鸡马立克火鸡疱疹病毒（Fc─126株）的标准化研究──Ⅰ．Fc─126株的纯化及其克隆株的筛选

用于预防鸡马立克氏病（ＭＤ）的火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）Ｆｃ─１２６株细胞培养低代毒，经过一日龄ＳＰＦ雏鸡体连续回传五代，于最后一代回收病毒后，超声波裂解释放病毒，接种在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）上，挑选蚀斑纯化的克隆株。经过三次克隆纯化后，最后挑选出２３个大蚀斑克隆株，３个中蚀斑克隆株和５个小蚀斑克隆株。对部分克隆株和其原始ＨＶＴＦｃ─１２６株在细胞中增殖速度和免疫原性进行了比较，初步筛选出大斑克隆株（３３０８０１）作为疫苗种毒的候选株。     

鸡马立克火鸡疱疹病毒（FC—126株）的标准化研究：I.Fc—126株的纯化…

用于预防鸡马立克氏病（ＭＤ）的火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）Ｆｃ－１２６株细胞培养低代毒经过一日龄ＳＰ雏鸡体连续回传五代，于最后一代回收病毒后，超声波裂解释病毒，接种在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）上，挑选蚀斑纯化的克隆株。经过三代克隆纯化后，最后挑选出２３个蚀斑克隆株，３个中蚀斑克隆株和５个小蚀斑克隆株。对部分克隆株和其原始ＨＶＴＦｃ－１２６株在细胞中增殖速度和免疫原性进行了比较，初步筛选出大斑克隆株（３３０     

口蹄疫病毒O型OXH0312株灭活疫苗的制备及其检验

对口蹄疫O型OXH0312病毒株进行了牛体感染、乳鼠适应传代和细胞适应传代等生物学特性的研究,并对制备的细胞毒配制的疫苗进行了免疫原性测定。结果显示,该毒株从细胞毒13代(BF13)起,病变时间趋于稳定,14代至17代是一个相对平台期,病变时间稳定在11 h之内;用乳鼠测定病毒毒价稳定在107.68/0.2 mL左右,传到21代时,效价开始下降。用15代、16代和17代病毒液制备3批疫苗进行PD50的测定,3批成品苗的PD50分别为3.80、4.20、3.00。说明该毒株具有比较稳定的生物学特性和良好的免疫原性,可以做为生产用后备种毒。     

犬冠状病毒YS1株的致弱驯化与免疫试验

应用猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）单层接毒方法将犬冠状病毒（ＣＣＶ）强毒ＹＳ１株连续传代驯化至６０代,经安全性试验和免疫原性测定,该强毒株已驯化对弱毒水平,对犬安全,免度原性良好。     

犬细小病毒(CPV)内蒙古分离株的体外培养特性研究

采用F81细胞系作为传代细胞,对分离的CPV流行毒株进行培养,考察其培养特性及传代细胞毒的特性.结果表明,按1%同步接毒,CPV组织提纯毒在F81传代细胞株连续盲传6代后开始适应;以该细胞毒按2%同步接毒,继代8-14代,病毒能够得到稳定增殖扩繁,HA血凝效价可达到(1:256)～(1:1024),TCID,在103'8-100' 0.1/mL,而且细胞毒与CPV杭体有良好的血清学特异性;将不同较高代次细胞毒灭活后制备灭活抗原,以5 mL/只剂量对犬免疫,21 d后血清抗体效价可达到(1:16)～(1:32),表明制备的细胞毒免疫原性良好.从不同代次细胞毒的HA血凝效价和免疫杭体HI效价测定结果看,病毒传代扩繁以8～14代为宜.     

猪乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株基础种子的鉴定

建立了猪乙型脑炎活疫苗基础种子库,对三批基础种子进行了全面鉴定。结果表明,三批猪乙型脑炎基础种子无外源病毒污染,对敏感实验动物小鼠、乳猪和怀孕母猪接种均安全、无异常反应,原代地鼠肾细胞传代至F12代,免疫原性保持稳定、毒力不返强。由此可见,猪乙型脑炎SA14-14-2疫苗株基础种子无外源病毒污染,具有可靠安全性和良好、稳定的免疫原性,可用于疫苗生产,为研制猪乙型脑炎活疫苗打下基础。     

貂病毒性肠炎睾丸细胞弱毒疫苗株的安全性和免疫原性研究

用从患貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）死亡水貂分离的强毒株，经牛睾丸细胞（ＣＴ）和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）混合培养，强迫传代、克隆培育的ＭＶＥ弱毒株扩增制苗，给不同品系水貂注射或口服１￣５ｍｌ，未发生临床反应。注苗后１２、６０、７０天和６个月攻毒，１００％保护；对照水貂全部发病，５０％死亡。通过对６５１只（次）水貂的安全性、免疫原性、遗传稳定性试验和中和抗体测定及同居感染试验，证明该弱素株具有良好的安全性、     

