米糠多糖对免疫抑制鸡外周血CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的调节作用

为探讨米糠多糖对免疫抑制鸡免疫功能的调节作用,采用流式细胞技术检测了环磷酰胺和传染性法氏囊病毒诱导免疫抑制鸡在服用米糠多糖(剂量为150 mg/kg)和不服用米糠多糖情况下,外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群数量的动态变化。结果显示,米糠多糖能够抑制环磷酰胺和传染性法氏囊病毒处理鸡外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞数量的降低;提高健康雏鸡外周血中CD4+T淋巴细胞比率,对CD8+T淋巴细胞作用不明显。     

中药复方连翘对感染法氏囊病毒雏鸡免疫功能的影响

160只7日龄健康岭南黄鸡随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组,每组40只,Ⅰ为正常对照组、Ⅱ为感染病毒组、Ⅲ为中药复方治疗组、Ⅳ为中药复方制剂组,Ⅱ、Ⅲ组均于8日龄感染传染性法氏囊病毒（IBDV）,Ⅲ、Ⅳ以20g·kg^-1单剂量灌服中药复方连翘汤。分别于试验后第7、14、21、28日龄采外周血及免疫器官法氏囊和脾脏,测定血细胞的吞噬能力、外周血T淋巴细胞的百分率和T淋巴细胞的转化率,流式细胞仪测定鸡外周血和脾T淋巴细胞亚群CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T细胞的含量;放血致死称体质量、脾和法氏囊质量,计算免疫器官指数。在感染IBDV7d后取脾脏和法氏囊组织,制备组织样品进行组织学及透视电镜观察。结果表明：中药复方连翘制剂可使雏鸡外周血细胞的吞噬能力、T淋巴细胞的百分率和T淋巴细胞的转化率、法氏囊和脾脏的质量明显提高,对感染IBDV后免疫器官法氏囊和脾脏有明显的改善和恢复作用,提高外周血和脾淋巴细胞中CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T细胞百分率,改变CD4^＋／CD8^＋比值促进对机体免疫系统的调控。感染病毒组的上述指标显著下降,中药复方连翘治疗组与感染病毒组相比能显著提高上述指标。     

四君子汤发酵液的抗肿瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响

本试验研究了四君子汤发酵液对S180肿瘤模型小鼠的抗肿瘤作用和对免疫功能的影响。采用血清溶血素法检测荷瘤小鼠体液免疫功能;MTT比色法检测淋巴细胞的增殖和流式细胞术检测T细胞亚群。结果表明,四君子汤发酵液具有明显的抑制肿瘤生长的作用,并且可以增强环磷酰胺（CTX）的抗肿瘤作用,降低CTX免疫抑制的副作用。四君子汤发酵液可以提高免疫器官指数;对肿瘤小鼠脾淋巴细胞转化、血清抗体产生都有促进作用;可以明显提高模型小鼠CD3^＋和CD8^＋T淋巴细胞水平,降低由于肿瘤引起的CD4^＋/CD8^＋T淋巴细胞比值的升高,与模型组比较差异显著（P〈0.05）。研究表明四君子汤发酵液的抗肿瘤作用和增强机体免疫调节功能有关。     

E.tenella初次感染雏鸡外周血T淋巴细胞亚群及增殖能力变化的动态研究

应用流式细胞术（ FCM）和MTS比色法检测雏鸡初次感染柔嫩艾美尔球虫（ E． tenella）后外周血中CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋T淋巴细胞及其增殖能力的动态变化。数据显示,E． tenella初次感染雏鸡后7～20 d CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋T 淋巴细胞比例明显高于对照组雏鸡（ P＜0．05和P＜0．01）,并且均于12 d时达到峰值。初次感染后7～20 d雏鸡外周血中CD4＋／CD8＋T淋巴细胞亚群的比值明显升高,于感染后16 d时达到1．78。 E． tenella初次感染雏鸡后12～20 d外周血淋巴细胞增殖能力明显高于对照组雏鸡（ P＜0．05）,并于16 d达到峰值。试验表明E． tenella初次感染雏鸡能激活淋巴细胞产生增殖反应,CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋T淋巴细胞在抵抗E． tenella初次感染过程中有重要作用。     

