哺乳动物SRY基因研究进展

 尽管SRY基因的发现已有10多年，但到目前为止，人们还没有弄清楚SRY基因是如何调控胚胎双性腺发育成睾丸的。经过10多年的研究，人们对SRY基因有了新的认识。作者综述了SRY基因的功能，SRY蛋白以及SRY基因在性腺中表达的最新研究进展。     

在缺少SRY基因的男性个体中SOX9的表达上调

在哺乳动物中,正常的性别是由是否存在Y-染色体基因SRY所决定的。SRY基因在未分化的性腺中表达以后,大量与睾丸分化相关的转录因子和生长因子基因开始特异性表达。然而,在XX雄性个体中这些基因一定在缺少SRY基因的情况下得到上调,但是XX雄性个体中缺少SRY基因的原因还不清楚。作者检测了标记的典型性腺基因在缺少SRY基因的XX雄性睾丸中的表达。结果发现,RT-PCR和免疫组化研究结果显示在缺少SRY基因的XX雄性的睾丸组织中SOX9,DAX-1,Ad4BP/SR-1,WT-1,GATA-4和MIS得到了表达。这些病人睾丸组织中SOX9的表达水平是正常XY个体睾丸组织中的1.9倍,而Ad4BP/SF-1,DAX-1和MIS的表达水平SRY缺少的XX个体睾丸低于XY个体的睾丸。所有的XX病人被发现在每个二倍体基因组中带有两个拷贝的SOX9基因,如同正常的XX雌性和XY雄性。XX雄性病人带有两个拷贝的DAX-1基因和正常的XX雌性一样,而正常XY雄性带有1个DAX-1基因。资料表明Lesions影响SOX9的表达是缺少SRY基因的XX雄性性别决定的关键因素,并且Ad4BP/SF-1,DAX-1和MIS表达水平的降低有...     

哺乳动物性别决定因子研究

哺乳动物性别决定是以位于雄性Y染色体短臂上被称为SRY基因为调控中心、多基因参与的级联调控过程,包括初级性别决定和次级性别决定,前者是由染色体决定性腺的发育方向,后者通常是指由性腺分泌的激素决定性腺以外的身体表型,即第二性征。本文主要论述了参与哺乳动物性别决定与调控的相关基因、可能作用机制及其研究进展等。     

SRY基因研究进展及其在动物性别鉴定中的应用

SRY基因是哺乳动物雄性的性别决定基因。研究发现SRY基因的启动能够促进雄性发育,从而控制动物性别。因此SRY基因在动物性别鉴定和性别控制中发挥了重要的独特作用。本文从3个方面阐述了应用SRY基因进行性别鉴定,同时又论述了利用SRY基因进行性别控制的应用现状和发展方向,以期为将来能有效利用该基因达到性别控制提供思路。     

扩增SRY基因鉴定牛、羊胚胎性别的初步研究

本研究利用本试验室设计的SRY基因3对常规PCR引物扩增牛SRY基因和羊的SRY基因，结果表明：第2对引物扩增出公牛和公羊基因组的DNA 750 bp左右清晰条带，而母牛、母羊基因组DNA元此扩增条带，说明第2对引物可以应用于牛和羊的早期胚胎性别鉴定；     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物，根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明：使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段；而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段，其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果，而常规PCR则需要20～30个细胞，所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别，同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。     

奶牛SRY基因HMG box酵母表达载体构建与表达

研究从牛血中提取总RNA,设计特异性引物,利用RT-PCR技术扩增出SRY基因HMGbox基因片段,将该片段与pMD18-T载体连接并转化到E.coliTop10中,提取质粒并用EcoRⅠ、AvrⅡ酶消化,将消化后的目的基因纯化并回收,与经同样酶消化并纯化回收的载体pPIC9K连接再转化到E.coliTop10,获得重组表达质粒pPIC9K-SRYHMGbox,筛选出阳性酵母表达载体pPIC9K-SRY-HMGbox在酵母菌中诱导表达。结果表明:成功构建了pPIC9K-SRY-HMGbox酵母表达载体,并获得了奶牛SRY基因HMGbox酵母表达蛋白,为进一步利用SRY基因HMGbox酵母体外表达蛋白最终实现性别控制奠定了基础。     

