乳酸菌发酵扶正解毒散复合制剂的制备及其在肉鸡上的应用研究

本研究旨在制备一种乳酸菌发酵的扶正解毒散复合制剂,并探索其对肉鸡生长性能和免疫器官发育的影响。首先,利用单因子试验法将不同比例的黄芪、板蓝根、淫羊藿及复合中药提取液添加至乳酸菌的培养基中,测定中药对乳酸菌生长的影响;其次,利用正交试验对复合药液培养基进行优化,确定最佳的培养基配方;最后,选取1日龄健康AA肉仔鸡450只,随机分为3组,每组3个重复:对照组(抗生素)、试验Ⅰ组(发酵制剂)、试验Ⅱ组(未发酵制剂),分别在试验的第21、42天测定肉鸡的生长及免疫器官指标。试验结果显示,黄芪、板蓝根、淫羊藿及复合药液组的最高活菌数与对照组相比分别提高了261.64%、505.48%、156.16%、564.38%。通过正交试验得到复合发酵液最适生产培养基配方:复合药液100 mL、红糖2.0 g、蛋白胨0.3 g、豆粕2.0 g,发酵液活菌数为7.13×10⁹ CFU/mL。肉鸡生长试验结果显示,1~42日龄阶段,Ⅰ、Ⅱ组的平均日增重分别比对照组提高了17.84%和8.22% (P<0.05),料肉比分别比对照组降低了10.88%和4.66% (P<0.05),平均日采食量明显高于对照组 (P<0.05);21、42日龄时,Ⅰ、Ⅱ组脾指数分别比对照组提高了11.04%和13.58% (P<0.05)、7.79%和7.41% (P<0.05),法氏囊指数分别比对照组提高了31.30%和26.23% (P<0.05)、15.65%和11.48% (P<0.05)。以上试验结果表明中药提取液能促进乳酸菌的增殖,复合发酵液能够提高肉鸡的生长性能并促进免疫器官的发育。     

复方中药发酵液对肉鸡生长性能、肠道结构及免疫功能的影响

试验旨在研究复方中药发酵液对肉鸡生长性能、肠道结构和免疫功能的影响。复方中药发酵液由穿心莲、白头翁、黄连、黄柏、木香、败酱草和甘草按比例醇提后发酵制得。选择1日龄AA肉鸡270只,随机分成3组,每组3个重复,每个重复30只。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组4日龄开始饲喂基础饲粮+5 mg/kg恩拉霉素,中药复方发酵液组4日龄开始按肉鸡体重加1mL/kg中药复方发酵液添加到半天的饮水中,饲喂基础饲粮。试验期42 d。结果表明:与对照组相比,中药复方发酵液组能够显著增加平均日增重,显著降低耗料增重比,显著提高空肠绒隐比;与抗生素组相比,中药复方发酵液组能够显著降低耗料增重比、空肠绒毛高度、隐窝深度和绒隐比;与对照组和抗生素组相比,中药复方发酵液组的胸腺指数、法氏囊指数、IgG、IgM和IgA均显著提高。综上所述,肉鸡基础饲粮中添加复方中药发酵液(1mL/kg)可提高肉鸡生长性能,改善肠道结构,提高免疫功能。     