猪流行性腹泻弱毒株的培育

用ＰＥＤＶＣＶ７７７株强毒适应Ｖｅｒｏ细胞系并传至１４７代。以ＰＥＤＶ沪株做效检用强毒，传代毒８３代之后适应仔猪肾原代细胞，自９０年代起进行了５次克隆纯化，克隆是２次群斑（由５～７个单斑组成）的基础上，再进行３次单斑挑选（均是１ｍｍ以内小空斑）以８３－７斑５株继续传代并做系列试验，传代毒的毒价为１０＾７．０～１０＾７．５ＴＣＩＤ５０／０．３ｍｌ。免疫接种途径为后海穴位，克隆后５代（总代次１０４代）     

新城疫V4株弱毒变种的选育

应用有限稀释法通过ＳＰＦ鸡胚传代，从新城疫Ｖ２弱毒中克隆出一个变各，即２０代以后的继代毒，命名为新城疫Ｖ４克隆２０弱毒株，（ＮＤ－Ｖ４Ｃ２０）。毒以１０＾－１－１０＾１３×０．１ｍｌ接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚尿囊腔１５０小时内，鸡胚极少死亡。每个滴度５个胚有尿液均可凝集鸡红血球。第１０代和第２０代的每个滴度５个胚有的混合尿液以１０＾－６×０．５ｍｌ一次饮水免疫鸡，即能引起ＨＩ抗体反应，也能抵抗新城疫强     

鸭瘟灭活疫苗种毒筛选及生产用种毒种子批的建立

本研究通过鸭胚(DE)传代,建立了鸭瘟病毒(DPV)AV1221株的鸭胚适应毒.通过与其他2株DPV(AV1222株鸡胚毒和AV18株鸭胚毒)免疫原性、毒力等特性的比较,选择AV1221株DE2代鸭胚毒作为制苗用种毒,NJ株D5代鸭肝组织毒作为检验用强毒.使用鸭胚对AV1221株DE2毒进行了连续6次传代.对DE2代～DE7代冻干种毒的鉴定结果表明:未发现细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染;病毒含量为每0.2 mL含104.38～105.25ELD50;能够被DPV抗血清中和;制成灭活疫苗,免疫成鸭后均能够产生完全保护.依据试验结果建立了能够满足疫苗生产所需的生产用种毒的种子批.     

驯化克隆的CAV-2大斑株的实验免疫研究

对MDCK细胞上驯化克隆产毒量高的大斑株 (LP)的第 5 0代毒和 75代毒进行了实验免疫研究 ,结果表明该毒株具有安全性好 ,通过静脉和口鼻接种CAV易感犬 ,无任何致病反应 ;用10 4 .0 TCID50 以上的该毒免疫CAV易感犬 ,即获得 97.5 %以上的免疫保护 ;将其在CAV易感犬连续传 5代 ,其安全性与原毒相同 ,表明该毒株在 5 0～ 75代之间遗传性稳定 ,免疫原性良好 ;与CPV和CDV弱毒联合免疫 ,结果与各弱毒单独免疫所产生的抗体无差异 ,说明该毒株不但可以单独用于免疫 ,也可与其他弱毒联合免疫。是一株较好的疫苗候选株 ,具有开发应用价值。     

鸡败血霉形体SC克隆致弱株免疫原性试验

在透明塑料隔离器中进行了鸡败血霉形体人工发病试验，结果３０日龄ＳＰＦ来航鸡在ＮＤＶ、ＩＢＶ弱毒诱导和７０／１００００００（质量分数）氨环境刺激的联合作用下，致病率可达１００％（７／７）。经鸡败血霉形体Ｓ６克隆致弱株ＳＣＦ１５６代培养物点眼、滴鼻免疫后１０，２０，３０ｄ的ＳＰＦ来航鸡再以ＭＧ强毒攻毒，结果，保护率分别达８０．０％（４／５），７５．０％（３／４）和８７．５％（７／８）。近期免疫效果证明，鸡败血霉形体Ｓ６克隆致弱株ＳＣ有良好的免疫原性。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒（rFPV-ILTVgB)的稳定性，我们对重组病毒进行6代和16代克隆纯化，对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传20代，结果发现第6代纯化病毒（rFPV-ILTVgB-C6)在传代过程中有白斑出现，说明病毒纯度不够；经过16代纯化的病毒（rFPV-ILTVgB-C16)对细胞的嗜性加强，病毒的效价进一步升高，20代传代后蓝斑率仍然为100％，PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传。抽取病毒细胞传代过程中的第5，10，15，20代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种2周龄SPF鸡，20天后分为两组，分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒102株攻击，结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击，鸡体内病毒传代试验表明，重组病毒在接种部位仅存在6天，之后就检测不到病毒，重组病毒通过SPF鸡连续传代，不存在病毒返祖的可能，由此可以得出一个结论：rFPV-ILTVgB在结构上和免疫原性上是稳定的，无论是在体外传代，还是在体内均可以稳定遗传，不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能，完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发。     

