。     

摄食PRRSV感染的猪肉对PRRS病毒传播风险的评估

本研究目的是确定在试验感染猪肌肉中多长时间能检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和评估猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）通过摄食经定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）鉴定为PRRS阳性的猪肉的传播风险。试验采集135头试验猪（试验组人工接种PRRSV,89头;阴性对照组46头）的血清、淋巴组织和肌肉（背最长肌）。接种后第28天～第202天,试验组中13头猪（14.6%）的肌肉样本出现qRT-PCR阳性,在其中4头猪的血清样本和3头猪的淋巴组织样本中分离到了PRRSV。另外,通过生物鉴定在该13头试验猪中6头的淋巴组织匀浆中检测到了该病毒。通过给13头3周龄的PRRSV阴性猪饲喂定量PT-PCR检测阳性的猪肉并利用定量PT-PCR检测监控该试验猪的PRRS感染情况,研究了PRRS的传播性。定量PT-PCR检测结果显示,食用PRRS阳性猪肉的试验猪没有感染PRRS。以上资料表明,定量PT-PCR在猪肉中检测到了非传染的PRRSV,通过食用PRRSV感染猪肉PRRSV没有极大的传播性。     

尿液及肉品中的沙丁胺醇和克伦特罗的检测

目的:对西宁市屠宰场以及市场上的猪肉进行抽检,掌握西宁市流通中猪肉的沙丁胺醇、克伦特罗的含量。方法:分别采用胶体金试纸条和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法对屠宰场不同批次的180头生猪尿液和随机抽取的市场中120份猪肉组织进行克伦特罗的检测。结果:胶体金试纸条检测的180份猪尿液,沙丁胺醇的阳性样品为2份,阳性率为1.11%,克伦特罗检测结果全部为阴性。将2份沙丁胺醇阳性样品及市场上抽检的120份猪肉组织进行ELISA检测,检测结果全部为阴性。结论:西宁市市场上流通的猪肉产品尚未检出沙丁胺醇和克伦特罗的残留,确保了西宁市市场上猪肉产品的食品安全,为西宁市肉品安全奠定了基础。     

猪乳汁中抗猪传染性胃肠炎病毒IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪乳汁中抗猪染性胃肠炎病毒(TGEV)Ig A抗体的间接ELISA方法,本研究以TGEV重组N蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记羊抗猪Ig A为检测抗体,并采用方阵法确定包被抗原和待检乳汁的最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了猪乳汁中TGEV Ig A抗体的间接ELISA检测方法。该方法检测稀释160倍的阳性乳清仍呈阳性;与猪流行腹泻和猪轮状病毒感染阳性乳清无交叉反应;批内和批间变异系数均小于10%。利用建立的ELISA方法与间接免疫荧光方法分别对134份临床样品进行检测,阳性检出率分别为58.2%(78/134)和59.7%(80/134),总符合率为85.6%。本研究建立的检测方法能够有效评估乳汁中TGEV Ig A抗体的水平。     

间接ELISA对鸡猪空肠弯曲菌快速检验的实验研究

以方阵滴定法确定了空肠弯曲菌抗血清、酶结合物的最佳工作浓度和孵育时间,从而立了快速检测空肠弯曲菌的间接ELISA。该试验可检出含8～10个空肠弯曲菌经24h培养的标本(含30万个菌/ml的肉汤培养物);不与沙门氏菌等15种对照菌及其混合液发生交叉反应。以鸡源和猪源空肠弯曲菌抗血清分别作为ELISA的第一抗体,对144份鸡泄殖腔粪便标本和116份猪直肠粪便标本的选择性增菌肉汤培养物进行了检测。其阳性率分别为83.3％和79.3％,可于28h内报告结果;常规法对上述标本的阳性检出率分别为85.4％和81％,但程序繁琐,需5～7d方能获得最终检查结果。两种方法对鸡、猪粪便标本检测结果的阳性符合率,分别为97.5％与97.9％。     

山西某鸡棚改造育肥猪场腹泻病因诊断

为诊断山西省某鸡棚改猪场80~100日龄猪群发生腹泻病的病因。采集40份猪的肛拭子样品,通过实时荧光扩增和细菌分离鉴定的方法,进行实验室诊断。检测结果显示,腹泻样品中轮状病毒（Porcine rotavirus, PoRV）核酸100%为阳性,猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2, PCV-2）核酸30%为阳性。猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea, PED)、猪伪狂犬野毒(Pseudorabies virus, PrV)、猪瘟病毒(Swine fever virus, SFV)核酸检测均为阴性,大肠杆菌（Escherichia coli, E.coli）和沙门氏菌(Salmonella enteriditis, SE)100%呈阳性,仅对万古霉素和头孢曲松同时敏感。     

猪细小病毒病血清抗体VP2-ELISA检测方法的建立

利用纯化的猪细小病毒VP2蛋白为抗原,建立检测猪细小病毒血清抗体的间接VP2-ELISA。最佳反应条件为:抗原包被浓度300 ng/孔,4℃过夜,待检测血清1:50稀释。与猪细小病毒病阳性血清呈阳性反应,与猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪日本脑炎和猪圆环病毒病等5种疾病的阳性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数均小于10%。用该方法与Ceditest PPV猪细小病毒抗体检测试剂盒对102份血清进行平行检测和比较,间接VP2-ELISA的敏感性为93.8%,特异性为81.1%,符合率为89.2%。结果表明,猪细小病毒血清抗体间接VP2-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪细小病毒感染的血清抗体检测。     

鸡痘病毒弱毒疫苗株在鸡组织内的分布、消长规律及毒性试验

通过两侧翅内侧皮肤无血管处刺种和滴鼻、点眼等途径给10日龄商品蛋公鸡接种鸡痘病毒（FPV）弱毒疫苗株，利用PCR的方法检测其在鸡体内的分布与消长规律并对其毒性进行了研究。刺种组：接种后6h在刺种部位皮肤即可检测到病毒DNA；接种后1d，皮肤、肺、脑PCR检测阳性；7d，在皮肤、肺、脑，心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA，肝为疑似；10、15d，肝为阳性；21d，脾、法氏囊PCR检测为阴性，肝为疑似；28d，除刺种部位皮肤外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA，但刺种部位皮肤一直到接种后35d仍可检测到病毒DNA。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。滴鼻点眼组：基本规律与刺种组相同。接种后3h，在肺部即可检测到病毒DNA；6h，在肺和脑部PCR检测成阳性，法氏囊为疑似；1d，在肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA，肝为疑似；21d，肺、肾、法氏囊、脑均为阳性。其中脑一直持续到接种后28d。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。毒性试验表明，FPV弱毒疫苗株虽使用安全但通过翅内侧皮肤无血管处大量刺种存在导致全身皮肤感染出痘的危险。