穿心莲内酯干混悬剂对人工感染大肠杆菌致肉鸡腹泻的药效评价

本试验旨在评价穿心莲内酯干混悬剂对大肠杆菌感染致肉鸡腹泻的治疗效果,为其临床应用提供试验依据。选取12日龄健康试验鸡300只,随机分为5个组,每组4个重复,每个重复15只。包括空白对照组、大肠杆菌ETECO101攻毒组、大肠杆菌攻毒加100和200 mg·L^-1穿心莲内酯干混悬剂及60 mg·L^-1粘菌素组。肉鸡15日龄通过腹腔注射0.2 mL含5×10⁸ cfu·mL^-1 ETECO101的生理盐水感染细菌,空白对照组腹腔注射0.2 mL生理盐水。细菌感染前3 d开始通过饮水给药,早、晚各给药1次,每次每个重复700 mL,连续给药至攻菌后第3天停止给药。每组随机选取1个重复,于攻菌后24 h和第5天分别选取6只鸡采血、剖检和取组织样,用于肝组织病理学观察、小肠微结构分析、免疫器官指数测定和血液生化指标分析。每组剩余3个重复（45只）试验至攻菌后第7天,计算存活率、粪便评分、平均日增重（ADG）和平均日采食量（ADFI）,以评价药物的药效。结果显示,相对于ETECO101组,药物含量为100和200 mg·L^-1的穿心莲内酯干混悬剂组肉鸡存活率分别提高13.3和17.8个百分点（P<0.05）,减轻大肠杆菌感染导致的腹泻,显著提高肉鸡ADG （P<0.01）和ADFI（P<0.01）;200 mg·L^-1穿心莲内酯干混悬剂组显著地增加了攻菌后24 h肉鸡脾脏和法氏囊指数（P<0.01）,降低了攻菌后第5天肉鸡血清中球蛋白（GLB）和白蛋白（ALB）含量（P<0.05）,有效地抑制肉鸡血清中丙二醛（MDA）含量的增加,提高肉鸡血清超氧化物歧化酶（SOD）活力（P<0.01）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力（P<0.01）。同时,200 mg·L^-1穿心莲内酯干混悬剂组可显著改善肉鸡空肠绒毛高度（P<0.05）,以及绒毛高度与隐窝深度的比值。综上所述,饮水中添加穿心莲内酯干混悬剂可减少大肠杆菌感染导致的鸡死亡,改善肉鸡生长性能、血清氧化应激状态和空肠肠道形态,提高法氏囊指数,对大肠杆菌感染而导致的肉鸡腹泻具有显著疗效。     

富含棉籽肽发酵棉粕对AA肉鸡生长性能和免疫功能的影响

试验旨在研究富含棉籽肽的发酵棉粕（枯草芽孢杆菌-1和扣囊复膜酵母Su 2019混菌发酵）对AA肉鸡生长性能和免疫功能的影响。试验选取240羽1日龄健康的AA肉鸡母雏,根据体重相近原则分为4组,对照组（CK,添加6%棉粕）,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组（分别添加4%、6%、8%富含棉籽肽发酵棉粕）,每组4个重复,每个重复15羽鸡。试验分为1~21和22~42日龄两个阶段,试验期42 d。每个阶段结束时,对肉鸡称重,采集血液样本,测定每个阶段肉鸡的生长性能和免疫功能指标。结果表明：①与CK相比,Ⅱ组肉鸡21 d 平均日增重（ADG）极显著提高（P<0.01）,且显著高于Ⅰ组（P<0.05）;Ⅲ组肉鸡42 d平均日采食量（ADFI）显著提高（P<0.05）,且极显著高于Ⅱ组（P<0.01）;②与CK相比,Ⅲ组肉鸡21 d胸腺指数显著增加（P<0.05）,且其42 d胸腺指数显著高于Ⅰ组（P<0.05）;Ⅱ组42 d法氏囊指数极显著提高（P<0.01）;③Ⅲ组肉鸡21 d吞噬指数显著高于其他处理组（P<0.05）;试验Ⅰ、Ⅱ组42 d吞噬指数均显著高于CK（P<0.05）;④Ⅲ组肉鸡21 d的IL-2、IL-1β含量显著高于CK和Ⅰ组（P<0.05）,IL-6含量极显著高于CK（P<0.01）;与CK相比,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组42 d的IL-2含量均显著提高（P<0.05）,Ⅲ组IL-1β极显著提高,而IL-6含量极显著降低（P<0.01）,Ⅰ、Ⅲ组TNF-α含量极显著提高（P<0.01）;⑤与CK相比,试验Ⅲ组肉鸡21 d的IgM、IgA含量极显著提高（P<0.01）,Ⅰ组IgG含量极显著高于其他组（P<0.01）;Ⅱ组42 d的IgM和IgA含量均极显著提高（P<0.01）。综上所述,肉鸡日粮中添加一定比例的富含棉籽肽的发酵棉粕,可以提高肉鸡的生长性能和免疫功能。     