用PCR扩增兔SRY基因的研究

用家兔外周血提取基因组DNA,根据欧洲家兔SRY基因的cDNA序列中开放性阅读框部分设计引物,采用PCR技术对基因组DNA进行了SRY基因检测。结果显示,SRY基因(+)是雄性决定基因,这对于幼兔的性别鉴定、性别选择及在胚胎时期诊断性连锁疾病有重要意义。     

奶牛SRY基因核心保守区真核表达载体构建及序列分析

SRY基因是哺乳动物性别分化与控制的主导基因,参与有序的、多层次调控性别分化和控制的过程。本研究从牛血中提取总RNA,设计特异性引物,利用RT-PCR技术扩增出SRY基因HMG box基因片段,将该片段与pMD18-T载体连接并转化到大肠杆菌(E.coliTop)10中,提取质粒并用EcoRⅠ、AvrⅡ酶消化,将消化后的目的基因纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPIC9K连接并转化到E.coliTop10,获得重组表达质粒pPIC9K-SRYHMG box,经PCR、酶切、测序验证了此载体构建成功,为下一步使用毕赤酵母表达SRY蛋白打下基础。     

奶牛SRY基因核心保守区真核表达载体构建及序列分析

SRY基因是哺乳动物性别分化与控制的主导基因,参与有序的、多层次调控性别分化和控制的过程.本研究从牛血中提取总RNA,设计特异性引物,利用RT-PCR技术扩增出SRY基因HMG box基因片段,将该片段与pMD18-T载体连接并转化到大肠杆菌(E.coli Top)10中,提取质粒并用EcoRⅠ、AvrⅡ酶消化,将消化后的目的基因纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPIC9K连接并转化到E.coliTop10,获得重组表达质粒pPIC9K-SRYHMG box,经PCR、酶切、测序验证了此载体构建成功,为下一步使用毕赤酵母表达SRY蛋白打下基础.     

牦牛与其他家牛属动物SRY基因多态性及其父系进化关系分析

为分析牦牛与其他家牛属动物SRY基因多态性及其父系进化关系,从5个麦洼牦牛个体基因组DNA扩增克隆SRY基因,同时从GenBank检索家牛属物种及野牛的SRY基因序列,分析家牛属物种在SRY基因的多态性及其SRY蛋白中HMG-box区域基因序列的变异特征,并基于SRY基因序列构建家牛属物种间的父系系统进化树及其网络中介图,分析进化关系。家牛属物种编码SRY蛋白N、C两端氨基酸(HMG-box侧翼)基因序列的错义突变率(0.57)显著低于编码HMG-box区域基因序列的错义突变率(0.69),推测家牛属物种间在SRY基因进化过程中的正选择同时作用于编码HMG-box及其侧翼区的基因序列;相对水牛和牦牛,欧洲野牛与黄牛的亲缘关系更近,此结果从父系侧面支持现存的黄牛牛种由已经灭绝的野牛或原牛驯化而来的观点;牦牛可能有2个或多个父系祖先;非洲水牛和江河水牛与其他牛种之间在SRY基因存在较多变异导致明显的分歧进化,也支持可划分为沼泽型和江河型2个亚种的论断。所以,家牛属物种间在SRY基因具有特殊的变异特征,物种间的父系进化关系分析结果支持前人论断。     

麦洼牦牛SRY基因克隆及序列分析

SRY是Y染色体上具体决定生物雄性性别的基因片段,是多数哺乳动物性别决定基因之一。本试验采用克隆测序SRY基因并结合生物信息学对其序列进行分析,利用软件Codon W分析麦洼牦牛、普通牛、绵羊、山羊、猪、小鼠、鸡和人该基因编码区的密码子偏好性。克隆测序得到SRY基因序列含1个690 bp的开放阅读框,共编码229个氨基酸;其编码区核苷酸序列与普通牛、绵羊、山羊、猪、小鼠、鸡、人相应序列间的一致性分别为99.9%、93.9%、91.2%、76.5%、43.3%、21.4%、69.1%。经聚类分析,麦洼牦牛首先与普通牛聚在一起,绵羊与山羊聚为一类,这两类相聚后再依次与猪、人、小鼠相聚,最后与鸡聚为一类,其结果与以往的生物学分类结果一致。该基因编码的蛋白质分子式为C₁₁₅₅H₁₈₂₇N₃₅₁O₃₄₈S₁₁,相对分子质量为2655.0,理论等电点PI为9.55,亲水性平均数为-0.855。其密码子偏好性分析显示,T3_s为0.2905、C3_s为0.3240、A3_s为0.3728、G3_s为0.2963,第3位碱基中出现G和C占第3位碱基总量的48%,同义密码子数为61。上述数据表明麦洼牦牛SRY基因编码序列与普通牛、绵羊、山羊、猪、人具有较高的一致性,在物种进化过程中较为保守。该基因对含A的密码子有较高的偏爱性,尽量避开以G结尾的密码子,且其所编码的蛋白质为亲水性蛋白。     