传染性法氏囊病病毒超强毒感染SPF鸡免疫器官中CD4+和CD8+T淋巴细胞动态分布

利用免疫组织化学染色对传染性法氏囊病病毒（IBDV）超强毒LX株感染SPF鸡免疫器官中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的动态分布进行了研究。超强毒LX株接种2周龄SPF雏鸡，在其法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓和哈氏腺中均可检出IBDV抗原的存在和CD4^ 与CD8^ T淋巴细胞的数量改变。在法氏囊中，CD4^ 淋巴细胞主要存在于淋巴滤泡间隙和滤泡皮质，而CD8^ T淋巴细胞则丰在于整个淋巴滤泡和滤泡间隙，并且CD8^ T淋巴细胞数量明显多于CD4^ T淋巴细胞，在接种后14d仍未见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞数量减少。脾脏中CD4^ T淋巴细胞主要存在于外周小动脉淋巴鞘或散在，而CD8^ T淋巴细胞则多存在于外周小动脉淋巴鞘和红髓。接种后胸腺中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞在皮质中减少，但在髓质增多，尤其是CD8^ T淋巴细胞数明显多于CD4^＋T淋巴细胞。盲肠扁桃体中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞主要存在于发生中心，尤其是CD8^ T淋巴细胞数比CD4^ T淋巴细胞明显多。骨髓和哈氏腺中也可见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞，而且CD8^ T淋巴细胞更多。在这些淋巴器官中，病毒损伤部位出现CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的迁入聚集，表明T淋巴细胞可能参与IBDV超强毒的免疫致病过程。     

米糠多糖对环磷酰胺诱导免疫抑制鸡外周血T淋巴细胞增殖活性及疫苗免疫效果的影响

为探讨米糠多糖（RBS）对鸡免疫抑制状态的调节作用,将100只7日龄健康蛋用公雏鸡随机分为对照组、环磷酰胺（CTX）组和CTX＋RBS低、中、高3个剂量组.从7日龄起,肌肉注射CTX,1日1次,连注3 d,从10日龄起,CTX＋RBS组灌服RBS,1日1次,连续5 d.14日龄时各组鸡进行新城疫疫苗免疫.在10,21,28,35日龄,测定外周血T淋巴细胞增殖反应活性和ND HI抗体效价.结果显示,CTX组鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性和ND HI抗体效价均显著低于对照组（P＜0.01）;CTX＋RBS中、高剂量组鸡外周血T淋巴细胞的增殖活性均显著高于CTX组（P＜0.05或P＜0.01）,但低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）;CTX＋RBS中、高剂量组鸡的血清ND抗体效价均显著高于CTX组（P＜0.05或P＜0.01）,且与对照组差异不显著（P＞0.05）.证实,肌肉注射CTX可使健康雏鸡外周血T淋巴细胞的增殖反应活性和NDHI抗体效价显著降低,导致受试鸡免疫抑制;雏鸡口服一定剂量的RBS对CTX引起的细胞免疫和体液免疫抑制具有一定的拮抗作用.     

紫锥菊、黄芪对感染IBDV雏鸡胸腺、小肠中CD4~＋、CD8~＋ T淋巴细胞动态分布的影响

将14日龄雏鸡随机分为3组,A组灌服1 mL的紫锥菊、黄芪合剂,B、C组灌服生理盐水,连续灌服7 d。21日龄时A、B组雏鸡接种传染性法氏囊病病毒（IBDV）,用免疫组化法观察雏鸡胸腺、小肠中CD4＋、CD8＋T淋巴细胞动态分布的变化。结果表明,用药组和攻毒对照组相比较,CD4＋T淋巴细胞差异显著（P〈0.05）,但是CD8＋T淋巴细胞差异不显著（P〉0.05）,与空白对照组相比CD4＋淋巴细胞显著增多。胸腺、小肠中24日龄时CD4＋、CD8＋T细胞数量较其他日龄差异显著（P〈0.05）。总试验期胸腺中CD4＋、CD8＋含量是所测总数的60%。表明紫锥菊、黄芪对机体免疫有显著增强作用,以胸腺中CD4＋、CD8＋含量多于小肠,能显著降低IBDV对机体造成的损伤。     