中兽药复方组合与抗生素防治肉鸡呼吸道疾病的协同效应

为探讨中兽药复方组合与抗生素防治肉鸡呼吸道疾病的协同效应,本研究在规模化鸡场两栋鸡舍内分别随机选取100只3日龄白羽肉鸡,分为两组（Ⅰ组和Ⅱ组）：Ⅰ组饮水添加抗生素,Ⅱ组在添加抗生素基础上的不同阶段分别饲喂中兽药玉屏风口服液（3~7 d）、射干地龙颗粒（10~16 d）、双黄连口服液（22~25 d）、麻杏石甘口服液（27~31 d）。分别于8日龄免疫鸡传染性支气管炎活疫苗、新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗和新城疫-禽流感二联灭活疫苗,免疫后1、7、14、21、28 d采集血清和气管组织,检测新城疫、禽流感（H9）、传染性支气管炎疫苗的抗体水平,观察气管组织病理变化,计算免疫器官指数和平均日增重。结果显示,Ⅱ组的成活率较Ⅰ组提高了1.23%,Ⅱ组末体重与平均日增重极显著高于Ⅰ组（P<0.01）,分别提高了561.25和16.63 g/d;Ⅱ组病鸡呼吸道症状较Ⅰ组轻,病程短,肝脏和心脏无明显病变,脾脏指数在36 d显著高于Ⅰ组（P<0.05）。免疫后21 d,Ⅱ组新城疫、传染性支气管炎和禽流感（H9）疫苗的抗体水平达到最高,显著高于Ⅰ组（P<0.05）;免疫后28 d,Ⅱ组新城疫抗体水平极显著高于Ⅰ组（P<0.01）。综上所述,4种清热解毒、止咳平喘、清肝利胆的中兽药复方组合使用与抗生素促生长和预防肉鸡呼吸道疾病具有协同效应。     

小檗碱对黄羽肉鸡器官指数、抗氧化能力和肠道免疫功能的影响

【目的】 本试验旨在研究小檗碱对黄羽肉鸡器官指数、抗氧化能力和肠道免疫功能的影响。【方法】 选用1日龄快大型岭南黄羽肉鸡360只,随机分为3组,每组6个重复,每重复20只。对照组（NC）饲喂基础饲粮;抗生素组（PC）饲喂基础饲粮+200 mg/kg土霉素钙+250 mg/kg那西肽;小檗碱组（BBR）饲喂基础饲粮+250 mg/kg小檗碱。在试验第21、42和63天,从每个重复中随机挑选1只接近平均体重的鸡,采集心脏、肝脏、脾脏和法氏囊分别称重,记录重量,计算其器官指数;刮取空肠黏膜,测定超氧化物歧化酶（T-SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量;提取空肠黏膜总RNA,合成cDNA,测定紧密连接蛋白与炎症因子相关基因的mRNA表达量。【结果】 小檗碱对黄羽肉鸡器官指数无显著影响（P>0.05）。与对照组相比,在饲粮中添加小檗碱显著提高了63日龄黄羽肉鸡空肠黏膜的总抗氧化能力（T-AOC）,显著降低了63日龄黄羽肉鸡空肠黏膜的丙二醛（MDA）含量（P<0.05）。抗生素组21日龄黄羽肉鸡空肠黏膜的闭合蛋白（Occludin）和闭锁小带蛋白-1（ZO-1）的mRNA表达量均显著高于对照组和小檗碱组（P<0.05）。与对照组和抗生素组相比,小檗碱显著提高了63日龄黄羽肉鸡空肠黏膜的跨膜蛋白-1（Claudin-1）的mRNA表达量（P<0.05）,显著降低了21、42与63日龄黄羽肉鸡空肠黏膜的核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1（NOD1）的mRNA表达量（P<0.05）;小檗碱组与抗生素组42日龄黄羽肉鸡空肠黏膜的白介素-1β（IL-1β）和白介素-8（IL-8）的mRNA表达量均显著低于对照组（P<0.05）;与对照组相比,小檗碱显著降低了63日龄黄羽肉鸡空肠黏膜的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-8的mRNA表达量（P<0.05）。【结论】 饲粮中添加250 mg/kg小檗碱可增强63日龄黄羽肉鸡肠道抗氧化能力,改善肠道屏障,降低肠道炎性因子的表达,从而改善肠道免疫功能。     

