脂质体对鸡新城疫疫苗免疫增强作用的研究

应用薄膜分散法(TFDM)和反相蒸发法(REM)制备了两种脂质体一新城疫(L-ND)疫苗.由REM制备的L-ND疫苗,无论应用于高母源抗体鸡,还是低母源抗体鸡,L-ND疫苗组的HI抗体效价均明显高于单纯疫苗组(P<0.05);在免疫后2～3周内,其ANAE~+淋巴细胞百分数也均高于单纯疫苗组(P<0.05);对高母源抗体鸡的有效免疫期比单纯ND疫苗延长1周,对低母源抗体鸡的有效免疫期延长3周.     

H_7Re-1疫苗筛选及免疫效果评估

为筛选免疫效果好的H_7Re-1疫苗,本试验选择四个厂家的H_7Re-1疫苗,分别对SPF鸡进行两次免疫。免疫后通过抗体检测结果筛选出H_7抗体最好的疫苗在肉种鸡场应用。对免疫H_7Re-1疫苗的三个肉种鸡场定期采血,跟踪检测H_7抗体,评估免疫效果。结果表明:A公司的H_7Re-1疫苗在SPF鸡上的免疫抗体最高达11.13log2。三个种鸡场免疫A公司H_7Re-1疫苗后,H_7抗体均显著上升,抗体峰值均在9log2左右,免疫效果较好。     

种鸡开产前免疫不同新城疫-传染性支气管炎-禽流感H9三联油苗的效果观察

为了探讨尽可能延长母鸡开产后免疫保护期的可能性,本试验选用市售的两种新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-禽流感(AI)H9三联灭活商品疫苗在广西地区主要地方品种三黄鸡的两个品系黄1和黄2上分别进行对比免疫试验。种鸡开产前的150日龄分别使用疫苗A(精制浓缩型油苗)、疫苗B(普通油苗)免疫,然后分别于免疫时以及免疫后的1个月、2个月、3个月、4个月和5个月分别使用HI试验和ELISA测定两组鸡只相应产生的血清抗体滴度。结果表明,在黄1品种上的试验,疫苗A免疫组的ND抗体水平高于疫苗B免疫组,两组鸡的H9、IB抗体水平则无明显差异;在黄2品种的试验,疫苗A免疫组的ND、H9、IB抗体水平均高于疫苗B免疫组;开产前免疫疫苗A后5个月,黄1和黄2品种均仍能维持较高的抗体水平,其中黄1品种可推迟补免时间20多天,黄2品种推迟补免时间1个月。     

不同水平新城疫循环抗体对不同疫苗免疫的影响

鸡体内的抗体按其来源分为两种，即被动获得的抗体-母源抗体和主动获得的抗体-疫苗免疫后刺激机体产生的抗体(即循环抗体)。关于体内抗体对疫苗免疫的影响不同学者持不同的观点，这就给生产中免疫程序的制订带来困难。为了进一步探讨这一问题以便指导生产，本试验选择了具有不同水平新城疫循环抗体的成年鸡，采用不同的新城疫疫苗进行免疫，以观察其对疫苗免疫的影响，结果为：不同水平的新城疫循环抗体对不同疫苗免疫的影响没有显著差异。报告如下。 1 材料与方法 1.1 试验动物 50日龄健康海兰褐母鸡140只、非免疫公鸡2只(供采血用)。 1.2 新城疫疫苗 LaSota疫苗(中国兽药监察所提供)、Ⅰ系疫苗(北京生药厂生产)、油佐剂疫苗(山东农科院SPF鸡研究中心生产)。     

禽流感DNA疫苗和转移因子联合免疫效果研究

为研究禽流感DNA疫苗和转移因子联合免疫的免疫增强效果,试验用DH5α工程菌增殖的重组质粒pCAGGoptiHA5和转移因子联合免疫SPF鸡(转移因子采用口服和注射两种方式进行协同免疫),免疫后不同时间监测各组免疫鸡只的免疫器官指数、血清HI抗体水平变化情况。结果表明:联合免疫试验组抗体水平显著高于DNA疫苗单独免疫组,联合免疫组鸡只的法氏囊、胸腺和脾脏免疫器官指数均显著增加(P0.05),但转移因子的口服和注射两种免疫方式之间差异不显著(P0.05)。说明禽流感DNA疫苗和转移因子联合免疫协同作用显著。     