不同光照条件下褪黑素对鸡鸭鹌鹑外周血淋巴细胞及其亚群变化的影响

为探讨不同褪黑素水平对禽类机体免疫系统的调节作用，通过控制不同光照条件，分3组（短光照组、长光照组和对照组）饲养鸡45只、鸭45只、鹌鹑45只，采用荧光双色染色法和流式细胞仪分别检测鸡、鸭、鹌鹑外周血中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞及其亚群和Bu-la^＋B淋巴细胞数量变化。结果，短光照组由于体内褪黑素水平较高，外周血中CD3^＋CD4^＋T细胞、CD3^＋CD8^＋T细胞、Bu-la^＋B细胞及白细胞总数都有不同程度升高，且与对照组相比差异显著；长光照组由于体内褪黑素分泌较少，外周血中CD3^＋CD4^＋T细胞、CD3^＋CD8^＋T细胞、Bu-la^＋B细胞及白细胞总数都有不同程度降低，且与对照组相比差异显著。结果表明，内源性褪黑素对鸡、鸭、鹌鹑外周血中淋巴细胞及其亚群的数量变化有显著影响。     

雏鸡感染毒害艾美耳球虫后免疫器官T细胞亚群的动态变化

采用ABC法检测了毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）初次、二次感染雏鸡后，其免疫器官T细胞亚群的动态变化。结果发现：雏鸡初次感染E．necatrix后，其胸腺和脾脏的CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞于感染后4～21d不同程度高于未感染的对照雏鸡，14～16d达峰值，随后缓慢下降。其中CD4^＋T细胞较CD8^＋T细胞增殖辐度大，持续时间也较长。Enecatrix二次感染雏鸡后，上述免疫器官的CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞数量在感染后2～7d呈下降趋势，随后回升，至10～14d明显高于对照和初次感染雏鸡。其中CD8^＋T细胞在二次感染后降幅较小，回升更迅速，增殖幅度也较大。表明鸡CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞在抵抗E．necatrix感染的不同时期发挥不同的作用。     

表达鸡γ-干扰素和传染性支气管病毒S1基因的重组鸡痘病毒疫苗对鸡外周血T淋巴细胞动态分布影响的研究

机体的免疫应答是一个复杂的生物学过程，它以体液和细胞免疫为主，二者相互影响，相互作用，而构成了一个动态整体。本研究通过FACS技术检测SPF鸡接种共表达IBVS1基因和鸡γ-干扰素基因的重组鸡痘病毒疫苗后外周血中CD4^＋、CD8^＋和TCRδγ^＋三种亚类T淋巴细胞的数量的变化，初步探讨了干扰素对鸡外周血中T淋巴细胞亚类动态分布的影响。结果表明，含有干扰素基因的重组鸡痘病毒能显著增高机体特异性的CD8^＋和TCRδγT淋巴细胞水平，CD4^＋T淋巴细胞比例则要低于其他的疫苗免疫组。     

CSFV免疫状态下外周血T淋巴细胞亚群变化及对PRRS的免疫保护作用

建立CSFV疫苗免疫状态下猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染动物模型。测定CSFV抗体阻断率和PRRSV抗体S/P值,根据CSFV抗体阻断率和PRRSV感染情况分析猪外周血中T淋巴细胞亚群变化和对PRRS的保护促进作用。采用流式细胞术（FAC）检测猪外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8亚群的变化。结果,CSFV...     

传染性支气管炎病毒结构蛋白免疫鸡对CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的影响

为了比较传染性支气管炎病毒3种主要结构蛋白免疫鸡后对CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的不同影响.本试验以pVAX1载体为携带工具,制备分别含有IBV主要结构蛋白基因的质粒免疫健康雏鸡,采用流式细胞仪(FACS)对免疫鸡外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数进行检测.结果显示:各试验组间,携带N蛋白基因的质粒在免疫后3周内CD4+T淋巴细胞数和CD8+T淋巴细胞数均高于其他组,且差异极显著(P＜0.01).由此可见,IBV的N蛋白可明显诱导CD8+T淋巴细胞的CTL免疫作用和CD4+T淋巴细胞的辅助性免疫作用,其细胞免疫原性高于S1蛋白和M蛋白.     