中药复方对大肠杆菌感染雏鸭的防治效果研究

本研究对由地锦草、石榴皮等组成的中药复方对大肠杆菌感染雏鸭的临床治疗效果进行了研究，旨在为临床大肠杆菌感染提供新的治疗手段。试验选取50只健康1日龄雏鸭，随机分为5组，每组10只。试验组分别为空白对照组、模型组、阿莫西林组、中药复方高剂量组（DS_H）和低剂量组（DS_L）。给药组在3日龄开始给药，连续给药至试验结束，共10 d。除空白对照组外，在雏鸭6日龄时用大肠杆菌腹腔注射进行攻毒，0.5 mL/只。比较各试验组雏鸭的病死率；对病死鸭和各组存活鸭进行解剖，观察肝脏和小肠的病理剖检及HE染色切片；检测血常规及血清生化各项指标，评价中药复方对感染大肠杆菌雏鸭的治疗效果。结果显示，DS_H、DS_L和阿莫西林均能够有效降低感染雏鸭的死亡率；与模型组相比，阿莫西林和DS_H、DS_L组均可减少肝脏、小肠等器官的损伤。与空白对照组相比，模型组的谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）显著升高（P<0.05），碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）和尿素（UREA）极显著升高（P<0.01），且模型组和给药组血液中白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、血小板（PLT）等指标变化显著（P<0.05）。与模型组相比，给药组ALP显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01），血液中WBC、RBC、HGB、PLT等指标极显著升高（P<0.01），说明给药组机体损伤程度低于模型组。以上结果表明，中药复方可以减轻因大肠杆菌所引起的机体损伤，且作用效果与阿莫西林相近。     

发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响

试验以产气荚膜梭菌感染肉仔鸡建立坏死性肠炎模型,研究发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌对感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响。将336只1日龄爱拔益加肉仔鸡随机分成4个处理组,每个处理6个重复。4个处理组分别为对照组、感染组、感染＋LF组（日粮添加1×10⁹ CFU/kg发酵乳杆菌）、感染＋BC组（日粮添加1×10¹⁰ CFU/kg凝结芽孢杆菌）。所有感染肉鸡在14~21 d经口接种A型产气荚膜梭菌。试验期为28 d。结果显示：与对照组相比,灌服产气荚膜梭菌显著降低22~28 d肉鸡的日均采食量（P<0.05）,显著增加28 d十二指肠和空肠损伤评分（P<0.05）,显著提高21 d肉鸡盲肠的产气荚膜梭菌和大肠杆菌数量,显著降低28 d回肠产气荚膜梭菌数量（P<0.05）。与感染组相比,日粮添加发酵乳杆菌显著提高21 d肉鸡回肠的乳杆菌属数量（P<0.05）,显著降低21 d盲肠大肠杆菌的数量（P<0.05）;日粮添加凝结芽孢杆菌显著降低28 d肉鸡十二指肠损伤评分（P<0.05）,显著降低21 d十二指肠隐窝深度（P<0.05）,显著提高21 d空肠绒毛高度与隐窝深度的比值（P<0.05）,显著降低21 d肉鸡回肠和盲肠的大肠杆菌数量（P<0.05）,显著提高28 d肉鸡回肠乳杆菌属数量（P<0.05）。综上所述,日粮中添加发酵乳杆菌或凝结芽孢杆菌均对感染肉鸡的肠道微生物具有调控作用;其中添加凝结芽孢杆菌有利于肠道绒毛发育,缓解肠道损伤,一定程度上提高了肉鸡的生长性能,而发酵乳杆菌没有缓解肠道损伤的作用。     

发酵中药对蛋鸡生长性能、抗体水平及肠道菌群的影响

【目的】 研究发酵中药对蛋鸡生长性能、抗体水平和肠道微生物菌群的影响。【方法】 选用1日龄科宝蛋鸡84只,预饲至13日龄,于14日龄进行正式试验,将雏鸡随机分为7组,每组单笼饲养,每笼12只,分别为空白对照组（A组）,复方中药组（B组）,发酵中药低剂量组（C组）、中剂量组（D组）、高剂量组（E组）,发酵菌液组（F组）,对照药物黄芪多糖组（G组）。试验期间记录每日给料量与剩料量,于试验第1（14日龄）、14（28日龄）、28（42日龄）天清晨空腹称重,计算各阶段平均日增重、平均日采食量及料重比。于试验第7、14、21、28天每组鸡翅下静脉采血,用于抗体效价的检测。试验结束后对A、B、D、F、G组鸡进行剖检,每组取5只鸡的盲肠内容物进行高通量测序分析。【结果】 试验第1~14天,D、E组平均日采食量均极显著高于A、F、G组（P<0.01）,D、E组平均日增重极显著或显著高于A、F组（P<0.01;P<0.05）;F、G组料重比均极显著低于其他各组（P<0.01）。试验第15~28天,C、E组平均日采食量均显著高于B、F组（P<0.05）,B组平均日增重极显著高于其他各组（P<0.01）,E组显著高于A组（P<0.05）;B组料重比极显著低于其他各组（P<0.01）,D、E、F、G组料重比均极显著低于A组（P<0.01）。试验第7天,各组鸡血清抗体效价均无显著差异（P>0.05）;试验第14天,E组抗体水平均显著高于A、F、G组（P<0.05）;试验第21和28天,E组抗体水平显著高于A组（P<0.05）。D组Chao1和Observed species指数最高,但与其他组间无显著性差异（P>0.05）。在门水平上,D和G组盲肠中拟杆菌门相对丰度均显著高于A组（P<0.05）;在属水平上,D组盲肠中拟杆菌属相对丰度均显著高于A组（P<0.05）。【结论】 发酵中药可以提高鸡的生长性能和抗体水平,对肠道菌群有明显的调控作用。     

