不同剂量猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗肌肉注射诱导仔猪细胞免疫的研究

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)分别以200 ug,100 ug和50 ug 3种剂量肌肉注射免疫21日龄仔猪,同时设空载体对照和生理盐水空白对照.于免疫后7 d、15d、30d、45d、60d和70d采用流式细胞仪(FACS)和淋巴细胞增殖试验(MTT法)分别对免疫猪外周血中CIM+、CD8+T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行检测.结果表明3个不同剂量的pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫仔猪后均能诱导产生良好的细胞免疫应答,实验组与对照组比较差异极显著(p<0.01)或显著(p<0.05).大剂量基因疫苗免疫仔猪的外周血T淋巴细胞的增殖能力及CD4+、CD8+百分含量高于中剂量和小剂量基因疫苗免疫的仔猪,表现出一定的量效关系.     

绵阳地区猪繁殖与呼吸综合征流行毒株ORF5基因的克隆及遗传变异分析

采用RT-PCR方法对四川绵阳地区采集的疑似猪繁殖与呼吸综合征感染病料进行克隆,并对ORF5基因进行测序及遗传进化分析。Nsp2基因扩增结果表明,获得的15个猪繁殖与呼吸综合征阳性毒株均为Nsp2基因存在缺失的变异株。ORF5基因测序结果表明,15株ORF5基因均由603 bp编码、200个氨基酸组成,各毒株之间的氨基酸同源性为87.6%~100.0%,与GenBank中13株参考毒株的序列同源性在57.2%~99.0%之间,与HUN4、JXA1、TJM、GXHZ12等HP-PRRSV代表株ORF5的相似性高达90%~99%。推导氨基酸分析结果表明,各毒株的ORF5氨基酸序列因各场的不同而差异显著,存在一些突变位点,同时同一场内的不同毒株间的差异也较大,多数毒株在信号肽、跨膜功能区都存在突变位点,各毒株的潜在糖基化位点也存在差异;遗传进化树分析结果表明,15株ORF5序列均属于北美株,大部分毒株序列与2006年暴发的JXA1高度同源。总体上,各毒株之间没有呈现明显的地域性。     

绵阳市奶牛内寄生虫的调查与分析

据笔者调查,目前影响本市奶牛业健康持续发展的重要疾病主要有奶牛寄生虫病和乳房炎等。奶牛感染寄生虫不仅降低饲料报酬,还因虫体机械性损伤,分泌毒素干扰组织器官的功能使奶牛长期处于病理状态,导致产奶量下降,影响乳品质。此外,奶牛感染寄生虫常导致奶牛呈渐进性贫血和消瘦,     

猪IL-2真核表达质粒构建及对PRRSV-ORF5基因疫苗免疫佐剂作用的研究

本研究应用真核表达载体pcDNA3.1（＋）和猪白细胞介素2（IL-2）基因成功构建了IL-2的真核表达质粒（pcDNA-IL-2）,探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）ORF5基因疫苗（pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5）免疫猪的增强作用。经间接ELISA法、MTT比色法及流式细胞仪分别对pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪、pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪、pcDNA3.1（＋）空载体和灭菌水免疫对照猪的血清抗PRRSV抗体IgG、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4^＋和CD8^＋细胞比例进行检测,结果表明pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪的IgG含量、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4^＋和CD8^＋细胞比例与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪相比有显著差异（P〈0.05）。说明pcDNA-IL-2能显著增强pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫猪的体液和细胞免疫应答,可作为PRRSV基因疫苗的良好佐剂。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）早期检测方法,本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术（RT-LAMP）,针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物,利用Bst DNA聚合酶在65 ℃恒温条件下进行逆转录扩增,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和加入SYBR Green Ⅰ染料肉眼判断结果,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。结果表明,该检测方法具有良好的特异性,与其他常见病毒如猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒等无交叉反应,较普通RT-PCR灵敏性高100倍。采用RT-LAMP和RT-PCR分别对10份临床样本同时进行检测,符合率为100%。因此,本研究建立的RT-LAMP是一种可适用于临床PRRSV检测的快速、简单、灵敏、特异的检测方法。     

复合酸化剂和玉屏风散提取物对白羽肉鸡生长性能、免疫功能及抗氧化能力的影响

试验旨在研究玉屏风散提取物、复合酸化剂对白羽肉鸡生长性能、免疫及抗氧化能力的影响。选用体重一致的1日龄白羽肉鸡300只，随机分为5组，每个组5个重复，每个重复12只。5个处理组分别饲喂基础日粮（对照组）、基础日粮+250 mg/kg金霉素+60 mg/kg恩拉霉素（抗生素组）、基础日粮+600 mg/kg玉屏风散提取物（玉屏风组）、基础日粮+2 000 mg/kg复合酸化剂（酸化剂组）、基础日粮+600 mg/kg玉屏风散提取物+2 000 mg/kg复合酸化剂（联合组）。试验期42 d。结果显示：1～21 d，各处理组的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、耗料增重比（F/G）及死淘率无显著差异；联合组22～42 d和1～42 d的ADFI均优于对照组（P<0.05）;22～42 d，联合组ADG高于对照组（P<0.05）;1～42 d，与对照组比，联合组ADG和死淘率有差异性趋势（P=0.10）；联合组脾脏指数和胸腺指数均高于对照组（P<0.05）；玉屏风组、酸化剂组和联合组天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）含量低于对照组（P&l...     

仔猪水肿病的诊断与综合防制

猪水肿病是由一种定植于小肠的致病性溶血性大肠杆菌产生的毒素引起猪的急性、高度致死性、传染性肠毒血症。其特征为胃壁和颈部、齿眼、眼睑、肠系膜等部位发生水肿,发病率不高,但病死率很高,主要发生于断奶前后体况健壮、生长快的仔猪,已成为养猪业危害较严重的疾病之一,必须采取综合防制措施来预防仔猪水肿病的发生。     

绵阳地区猪源致病性大肠杆菌的耐药性监测

从四川省绵阳地区12个猪场患病仔猪病料中共分离到28株细菌。经生化鉴定和动物试验确定其中12株为致病性埃希氏大肠杆菌。药物敏感性试验表明,分离的大肠杆菌对氧氟沙星、头孢噻肟、环丙沙星、头孢拉定等敏感,对青霉素、链霉素、四环素、红霉素、庆大霉素、氨苄西林等出现不同程度的耐药性,其中耐药率较高的是青霉素(100%)、红霉素(100%)、四环素(100%)、庆大霉素(91.67%)、氨苄西林(91.67%)、链霉素(83.33%),而敏感性较高的有氧氟沙星(58.33%)、头孢噻肟(50.00%)。且菌株普遍呈多重耐药性,以7~9耐为主。     

奶牛乳房炎病原菌对中药的敏感性试验

测定了黄连、黄芩、黄柏、金银花、连翘、鱼腥草等33种单味中草药对6种奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌效果及具有较强抑菌作用的中药最低抑菌浓度。结果表明,黄连、黄芩、诃子、丹参、石榴皮、金银花等12种中草药对奶牛乳房炎病原菌具有较强的抑菌效果,且它们的最低抑菌浓度因药物种类和菌种类型的不同而呈现出差异。同时,结合单方药物的抑菌效果,配置了19种不同的中药复方,并测定了它们的抑菌效果及其最低抑菌浓度,结果表明,11种复方中药对奶牛乳房炎病原菌具有较强的抑菌作用。