广东新兴株Ⅰ型鸭病毒性肝炎鸡胚化弱毒疫苗的研制

本试验从广东新兴地区分离的I型鸭病毒性肝炎毒株中筛选出免疫原性优良SS毒株,用鸡胚传代培育出Ⅰ型鸭肝炎病毒79代鸡胚化弱毒疫苗株SS79.按弱毒疫苗规程相关试验结果表明,该苗对1日龄雏鸭安全无致病性,免疫剂量为10-5.16个EID50/只.接种1日龄雏鸭后第3天可检测到抗体,7 d可产生高峰期中和抗体,并可完全保护雏鸭抵抗同型强毒的攻击,1次免疫抗体可维持4周以上.疫苗在-20℃保存6~12个月仍能保持良好的免疫原性.     

1日龄火鸡新城疫免疫后外周血液的免疫学变化

应用ＮＤ来活苗与弱毒苗联合及单独弱毒苗对１日龄火鸡进行早期免疫，于第６０日进行ＮＤ强毒攻击。分别在第７、１４、２１、３５和日龄检测外周血液的免疫学变化。结果表明，１日龄火鸡疫苗接种后其外周血液中Ｔ细胞、Ｂ淋巴细胞和淋巴细胞数量、血清ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ含量及ＨＩ抗体滴度均明显升高，可获得良好的免疫保护效应，其中活苗与死苗联合免疫组优于单独活苗免疫组。     

新城疫病毒F48E9株病毒F基因表达盒的火鸡疱疹病毒转移质粒载体构建

将新城疫病毒（NDV）F48E9株融合蛋白（F）基因1700bp克隆到真核表达载体pcDNA3中，构建成表达F基因的载体pc3F。然后将包含F基因及其上游的细胞巨化病毒启动子和增强子的3800bp DNA片段再克隆入包含火鸡疱疹病毒（HVT）非必须片段载体pTK2B中，构建成功含有F基因表达盒的HVT转移质粒体pTK3F。经限制性内切酶酶切分析，F基因表达盒的插入方向与pTK2B中TK基因转录方向一致。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的HVT重组病毒奠定了基础。     

牛O型A型口蹄疫双价灭活疫苗研究：A型毒种的选择

收集保藏的６株口蹄疫Ａ型牛源强毒，适应乳鼠５代，转适ＢＨＫ－２１细胞单层１０代，用弗氏安全佐剂制成疫苗免疫豚鼠。综合分析其对实验动物及制苗细胞的适应性，病毒感染性滴度、豚鼠抗强毒攻击的免疫原性、血清中和抗体应答的抗原广谱性表明，在６株毒中ＡＦ／７２具有更好的适应性，病毒滴度高，免疫原性好，抗原谱广。     

禽流感H9亚型病毒WD株毒种的纯化研究

采用鸡胚终点稀释法并结合ND抗血清中和法对禽流感H9亚型病毒WD株毒种进行了纯化。将纯化的WD株毒种在SPF鸡胚连续传12代，对各代次毒种进行了毒价测定，选择一定代次的毒种进行了免疫原性试验及外源病毒检验。结果表明，WD株在鸡胚中连续传12代，其HA价稳定在1：512—1：1024，毒价在10^7.0-10^8.3 EID50／0．1mL；不同代次毒种不含外源病毒，免疫原性均符合要求。由此可见，毒种的纯化方法是有效的，将WD株毒种限制在12代内是可行的，并建立了该毒种的种子批。     

鸡马立克氏病冷冻疫苗的使用

防制鸡马立克氏病有两类疫苗:一类是鸡马立克氏病弱毒(人工减弱或自然弱毒)疫苗,另一类是火鸡疱疹病毒疫苗。我国于1978年起开始使用火鸡疱疹病毒冻干疫苗,对防制鸡马立克氏病起了一定的作用。但因火鸡疱疹病毒与鸡马立克氏病毒血清型不     

1日龄火鸡新城疫LaSota苗与灭活苗联合接种后的免疫应答

火鸡１日龄时用新城疫ＬａＳｏｔａ苗与油乳剂灭活苗联合免疫后，在７、１４、２１、３５日龄及攻毒后，检测了火鸡免疫器官组织法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺中浆细胞、ＴＡＮＡＥ＋＿数量变化。结果表明：免疫火鸡法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺的浆细胞明显增多，机体体液免疫应答显著增强；胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺中ＴＡＮＡＥ＋也程度不同地增多，细胞免疫应答也明显增强，免疫后６０ｄ，用新城疫苗强毒攻击，免疫火鸡获得了良好的保护。