丁酸梭菌对肉鸡钙磷代谢和胫骨指标的影响

试验通过在基础日粮中添加丁酸梭菌,研究其对肉鸡钙磷代谢和胫骨指标的影响。选择1日龄180只健康AA肉鸡,随机分入3个处理组,每个处理组6个重复,分别为对照组、抗生素组（ATB）和丁酸梭菌组（CB）。对照组饲喂基础日粮,ATB组在基础日粮中添加5 mg/kg黄霉素、75 mg/kg金霉素和20 mg/kg吉他霉素,CB组在基础日粮中添加2.5×10⁸ CFU/kg丁酸梭菌,试验期42 d。结果显示,与对照组相比,①CB组肉鸡血清钙（Ca）、磷（P）含量差异不显著（P>0.05）,21日龄ATB组肉鸡血清钙含量显著提高（P<0.05）;②21日龄CB组肉鸡胫骨强度显著提高（P<0.05）;42日龄CB组肉鸡胫骨磷含量极显著提高（P<0.01）;③21日龄CB组肉鸡排泄物中磷含量极显著降低（P<0.01）,并与ATB组无显著差异;42日龄CB组肉鸡排泄物中钙含量极显著提高（P<0.01）,排泄物中磷含量显著提高（P<0.05）。综合上述结果,在AA肉鸡基础日粮中添加2.5×10⁸ CFU/kg丁酸梭菌有利于改善肉鸡的胫骨发育,改善肉鸡对钙、磷的吸收利用,能有效降低21日龄肉鸡钙、磷排泄量,但并未降低42日龄肉鸡排泄物中钙、磷含量。     

Effect of Fermented Traditional Chinese Medicine on Preventing and Treating Colibacillosis and Immune Regulation in Broilers

This study was aimed to evaluate the efficacy of the fermented traditional Chinese medicine on treating colibacillosis and immune regulation in chickens.240 healthy 1-day-old AA White-feathered broilers were selected to carry out the control test of Escherichia coli O78 LD₅₀ and compound Chinese medicine fermentation broth on colibacillosis.The therapeutic effect was evaluated at 28 days old,and the immune organ index,antioxidant index and intestinal flora were measured at 28 and 42 days old.The results showed that the infection time of Escherichia coli was delayed from 4 to 24 h after the treatment of fermentation liquid of traditional Chinese medicine fermented by Lactobacillus plantarum and Bacillus subtilis.The effective rates of high dose group (1.0 g/mL),medium dose group (0.5 g/mL) and antibiotic group (neomycin sulfate) were 80.0%,76.7% and 80.0%,and the cure rates were 80.0%,70.0% and 70.0%,respectively.Compared with infection and antibiotic groups,the thymus index and bursa index in high dose group at 28 days old were increased by 165.6%(P<0.05),25.4%(P>0.05) and 82.6%(P<0.05),94.3% (P<0.05),respectively.The thymus index and bursa index at 42 days old were increased by 97.4%,82.0% and 43.4%,27.5% (P<0.05),respectively.The T-AOC,TP,GSH-Px and T-SOD antioxidant indexes were significant difference (P<0.05),and significantly increased the content of lactic acid bacteria in intestine and reduced the content of Escherichia coli at 28 and 42 days old (P<0.05).In conclusion,the medium dose group of fermented traditional Chinese medicine (0.5 g/mL) had obvious antibacterial effect and provided substitute for antibiotics,the high dose group of fermented traditional Chinese medicine (1.0 g/mL) was significantly better than antibiotics for broilers.     

