旋毛虫肌幼虫期胞外囊泡对小鼠免疫保护作用

本试验通过差速超速离心法获得旋毛虫肌幼虫期胞外囊泡(Trichinella spiralis muscle larvae extracellular vesicles,Ts-ML-EVs),经透射电镜观察、纳米颗粒追踪分析、流式细胞术和Western blot鉴定.选择6～8周龄的健康雌性BALB/c小鼠,随机分为4组...     

猪源链球菌的分离与鉴定

2007年4月，锦州太和区某猪场仔猪流行关节炎、脑膜炎及败血症，多为2～6周龄仔猪。无菌采取关节炎病猪的关节液及败血症病猪的肝、脾、肺、肾，经实验室分离鉴定，证实为猪链球菌。     

猪源链球菌的分离与鉴定

2007年4月,锦州太和区某猪场仔猪流行关节炎、脑膜炎及败血症,多为2～6周龄仔猪.无菌采取关节炎病猪的关.节液及败血症病猪的肝、脾、肺、肾,经实验室分离鉴定,证实.为猪链球菌.     

C57小鼠和C57BL/6 FMR1 KO小鼠剖宫产手术及其仔鼠生长情况的比较研究

目的 C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1 KO小鼠剖宫产手术及其仔鼠生产情况的比较。方法将C57和FMR1两种小鼠分成两组,每组雌雄按1:1配对,通过剖宫产手术取得仔鼠,C57母鼠作为代乳母鼠,分别比较两种小鼠的妊娠时间、成功受孕时间、7 d成活率、产仔数、离乳率。结果 FMR1小鼠在成功受孕时间、7 d成活率、离乳率上与C57小鼠存在显著差异。结论通过剖宫产净化手术获得FMR1小鼠,为后续开展保种和育种工作提供重要保障。     

禽传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的鉴定

为鉴定传染性支气管炎病毒(IBV)的抗原表位,本研究将IBV ck/CH/LDL/091022株免疫6周龄～8周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经过有限稀释法克隆筛选,得到一株针对IBV核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体(MAb)2F2,经鉴定其染色体数目为101条,MAb亚类鉴定其重链属于IgG1,轻链属于K链.用肽扫描方法将IBV ck/CH/LDL/091022株N基因截短为具有相互部分重叠的23段,表达带GST标签的重组蛋白,与MAb 2F2进行western blot和ELISA反应后,鉴定其表位为397INWGDSAL404.将表位序列进行Blast结果表明,本研究鉴定的表位在大部分IBV株中均为保守抗原表位,为进一步建立IBV的检测方法奠定了基础.     

昆明鼠超数排卵影响因素研究

为探讨昆明鼠超数排卵的最佳条件,提高超排效果,比较促性腺激素使用剂量、孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射间隔时间、超排小鼠所处发情周期阶段及小鼠周龄等因素对昆明鼠超数排卵结果的影响。PMSG 8IU+hCG 8IU、间隔46h～48h注射组超排效果最好;3周龄、8周龄～10周龄雌鼠较4周龄～7周龄雌鼠超排效果好,小鼠发情间期或发情前期开始超排的效果显著高于发情周期的其他时期。     

周龄对昆明小鼠超排效果及胚胎体外发育的影响

试验探讨超数排卵效果较好及进行胚胎体外培养研究最佳的昆明小鼠周龄。结果表明,8和10周龄与其他周龄在排卵数和受精卵数方面均差异极显著(P0.01),而在受精率方面8周龄除与10周龄差异不显著外(P0.05),与其他周龄相比均差异显著(P0.05),其中8周龄排卵数为(68.00±10.74)个/只,受精卵数为(58.75±7.97)个/只;6周龄小鼠的1-细胞(92.80%)和2-细胞卵裂率(95.65%)最高;在同周龄情况下,1-细胞与2-细胞的卵裂率差异极显著(P0.01),其中2-细胞的卵裂率高。综上所述,6~8周龄的雌鼠所获得的受精卵个数多且稳定性高。     