H9N2亚型禽流感流行株灭活疫苗种毒的筛选

为研究中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡免疫水平的影响,本实验采用流式细胞技术检测柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血CD4^＋T细胞亚群,以及CD8^＋T细胞亚群数目的动态变化。结果表明,接种球虫后,     

沙棘提取物对断奶仔猪的免疫调节作用

本试验旨在研究沙棘提取物对断奶仔猪的免疫调节作用。选用28±2日龄断奶的长×大仔猪24头,随机分成试验组和对照组,每组3个重复,每重复4头猪（公母各半）,试验组饲粮添加0.1%沙棘提取物,测定免疫器官指数、T淋巴细胞亚群、细胞因子、血液和肝、肾、脾的抗氧化能力指标。结果表明,添加0.1%沙棘提取物组脾脏指数、胸腺指数均显著提高（P〈0.05）;T淋巴细胞CD4^＋亚群比例显著提高（P〈0.05）,CD8^＋比例显著降低（P〈0.05）,CD4^＋/CD8^＋比值极显著提高（P〈0.01）;第1、2周白细胞介素-2（IL-2）显著提高（P〈0.05）;第1、3、4周IFN-γ显著提高（P〈0.05）;血清T-AOC显著提高（P〈0.05）。试验证明在断奶仔猪日粮中添加0.1%沙棘提取物可以通过提高血液总抗氧化能力来增强仔猪的免疫功能。     

鸡IFN-γ重组鸡痘病毒对鸡传染性腔上囊炎MB43弱毒疫苗免疫鸡免疫应答的影响

将重组鸡痘病毒（rFPV—IFN-γ）与IBDMB43弱毒疫苗联合接种SPF鸡，研究重组鸡IFN-γ对IBD疫苗免疫效果的影响。结果显示，rFPV—IFN-γ和MB43弱毒疫苗联合免疫组（MB43＋rFPV-IFN-）＂）及rlFN-γ和MB43弱毒疫苗联合免疫组（MB43＋rIFN-γ）在免疫后第2周即可检出ELISA抗体，比MB43疫苗单独免疫组早1周。用IBDVGx株攻击后，MB43＋rFPV-IFN-γ组和MB43＋rIFN-γ组免疫鸡的脾只有个别淋巴细胞核浓缩、核崩解，少数滤泡萎缩变性坏死；胸腺损伤程度轻于MB43疫苗单独免疫组和非免疫对照组。免疫后1周，3个免疫组外周血CD8^＋T淋巴细胞含量均显著高于非免疫对照组，CD4^＋T淋巴细胞含量变化不明显；攻毒后第2周，3个疫苗免疫组CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量均显著升高，各组之间CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量无明显差异。证实，rFPV—IFN-γ和rIFN-γ可加强疫苗的细胞免疫和体液免疫应答。     

鸡传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LTJ95Ⅰ株病毒攻击的免疫保护

将共表达鸡传染性支气管炎病毒（mv）S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒（rFPV—IFN-γ S1）接种4周龄SPF鸡,免疫3周后用同源（LX4株）及异源强毒株（LTJ95I）攻毒,评价重组疫苗对异源病毒的保护作用。结果显示,重组疫苗接种1周后,免疫鸡产生抗IBV的抗体;而且外周血中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞的含量略高于非免疫对照组;攻毒后,异源强毒株攻毒的免疫组CD4^＋T淋巴细胞呈下降趋势,并且该组低水平CD4^＋的状态一直持续到试验结束,而其他组CD4^＋T淋巴细胞均迅速上升,峰值达到14．5％;同源强毒株攻毒的免疫组CD8^＋T淋巴细胞呈高水平的表达,而其他组攻毒后均无明显变化;保护率结果显示,同源强毒株攻毒免疫组的发病率和死亡率为21．43％和0％,与其他各组相比均有显著差异;另外同源强毒株攻毒的免疫组病理损伤与异源强毒株攻毒的试验组相比明显减轻,其排毒时间和排毒量也均有所减少;强毒攻毒后所有试验组体重无显著差异。以上结果可以说明,重组疫苗能对同源强毒株产生较好的免疫保护,但不能对遗传关系较远的强毒株产生有效的免疫应答。     