Study on the Prevention and Control Effect of Chinese Herbal Compound on E.coli Infected Ducklings

In this study,the clinical therapeutic effect of Chinese herbal compound composed of Euphorbia humifusa Willd.and Punica granatum L.on ducklings infected with Escherichia coli (E.coli) was studied in order to provide a new therapeutic method for clinical treatment of E.coli.Fifty healthy one-day-old ducklings were selected and randomly divided into five groups,ten ducklings in each group.The experimental groups were blank control group,model group,amoxicillin group,Chinese medicine compound high-dose group(DS_H) and low-dose group(DS_L).The administration group started administration at 3 days of age,continued administration for 3 days,and continued administration until the end of the experiment,10 days total.Except for control group,when the ducklings were 6 days old,E. coli was intraperitoneally injected for challenge,0.5 mL/head.The mortality of the experimental groups was compared.The dead ducks and the surviving ducks were dissected,the pathological section of liver and small intestine and HE staining sections were observed.The blood routine indexes and serum biochemical analysis were detected to evaluate the therapeutic effect of traditional Chinese medicine compound on E.coli infected ducklings.The results showed that the high and low doses of the traditional Chinese medicine compound and the amoxicillin could effectively reduce the mortality of infected ducklings.Compared with model group,amoxicillin and traditional Chinese medicine high and low dose groups could reduce liver,small intestine and other organs damage.Compared with control group,aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) in model group increased significantly (P<0.05),and alkaline phosphatase (ALP),lactate dehydrogenase (LDH),UREA also showed extremely significant upward trend (P<0.01),and the WBC,RBC,HGB,PLT and other indicators changed extremely significantly(P<0.05).Compared with model group,the alkaline phosphatase(ALP)value was significantly or extremely decreased in the administration group(P<0.05;P<0.01),and the blood WBC,RBC,HGB and PLT indexes were extremely significantly increased (P<0.01).The results indicated that the degree of body damage in the administration group was lower than that in the model group.     

4味中药复方治疗鸡大肠杆菌病效果的研究

为了评价由小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶4味中药组成的方剂抗鸡致病性大肠杆菌的效果，首先对病料进行分离鉴定，然后采用药敏试验测定药物抑菌圈直径，通过小鼠测定中药安全性，最后人工诱发大肠杆菌病模型治疗试验，并应用中药分别以高、中、低3个剂量（1、0.5和0.25 g/mL）对试验鸡进行灌服治疗。结果显示，麦康凯培养基上呈现红色菌落，革兰氏染色镜检见红色短小杆菌；生化鉴定结果显示，葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、吲哚和MR显阳性，三糖铁产酸产气，枸橼酸盐、VP和硫化氢显阴性。对分离细菌进行PCR检测，检测基因与对照基因均得到大小为1 466 bp的特异性条带。中药、西药环丙沙星抑菌圈直径分别为15.2和18.3 mm。小鼠灌服中药后全部存活，各试验组小鼠平均增重和空白对照组差异不显著（P>0.05），未见不良反应。中药高、中、低3个剂量组、环丙沙星组、感染对照组、空白对照组的存活率分别为96.7%、93.3%、63.3%、93.3%、50.0%和100%，中药高、中、低3个剂量组和环丙沙星组治愈率分别为96.7%、93.3%、63.3%和93.3%。中药高、中剂量组平均增重及胸腺重差异不显著（P>0.05），但显著高于中药低剂量组（P<0.05）；中药高、中剂量组和环丙沙星组脾脏重差异不显著（P>0.05），但显著高于中药低剂量组和感染对照组（P<0.05）。结果表明，1和0.5 g/mL中药口服液抗菌效果明显，与环丙沙星效果相似，中药低剂量效果不明显。     