滴鼻途径感染猪血凝性脑脊髓炎病毒小鼠的免疫动态变化

应用石蜡切片、ELISA等方法,通过对小鼠脾脏病理组织学观察以及脾脏指数、IL-2、IFN-γ和TNF-α等重要细胞因子的检测,研究猪血凝性脑脊髓炎病毒（Hemagglutinatingencephalomyelitisvirus,HEV）感染不同周龄（4、6周龄）BALB／c小鼠后的免疫动态变化特点。结果显示,无论是4周龄还是6周龄小鼠,在被HEV感染后的1～3d,脾小体生发中心增大并在红髓有多量浆细胞出现,第4天脾小体开始缩小,其周边和中央动脉周围有多量淋巴细胞聚集,到第5天脾小体生发中心消失并在其周边和中央动脉周围淋巴细胞增多。另外,脾脏指数和血清中的TNF-α、IFN-γ、IL-4浓度均呈现先升高后降低的趋势,IL-2含量变化不明显,而IL-10含量较少几乎检测不到。结果表明,HEV感染初期,小鼠对侵入的病毒做出一定的免疫应答,但是随着病毒复制,病毒量的增大,小鼠的免疫反应受到抑制。同时不同周龄小鼠的被检指标降低或升高程度及持续时间不同,表明HEV的免疫、发病与小鼠感染年龄之间存在一定相关性。     

猪伪狂犬病病毒变异株(Fujian-LY)人工感染小鼠动物模型的建立

为建立猪伪狂犬病病毒(PRV)变异株人工感染小鼠动物模型,将本实验室分离鉴定的猪PRV变异株(Fujian-LY)进行连续10倍稀释后,对6周龄SPF级BALB/c小鼠进行腹股沟皮下接种攻毒,每个稀释度接种5只小鼠,测定其LD_(50),观测小鼠感染、致病的多项指标,试验期为7 d。结果显示,该毒株对小鼠的LD_(50)为3.7×10~3 TCID_(50)/0.1 mL,在不同的感染剂量下各攻毒组小鼠的临床症状、死亡率等各项指标差异明显,其中以2.3×10~5 TCID_(50)的攻毒剂量接种后小鼠未发生急性死亡,且能表现出以神经症状为主的典型伪狂犬病症状;病理剖检可见发病小鼠脑膜充血,肺脏出血,胸腺、脾脏严重萎缩等病理变化;病理组织学检查结果显示该毒株对攻毒小鼠全身多个重要组织器官均造成了严重的病理损伤,同时采用PCR及免疫组化的方法在这些组织内均能检测到PRV抗原。结果表明,本研究已成功建立了PRV变异株感染小鼠动物模型。     

C57BL/6J小鼠促性腺激素注射时间对诱导超排卵的影响

目的:确定4周龄C57BL/6J小鼠注射促性腺激素的最佳间隔时间,提高超排效果,从而优化C57BL/6J近交系作为供体鼠的生物净化体系。方法:70只4周龄的C57BL/6J雌鼠随机分为5组,腹腔注射10IU的PMSG,10IU的h CG注射间隔时间分别为47h,47.5h,48h,48.5h,49h,比较超排的卵母细胞数和受精率等数据。结果:第1组与第5组的卵母细胞数有极显著差异,其他数据差异不显著。结论:4周龄C57BL/6J小鼠对PMSG应答产生的内源性黄体生成素(LH)释放量不足以引起排卵,因而h CG注射时间无需严格控制在注射PMSG后46~48h内。     

SPF级近交系BALB/c小鼠的体重、体长、尾长和脏器系数的测定

本中心于2002年从国家啮齿类种子中心上海分中心引进5公5母近交系BALB/c小鼠进行饲养繁殖,目前本中心已经建立起核心群、血缘扩大群和生产群,至今已达到F5代,已经取得广东省实验动物微生物监测所颁发的SPF级微生物检测合格证(合格证号2005A 013)。为了了解近交系BALB/c小鼠幼龄期3周龄、性成熟期6周龄、体成熟期9周龄和老年期72周龄等不同阶段雌雄小鼠的体重、身长、尾长、脏器重量和脏器系数的情况。我们分别对生产群小鼠不同阶段雌雄小鼠的体重、身长、尾长、脏器重量进行测量,为科研工作者提供基础数据。1材料与方法1.1动物核心群…     