禽传染性支气管炎脂质体、壳聚糖/DNA疫苗免疫效果比较研究

将制备的禽传染性支气管炎脂质体／DNA疫苗和壳聚糖／DNA疫苗，分别以肌肉注射（i．m）和滴鼻、点眼（i．n）两种途径免疫健康雏鸡，以裸DNA疫苗为对照，采用流式细胞仪（FACS）及间接ELISA分别对免疫鸡外周血中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数及特异性IBV血清抗体IgG的动态变化进行检测，并于免疫后35d进行攻毒，结果显示：（1）CD4^＋T淋巴细胞数，所有试验组在免疫后1～3周左右均高于对照组（P〈0．01或P〈0．05），各试验组间，脂质体／DNA疫苗肌肉注射途径在免疫后10d后高于壳聚糖／DNA疫苗，但仅在第15天差异显著（P〈0．05），而滴鼻、点眼途径则相反；（2）所有试验组CD8^＋T淋巴细胞数仅在免疫后第15天与对照组差异显著（P〈0．05），各试验组间无显著差异；（3）所有组间特异性IBV血清抗体IgG动态变化差异不显著；攻毒后脂质体／DNA疫苗肌肉注射组无鸡只死亡，其他试验组有4％或8％死亡率，均显著低于对照组（12％）。由此可见，脂质体和壳聚糖均为DNA疫苗良好的佐剂或载体，且脂质体／DNA疫苗肌肉注射的免疫效果优于壳聚糖／DNA疫苗。     

基因枪与肌肉注射猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗诱导小鼠体液及细胞免疫的比较研究

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗（pcDNA—PRRSV—ORF5）以不同免疫途径（基因枪和肌肉注射）免疫BALB／c小鼠，以PBS和空载质粒pcDNA3．1（＋）为对照，采用流式细胞仪（FACS）、淋巴细胞增殖试验（MTT法）及间接ELISA试验分别对小鼠外周血中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数、T淋巴细胞的转化功能及小鼠血清中特异性PRRSV血清抗体IgG动态变化进行了检测。结果表明，pcDNA—PRRSV-ORF5基因疫苗接种小鼠后外周血对ConA有明显的反应性，试验组与对照组比较差异极显著（P〈0．01）或显著（P〈0．05），CD4^＋T淋巴细胞数在免疫后7d高于对照组（P〈0．01），CD8^＋T淋巴细胞在免疫后28d高于对照组，不同途径基因疫苗接种小鼠后均诱导小鼠产生PRRSV特异性IgG。在诱导细胞免疫方面，基因枪和肌肉注射各组间无明显差异；在诱导体液免疫方面，基因枪法优于肌肉注射。研究表明制备的pcDNA—PRRSV—ORF5基因疫苗免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的体液和细胞免疫应答，基因枪法较肌肉注射更能诱导体液免疫应答的产生。     

山药多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

将150羽14日龄蛋公鸡随机分成3组,每组50羽,用新支二联弱毒苗点眼、滴鼻免疫的同时2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的山药多糖（CYPS）溶液,对照组肌肉注射生理盐水。1次／d,连续3d。分别于免疫后第10,20,30,40,50,60天每组随机抽取8只蛋公鸡,翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制抗体效价;每组再随机抽取5只蛋公鸡心脏采血,分离淋巴细胞,用MTT法测定淋巴细胞增殖的动态变化,用流式细胞仪双染色法检测CD3^＋、CD3^＋CD4^＋和CD3^＋CD8^＋淋巴细胞含量。试验结果表明,山药多糖高剂量组的血凝抑制抗体效价、CD4^＋／CD8^＋比值明显高于对照组,并可显著促进T淋巴细胞增殖,提示山药多糖对鸡新城疫疫苗的免疫效果有明显增强作用。     

黄芪多糖和白花蛇舌草多糖对猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫猪T细胞亚群及抗体水平的影响

为探讨黄芪多糖和白花蛇舌草多糖对猪高致病性繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫猪T细胞亚群及抗体的影响,以黄芪多糖和白花蛇舌草多糖作为免疫增强剂联合猪高致病性繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫仔猪,通过流式细胞仪检测猪外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋细胞百分比,并用ELISA法检测猪血清中抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体水平。结果表明,黄芪多糖和白花蛇舌草多糖均能显著提高仔猪的CD3＋、CD4＋、CD8＋淋巴细胞的百分比和特异性抗体滴度,即黄芪多糖和白花蛇舌草多糖均能提高猪高致病性繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的免疫水平,且白花蛇舌草多糖提高免疫的效力与剂量有关。