乳酸菌发酵中药制剂防制鸡球虫病条件的优化及应用

本试验旨在摸索乳酸菌发酵抗鸡球虫中药制剂的最佳制备条件,研究其对鸡球虫病的防制效果。首先对乳酸菌发酵中药制剂的最佳菌株、接菌量、时间、温度、pH条件进行摸索,制得乳酸菌发酵中药制剂,然后选取150只AA+肉鸡进行效果试验。试验随机分为对照组、感染组、乳酸菌发酵组、西药组和纯中药组,21日龄时计算各试验组鸡生长性能及免疫细胞因子IgG、IL-12、IFN-γ、IL-10的含量。结果显示,3.0%戊糖片球菌PP培养于浓度1.0 g/mL的中药培养基,在pH 6.0、37℃的温度下培养12 h,戊糖片球菌PP的活性最高,生长良好;且乳酸菌发酵组鸡的平均日增重显著高于感染组(P<0.05),高于纯中药组及西药组,但差异不显著(P>0.05),与对照组增重效果相当(P>0.05);其料重比(F/G)显著低于感染组(P<0.05),低于纯中药组、西药组,但差异不显著(P>0.05);其IL-12、IFN-γ的表达均显著高于感染组(P<0.05),高于纯中药组和西药组,但差异不显著(P>0.05);其IL-10、IgG显著高于感染组(P<0.05),稍高于纯中药组及西药组(P>0.05)。结果表明经优化的乳酸菌发酵中药制剂可提高感染球虫鸡的生长性能,且能增强机体免疫水平。     

Studies on Preparation and Application of Fuzhengjiedusan Compound Preparation Fermentated by Lactic Acid Bacteria in Broilers

This study was aimed toproduce compound preparations of Fuzhengjiedusan fermented with Lactic acid bacteria and analyze its effectson growth performancesand immune organ growth of broilers. Firstly, to identify the influence of traditional Chinese medicine on the growth of Lactic acid bacteria, the medium for the growth of Lactic acid bacteria was filled with different proportions of Astragalusmembranaceus, Radix Isatidis, Epimedium and compound Chinese herbal medicine extracts by single factor test. Secondly, to confirm the optimum medium, orthogonal test was used to optimize the culture medium of compound medicine liquid. Finally, 450 one-day-old healthy AA broilers were randomized into three groups, each group had 3 repeats: control group (antibiotics), group Ⅰ(fermented preparation), group Ⅱ (unfermented preparation). The growth and immune organ index were determined in 21 and 42 days after administration. The results showed that the highest viable count of Astragalusmembranaceus, Radix Isatidis, Epimedium and compound medicine liquid groups were increased by 261.64%, 505.48%, 156.16% and 564.38%, respectively, compared with control group. The optimum medium composition was compound medicine liquid 100 mL, brown sugar 2.0 g, peptone 0.3 g, soybean meal 2.0 g. The viable count of fermentation liquid was 7.13×10⁹ CFU/mL.The production results showed that in period of 1~42 days, the daily weight gain of group Ⅰ and Ⅱ were separately increased by 17.84% and 8.22% (P<0.05) than that of the control. What's more, the feed conversion rate was reduced by 10.88% (P<0.05). The average daily feed intake was significantly higher than control group (P<0.05). At 21 and 42 days, the spleen index of group Ⅰ were improved by 11.04% and 13.58% (P<0.05), respectively. The bursal index were raised by 31.30% and 26.23% (P<0.05), respectively. However, the spleen index of group Ⅱ were improved by 7.79% and 7.41% (P<0.05), respectively. The bursal index were raised by 15.65% and 11.48% (P<0.05), respectively. On the basis of the above results, it could be suggested that Chinese herbal medicine extracts can promote lactic acid bacteria proliferation and compound fermentation liquid can improve growth performance in broilers, as well as immune organ development.     