6株牛支原体分离株对鸡胚和小鼠的致病性研究

为通过复制不同牛支原体(Mycoplasma bovis)感染模型,筛选出毒力较强的M.bovis分离株,本研究采用等浓度的6株M.bovis分离株(W70、1738、677、Q1、Q3、JX02)感染7日龄健康鸡胚和6周龄～8周龄SPF级BALB/c小鼠,观察并比较各组受试动物死亡情况及病理剖检变化,取死亡鸡胚尿囊液或卵黄液,以及小鼠肺组织进行病原学分离培养和PCR鉴定.实验结果表明:各感染组BALB/c小鼠虽然出现一定程度的体重增长抑制,但小鼠并无任何临床呼吸道症状和病理剖检变化,并且病原学分离培养及PCR鉴定结果也均为阴性.在鸡胚感染试验中,6株M.bovis分离株对鸡胚表现出较好的感染性和致死性.感染组鸡胚致死率与对照组比较差异极显著(p＜0.01),而6个分离株间鸡胚致死率也表现出显著差异(p＜0.01).其中,以W70株感染后鸡胚死亡率最高,达63.3％;677株感染后死亡率最低,仅为20％,鸡胚死亡情况大多发生在感染后一周内,而后期仅有零星死亡.综合上述实验结果,初步筛选出W70株、1738株、Q1株、Q3株为毒力相对较强的分离株;与此同时,BALB/c小鼠的建模还需进一步研究.     

还原型谷胱甘肽(GSH)在小鼠体外受精中的作用初探

为研究还原型谷胱甘肽(GSH)在小鼠体外受精中的作用,试验选用C57BL/6J小鼠(雄鼠12周龄,雌鼠4周龄)、ICR受体鼠(8-10周龄)。GSH添加浓度分别为终浓度0、1 mmol/L、2 mmol/L,每组超排雌鼠5只,转基因小鼠净化试验每个品系超排雌鼠10只。结果显示,在受精液(HTF)中添加GSH 1 mmol/L时,小鼠体外受精效果最好,受精率达70.8%,胚胎形状正常,未受精单细胞与异形胚较少,胚胎移植平均妊娠率达93.5%。     

SPF级BALB/cC57BL/6小鼠繁殖性能及生长发育的比较研究

为提高SPF级实验动物的质量,选择10周龄BALB/c C57BL/6小鼠各50只（雌雄各半）,采取雌雄1？1近亲交配繁殖,并统计其生长发育和繁殖性能指标。BALB/c小鼠1～3周龄的平均窝重及离乳后的体重增长明显大于C57BL/6小鼠（p〈0.01）。第1胎交配分娩间隔,第1和第3胎离乳育成率品系间差异均有显著性（P〈0.05及P〈0.01）。BALB/c小鼠的体格比C57BL/6小鼠大,带乳能力比C57BL/6小鼠强但产仔能力比C57BL/6小鼠弱。     

狂犬病病毒HepFlury株P蛋白单克隆抗体的制备及间接免疫荧光检测方法的建立

本研究以原核表达的融合型的重组蛋白pET32a(+)-P(狂犬病病毒HepFlury株P蛋白)免疫6~8周龄的BALB/c小鼠,取脾细胞和SP2/0按常规杂交瘤技术进行细胞融合,经间接免疫荧光方法(IFA)筛选及对mAb进行初步鉴定。经3次亚克隆后获得1株稳定分泌表达的杂交瘤细胞株5G8。     