检测鸡球虫四价弱毒疫苗抗体应答的ELISA方法的建立及初步应用

本研究旨在建立检测鸡球虫四价弱毒疫苗(柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫)抗体应答的酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步阐明鸡免疫四价弱毒疫苗及攻虫后的抗体应答。将300羽岭南黄鸡分为A(免疫攻虫组)、B(不免疫不攻虫组)、C(不免疫攻虫组)共3个组。A组雏鸡在4日龄时进行首免,11日龄时鸡开始二免,二免完成后(17日龄时)对A组及C组的鸡进行攻虫(28万个4种球虫的混合卵囊/羽),7 d后检查A、C两组鸡的存活率。在鸡二免和三免完成后,分别对A、B组进行采血,通过优化最佳抗原包被浓度、酶结合物工作浓度及最佳血清稀释度,建立了ELISA方法来检测鸡体对球虫四价弱毒疫苗的抗体应答情况。A组鸡血清抗体的平均D值为0.870和0.904,明显高于B组鸡的平均D值0.261和0.270,证明了鸡体免疫疫苗后可以刺激产生相应抗体。免疫鸡攻虫后的存活率和抗体应答的检测结果,都充分说明了此鸡球虫弱毒四价疫苗具有良好的免疫原性,所建立的ELISA方法为今后评价鸡球虫弱毒四价疫苗的免疫效力提供了有效手段。     

鸡新城疫和鸡痘疫苗口服接种的免疫应答

用鸡新城疫F毒株和鸡痘HP_1毒株对鸡单独和联合经口免疫,比较其体液免疫反应和免疫原性。两个鸡群各自的抗新城疫病毒血凝抑制(HI)抗体滴度和抗鸡痘病毒的被动血凝(PHA)抗体滴度相似。各组鸡经第二次接种后血清中IgG浓度显著增高,新城疫疫苗诱发产生的IgG量显著高于鸡痘疫苗。两种疫苗联合免疫和新城疫F毒株疫苗单独免疫,血清中产生的IgG浓度无明显区别。用新城疫和鸡痘强毒,在不同日龄经联合和单独免疫获得的保护力并无显著差异。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡病毒载量和免疫效果的比较研究

为比较鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡法氏囊及外周血淋巴细胞(PBMC)中的病毒载量及免疫效果,本研究采用IBD免疫复合物疫苗和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,于免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d采用SYBRGreenI荧光定量PCR、ELISA方法及中和试验检测免疫鸡法氏囊和PBMC中IBDV载量和免疫鸡血清中IBDV抗体滴度,并攻毒,计算两种疫苗的保护率。结果显示,活疫苗免疫7d时IBDV在法氏囊和PBMC中的载量均比其它时间点的高,在14d时到达到最高,之后逐渐下降;两种疫苗刺激产生的IBDV抗体滴度随免疫时间的延长呈升高趋势;在免疫后7d攻毒两种疫苗的保护率均为0,其它时间的攻毒保护率均为100%。本研究结果表明,IBD免疫复合物疫苗与活疫苗免疫后病毒在鸡体内开始大量复制的时间并不相同,但免疫效果基本相同。本实验为IBD免疫复合物疫苗的研发提供实验依据。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗的安全性和免疫效力试验

用鸡法氏囊病免疫复合疫苗(IBDV-Icx)和常规IBD活疫苗分别免疫1日龄商品鸡和SPF鸡,进行疫苗的安全性及免疫效力比较.免疫后8d检测,IBDV-Icx免疫组鸡的法氏囊未见明显萎缩,而传统弱毒疫苗免疫组鸡的法氏囊萎缩明显;免疫后28d各组用IBDV标准强毒株进行攻击,IBDV-Icx免疫组鸡的攻毒保护率均为10/10,常规IBD活疫苗对照组分别为8/10及9/10.免疫后3个月,IBDV-Icx免疫组血清抗体可达AGP1∶32,攻击强毒仍为10/10保护,而常规IBD活疫苗免疫后2个月抗体AGP为0,攻毒保护率为1/10,免疫后3个月时攻毒10/10发病.     

禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因重组质粒在鸡体内免疫效果的研究

为检测禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)外膜蛋白H基因的免疫效果,本研究利用PCR技术扩增禽P.multocida的omph基因片段,并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组质粒pOMPH,经体外表达检测后进行动物免疫,实验动物共分4组:pOMPH组、弱毒疫苗组、pcDNA3.1(+)空载体组和PBS对照组。免疫后对各组鸡进行免疫指标检测,并于三免后两周进行攻毒。结果显示,pOMPH免疫组和弱毒疫苗免疫组血清抗体水平持续上升,与两对照组相比差异极显著(p<0.01),并且pOMPH免疫组血清抗体水平明显高于弱毒疫苗组(p<0.05)。淋巴细胞增殖试验结果也表明,pOMPH和弱毒疫苗组的刺激值(SI值)极显著高于两对照组(p<0.01),并且重组质粒组高于弱毒疫苗组。免疫鸡外周血淋巴细胞产生的IFN-γ极显著高于两对照组(p<0.01),并且pOMPH组高于弱毒疫苗组(p<0.05)。攻毒后pOMPH组和弱毒疫苗组的保护率分别为66.7%和73.3%,表明pOMPH虽然可以为免疫鸡提供一定的保护,但效果不如商品化的弱毒活疫苗,还需采取措施进一步增强其免疫原性。     