三味清热类中药水提物对肉仔鸡肠道菌群和黏膜屏障功能的影响

为了研究单味中药对肠道菌群和肠黏膜损伤的调节和修复作用,选用金银花、连翘和紫花地丁三味清热类中药对大肠杆菌所致肉仔鸡肠道菌群失调和黏膜屏障功能障碍进行治疗,为单味中药在提高肠道细菌的有益菌群和保护肠黏膜屏障提供可靠的理论依据。选取100只1日龄雄性肉仔鸡,分成5组,每组20只,空白组正常饲喂,模型组和中药组于15~17 d腹腔注射大肠杆菌O₇₈（1.0×10⁶ CFU/mL）,1 mL/只。中药组在第18天开始饮用中药,连续7 d,各中药组动物给药量为生药量1 g/kg。在给药后第7和14天,每组取6只鸡心脏釆血,采用ELISA法按照试剂盒说明进行D-乳酸（D-LA）、二胺氧化酶（DAO）和内毒素（ET）的检测。采集空肠肠段和盲肠。采用实时荧光定量PCR检测空肠紧密连接蛋白（（闭合小环蛋白-1（ZO-1）、闭锁蛋白（Occludin）和闭合蛋白-1（Claudin-1））的mRNA的相对表达量。盲肠送检测公司检测中药对盲肠菌群多样性的影响。试验结果表明,金银花、紫花地丁和连翘均可以降低给药后第7和14天肉仔鸡血清（DAO活性）、D-LA和ET含量。在给药后第7天,金银花组ZO-1和Occludin的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）;连翘组Claudin-1和Occludin的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）;在给药后第14天,金银花组ZO-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,紫花地丁组ZO-1和Claudin-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,连翘组ZO-1、Claudin-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）。金银花、紫花地丁和连翘均可提高给药后第7天厚壁菌门占比（P<0.05）,金银花、紫花地丁可提高给药后第14天拟杆菌门占比（P<0.05）,金银花、紫花地丁抑制给药后第7和14天变形菌门的增殖,紫花地丁和连翘抑制给药后第7天放线菌门的生长（P<0.05）,连翘、金银花可以显著提高给药后7和14 d乳酸杆菌占比,紫花地丁可以显著提高给药后7 d乳酸杆菌占比（P<0.05）,紫花地丁显著提高给药后第14天未分类毛螺旋菌种相关菌属的占比。综上,金银花、紫花地丁和连翘均可以降低肉仔鸡血清DAO活性、D-LA和ET含量,减少毒素入侵。金银花可以提高ZO-1、Occludin的mRNA相对表达量,连翘可提高ZO-1、Claudin-1和Occludin的mRNA相对表达量,保护肠道黏膜;紫花地丁可提高ZO-1、Claudin-1的mRNA相对表达量。金银花、紫花地丁和连翘均可使肠道OTU数目增多,在不同程度上促进有益菌群繁殖,抑制致病菌群生长,具有调节肠道菌群结构的作用。     

中药联合益生菌对大肠杆菌性小鼠腹泻的保护作用

【目的】研究中药联合益生菌对大肠杆菌性小鼠腹泻的保护作用。【方法】通过正交试验筛选中药联合益生菌最佳因素配比。取60只小鼠随机分为空白组、模型组、中药组、益生菌组和中药联合益生菌组,每组12只。空白组小鼠腹腔注射生理盐水(0.2 mL/只),模型组、中药组、益生菌组和中药联合益生菌组均先腹腔注射分离菌悬液1×10⁷ CFU/kg,然后中药组按10 mL/kg灌胃中药液(其中蒲公英提取物浓度为0.25 g/mL,黄芪总黄酮和黄芪多糖浓度均为0.05 g/mL),益生菌组按4 mL/kg灌胃枯草杆菌悬液(菌含量5×10⁷ CFU/mL),中药联合益生菌组按上述量灌胃中药液和枯草杆菌混合液,每天定时灌胃给药1次,连续3 d。每日记录小鼠腹泻、体重、采食量等情况。末次给药12 h后分离心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏,称重并计算脏器系数;血液分析法检测血液学指标;取粪便及小肠内容物检测粪便隐血情况并进行细菌计数;ELISA法检测小鼠血清和小肠组织中髓过氧化物酶(MPO)活性。【结果】中药联合益生菌最佳因素配比为A₁B₂C₂D₂。与空白组相比,模型组小鼠腹泻率100%且无自愈现象,症状和剖检病变明显,腹泻指数极显著上升(P＜0.01),体重、采食量均极显著下降(P＜0.01),肝脏、脾脏器官指数均显著升高(P＜0.05),淋巴细胞比率(LYM)、中间细胞比率(MID)均显著下降(P＜0.05),粒细胞比率(GRAN)极显著上升(P＜0.01);与模型组相比,中药组和中药联合益生菌组腹泻指数极显著下降(P＜0.01),体重、采食量显著上升(P＜0.05),中药组肝脏、脾脏器官指数显著下降(P＜0.05),中药联合益生菌组脏器系数极显著下降(P＜0.01),中药组、益生菌组及中药联合益生菌组LYM显著上升(P＜0.05)、GRAN显著下降(P＜0.05)。粪便隐血检测结果显示,模型组检测呈强阳性;中药组、益生菌组呈弱阳性,中药联合益生菌组呈阴性。与空白组相比,模型组小鼠肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性均极显著上升(P＜0.01);与模型组相比,中药组和中药联合益生菌组小鼠肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性均显著下降(P＜0.05)。【结论】中药联合益生菌可降低腹泻指数、肝脏和脾脏器官指数,增加体重、饮食量,使粪便隐血转阴并降低肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性,从而对大肠杆菌性小鼠腹泻产生协同保护作用。