槟榔不同部位水提液对小鼠生理指标的影响

本试验旨在探索槟榔鲜果不同部位水提液对小鼠生理指标的影响,试验分别选用4周龄和7周龄SPF级KM小鼠,体重分别为（18±2）g和（35±2）g,将48只4周龄小鼠随机分成4组,雌雄各半,4组分别采用槟榔鲜果果皮、果仁和全槟榔水提液及蒸馏水（对照组,CK）对小鼠灌胃,每天1次,连续14 d,测定小鼠的存活率、采食量、饮水量和体温。将36只7周龄雄鼠随机分为4组,灌胃方法同上,测定小鼠精子畸形率。结果表明,果仁处理组的小鼠在试验的第6天全部死亡,其它处理组均无死亡;与CK组相比,各槟榔处理组小鼠的采食量和饮水量均减少,其中果仁处理组最低且与其它处理组差异显著（P<0.05）,全槟榔组次之;各槟榔处理组小鼠的体温均低于CK组,其中果皮处理组体温变化最小并与CK组相似（P>0.05）,果仁处理组小鼠体温最低且与其它处理组差异显著（P<0.05）;与CK组相比,各槟榔处理组的小鼠精子畸形率均提高,其中果仁处理组的精子畸形率最高（P<0.01）,其次是全槟榔处理组（P<0.01）,然后是果皮处理组（P<0.05）,同时3个槟榔处理组间差异亦达极显著（P<0.01）。本试验结果说明槟榔鲜果果仁水提液对小鼠产生的影响最大,其次是全槟榔水提液,果皮水提液对小鼠影响较小。     

老年性骨质疏松模型小鼠的颅骨增龄性变化

为对比观察快速衰老型小鼠(SAMP6)与正常老化型小鼠(SAMR1)颅骨的增龄性变化,本试验采用活体micro-CT扫描定量观察SAMP6和SAMR1小鼠24、30、36周龄时的颅骨骨体积密度(BV/TV)。小鼠36周龄完成micro-CT扫描后,解剖颅骨,HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对比观察小鼠颅骨组织学特点并测量破骨细胞数目。结果显示,不同年龄SAMP6的颅骨BV/TV值均显著低于同龄SAMR1;随年龄增长,SAMP6颅骨BV/TV显著降低,而SAMR1颅骨BV/TV无显著变化;与SAMR1相比,SAMP6颅骨内外骨板更薄,板障更宽;板障内破骨细胞更多,且差异显著。本试验表明随年龄增长,SAMP6的颅骨骨体积密度降低,且均小于同龄SAMR1,而SAMR1的无显著变化。     

牛初乳免疫球蛋白IgG单克隆抗体的制备

为了制备牛初乳免疫球蛋白IgG单克隆抗体,试验利用标准IgG蛋白作为免疫原,免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA法筛选,采用有限稀释法,经过3次克隆筛选,获得2株稳定分泌抗IgG蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为E7和D9,并进行了亚类鉴定.结果表明:该杂交瘤细胞培养上清液抗体效价抗体...     

IL-17介导山羊传染性胸膜肺炎小鼠模型肺部炎症反应研究

为阐明IL-17等相关炎性因子在山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumoniae,CCPP)中的作用,将20只6周龄~8周龄SPF雌性Balb/c小鼠随机分成试验组和对照组,每组10只,建立CCPP小鼠模型,按时间点处死小鼠后采集血液和肺组织,进行组织病理学分析和肺部山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)载量检测鉴定模型。应用real-time PCR检测肺部IL-17及其相关细胞因子、趋化因子及其受体的mRNA水平,应用ELISA检测血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平,应用流式细胞术检测肺组织中中性粒细胞和巨噬细胞数量变化。结果显示,试验组小鼠精神状态不佳,肺部病理损伤严重,Mccp载量为5.9×10^4 copies/μL,与对照组相比有极显著差异(P<0.001);与对照组小鼠相比,试验组小鼠肺组织IL-17相关炎性因子mRNA表达升高,血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平显著升高(P<0.001,P<0.01),肺部中性粒细胞和巨噬细胞数量极显著增加(P<0.01,P<0.001)。说明成功构建了CCPP小鼠模型,在Mccp诱导小鼠肺部炎症早期,IL-17参与肺部炎症反应。     

禽传染性喉气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备

为制备抗鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gD的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达gD重组蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,经细胞融合筛选获得一株稳定分泌抗ILTV gD蛋白的杂交瘤细胞株,MAb亚型经鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够识别ILTV。ILTV gD蛋白的MAb的制备,为ILTV检测方法的建立奠定了基础。