禽流感油乳剂灭活疫苗的研究

将6种不同亚型的禽流感病毒（AIVH2N9、H3N8、H5N1、H5N2、H7N1、H9N2）分别接种鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活,以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活疫苗。疫苗接种4和8周龄SPF鸡,注苗后均无不良反应。每种亚型疫苗免疫后14天和21天攻毒保护率均达90％-100％。分别用H5N1和H9N2亚型灭活疫苗免疫8周龄SPF鸡、25和28周龄健康商品蛋鸡,免疫后7天产生免疫力,14天保护率达100％,21天后抗体达高峰,仔鸡接苗后最高血凝抑制（HI）几何平均滴度（GMT）为7.3-8.0log2,蛋鸡为8.0-10.5log2。免疫后180天,抗体效价不低于6.5log2。免疫后180天分别以AIV攻击,H5亚型疫苗组,用强毒攻击无一发病和死亡,对照鸡全部发病死亡;H9亚型疫苗组,对照鸡在攻毒后72小时停产,免疫鸡无一发病且产蛋正常,对同源攻毒的保护率达100％。     

重组禽流感灭活苗和禽流感灭活苗对鸡免疫效果的观察

用重组禽流感灭活苗接种10日龄、14日龄和21日龄的SPF鸡,接种后HI抗体效价无显著差异。将H5N1和H5N2疫苗分别接种21日龄SPF鸡,结果表明,H5N1和H5N2均能刺激SPF鸡产生较高的HI抗体;分别接种三黄鸡,接种后21 d,H5N1能刺激三黄鸡产生较高的HI抗体;而H5N2不能刺激三黄鸡产生合格的HI抗体,与SPF鸡免疫组相比差异显著。经过二次接种,HI抗体平均为8.9 log2,与SPF鸡组接种后42 d的各组相比差异不显著,而与一免后21 d的各组HI抗体效价相比差异显著。表明应用禽流感灭活苗对三黄鸡免疫接种,必须进行二免方可达到理想免疫效果,而应用重组禽流感灭活苗对三黄鸡进行免疫接种,一次免疫即可获得较高的HI抗体效价。     

免疫剂量和母源抗体对禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫效力的影响

利用表达 H 5亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素基因的重组鸡痘病毒 (r FPV- HA)以不同剂量免疫 1日龄 SPF鸡、有或无母源抗体 (FPV、AIV H5)的商品鸡 ,并于免疫后 2 1d利用同亚型 AIV通过肌肉注射进行致死性攻击 ,通过检测免疫后 HI抗体应答、比较攻毒后发病率和死亡率评价免疫剂量和母源抗体对 r FPV- HA免疫效力的影响。结果发现 ,免疫后 2 1d,15 %～ 2 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可检出 HI抗体 ,而含母源抗体商品鸡检测不到 HI抗体。利用H5亚型 AIV致死性攻击后 ,10 3～ 10 6 PFU的 r FPV- HA可保护 95 %～ 10 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡抵御强毒攻击 ,使之免于发病和死亡 ;而不同剂量 r FPV- HA接种的含母源抗体商品鸡有 80 %～ 90 %发病和死亡。结果表明 ,在较宽的免疫剂量范围内 ,r FPV- HA对 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可提供良好的保护 ,显示出一定的应用前景 ;母源抗体影响 r FPV- HA诱导的免疫应答 ,且提高免疫剂量亦不能克服其干扰作用 ,这提示在实际应用中需优化免疫程序 ,避免母源抗体干扰。     

禽流感H9亚型流行毒株交叉免疫保护试验

采用北京市农林科学院畜牧兽医研究所1998年-2008年在北京及河北省分离的4株禽流感病毒H9亚型流行毒株,分别制备不同分离毒株灭活疫苗,免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果表明,用4个不同时期的分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,各免疫组鸡禽流感(H9亚型)的HI抗体效价均明显上升,所诱导产生的HI抗体效价基本相同;不同时期分离毒株大多产生了较好的交叉保护力。用1998年、2004年及2006年分离的流行毒株制备出的灭活疫苗能够保护2008年流行毒株的攻击。     

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒及人工感染鸡抗体的监测

本研究采用ＡＧＰ、ＨＩ等试验方法，对经Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒以及经Ｈ９Ｎ２活毒人工感染后的ＳＰＦ鸡抗体产生、消长规律进行了测定，结果表明人工感染ＳＰＦ鸡和免疫鸡一周后，ＡＧＰ的检出率即可达到１００％；Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗自免疫后一周内即可产生ＨＩ抗体，２１－２８天达到高峰，并能对相同亚型病毒感染引发良好的免疫反应。     

不同佐剂的重组禽流感病毒灭活痘苗免疫效力试验

禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIv）是禽流行性感冒（简称禽流感,Avian Influenza,AI）的病原。其中高致病性的H5N1亚型AIV可以造成鸡群的大批死亡,对家禽养殖业影响严重,并可引起人的感染和死亡。通过接种疫苗能有效地控制禽流感的传播,专家们认为,选择优质的疫苗佐剂是新型疫苗走向成功的关键。本试验将同一批次的禽流感（H5N1亚型,Re-6株）抗原分别与国产白油佐剂、法国进口白油佐剂及美国进口白油佐剂3种佐剂制备成重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-6株）,进行物理性状、无菌检验,均符合规定标准。将以上三种疫苗分别免疫21日龄SPF鸡,0．3mL／只,在免疫后的一周、两周、三周、四周,每组抽取10只分别采血,分离血清;18日龄蛋鸡0．3mL／只,在免疫后的一周、两周、三周,每组抽取10只分别采血,分离血清,21d后二免O．5mL／只,二免蛋鸡在免疫后的两周、三周、四周、两个月、三个月每组抽取10只分别采血,分离血清;每次连同对照组5只血清用禽流感病毒H5亚型（Re-6株）抗原测定HI抗体,试验结果表明,美国进1：2白油佐剂制备的重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,1Ke-6株）免疫鸡群后,HI抗体效价最高,免疫持续—段时间后,效价仍保持较高,同时做安全检验对比试验,各肌肉注射疫苗2．0mL／只,连续观察14d,试验结果表明,以上三种佐剂制备的疫苗均安全无副反应。     

鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗与同类产品的免疫效力比较

将鸡新城疫、禽流感（H9亚型,SY株）二联灭活疫苗与市售同类对照苗分不同剂量皮下注射接种30日龄SPF鸡,免疫后定期采血,分离血清,通过检测血清中ND和AI的HI抗体水平比较各组鸡抗体产生期、抗体高峰及免疫持续期,并进行不同血凝抗原检测HI抗体结果的对比。试验鸡血清样品检测结果显示,免疫鸡抗体产生期为免后2周内,免后8周和5周ND和AI的HI抗体滴度分别达到峰值,抗体至少可持续28周以上,两种灭活苗之间免疫效果基本相当。     

鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎四联灭活疫苗IB部分效力试验研究

采用《进口兽药质量标准》中传染性支气管炎灭活疫苗效力检验方法,对ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗IB部分进行了效力检验。先用IBH120活疫苗作基础免疫,免疫后3～4周采血,然后用四联苗加强免疫,四联苗免疫后3～4周采血,将二次血清分别作IBHI试验。结果显示,IBH120活疫苗免后3～4周,其IBHI效价为3．6～4．610g2（1：12—1：24）,用四联苗加强免疫3～4周后,IBHI达6．2—8．610g2（1：74～1：388）,四联苗免后的IBm抗体滴度比免前提高了4．9～26倍,均大于3倍的标准。试验证明,该方法用于四联苗内IB部分效力检验是可行的。     

H9亚型禽流感病毒流行毒株交叉免疫攻毒保护试验

采用1998-2009年在河北、河南及山东分离的3株禽流感H9亚型流行毒株,分别制备灭活疫苗,免疫SPF鸡,免疫后21 d,采血测定HI抗体,然后用从上述3个地区及北京分离的共5株禽流感H9亚型流行毒株进行攻击,观察不同时期及地点分离的H9亚型流行毒株的交叉免疫攻毒保护效果。结果显示,用不同时期及地点的3个分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,各免疫组试验鸡H9亚型禽流感的HI抗体效价均明显上升,不同毒株灭活疫苗所诱导产生的HI抗体效价存在着不同程度的差异,用同源毒株作为抗原测定免疫组鸡的血清样品,可获得较高的HI抗体效价。攻毒试验结果证明,对不同时期及地点分离的禽流感H9亚型流行毒株间产生了较好的交叉保护力。用1998年分离的WD98株制备出的灭活疫苗对目前的流行毒株仍具有较好的保护效力。