Male Pseudohermaphroditism in a raccoon dog (Nyctereutes procynoides)

A wild raccoon dog (Nyctereutes procynoides) which died due to a traffic accident on 18 October 2001, and was determined to be 4.5 years old, was examined. Visual appearance of the external genitalia in this animal showed to be female with a large penis-like clitoris protruding from the vulvar juncture. Visual examination of the internal genitalia revealed that the animal possessed both testes and uterus. Histological appearance of the removed gonads showed only Sertoli cells but no spermatogenesis. Using polymerase chain reaction with skin biopsy directed against the sex-determining region on the Y chromosome (SRY) gene, the genomic SRY gene was expressed as a single band and sequenced. Based on these findings, this raccoon dog was diagnosed as male pseudohermaphrodite.     

Sex determination by simultaneous amplification of equine SRY and amelogenin genes

A quick method for sex determination of horses was developed. Simultaneous amplification of the equine sex-determining region of the Y chromosome gene (SRY) and amelogenin gene (AMEL) accomplished the determination of the presence of both the Y chromosome and SRY gene. In agarose gel electrophoresis, a normal stallion showed 1 SRY band and 3 AMEL (AMELX, AMELY, and AMELX/AMELY heteroduplex) bands, and a normal mare showed a single AMELX band. In XY-mares, 3 AMEL bands were detected as in a normal stallion, but no SRY band. The present method enables a quick diagnosis for XY-mare prior to cytogenetic analysis.     

香猪SRY基因的克隆及序列分析

试验参照猪SRY基因保守序列设计了1对引物,对香猪基因组DNA进行PCR扩增。将扩增产物通过T—A互补法克隆到质粒pGEM—T载体中,筛选阳性克隆进行DNA测序。测序结果显示,香猪SRY基因开放阅读框全长627bp,编码227个氨基酸。其中核心区域HMG—box长237bp,并且编码79个氨基酸。与白鲸、人、牛、绵羊4种哺乳动物的SRY基因序列相比较,香猪和白鲸的SRY序列具有较高的相似性,相似度达82．1％。序列相似性和邻接法聚类树的结果均显示,在SRY基因中香猪和白鲸有着较近的亲缘关系,表明以白鲸为代表的鲸目和以香猪为代表的偶蹄目有较近的亲缘关系。     

兔早期胚胎PCR性别鉴定体系的建立

根据兔SRY基因序列设计两对引物作为兔雄性特异性引物,根据兔APP基因序列设计1对引物作为内标引物,分别建立了兔早期胚胎性别鉴定的双重PCR和巢式PCR反应体系,在不同浓度的基因组DNA和兔早期胚胎上进行性别鉴定应用,同时,对兔SRY巢式PCR引物特异性进行了分析。结果表明,多重PCR扩增兔基因组DNA可以准确判定其性别,扩增灵敏度为100pg基因组DNA;多重PCR鉴定24枚兔32细胞桑椹胚性别,只能对整胚成功鉴定。巢式PCR,公兔基因组DNA扩增出282bp的SRY基因片段,母兔没有扩增产物,扩增灵敏度为10pg;对24枚兔32细胞桑椹胚性别鉴定结果表明,巢式PCR可以对少至4个胚胎细胞进行准确鉴定,同一胚胎结果符合率为100%(24/24)。SRY引物只对兔雄性基因组DNA特异,而其他动物(人、牛、绵羊、小鼠)雄性DNA及兔的冲卵液,均无PCR产物。     

13/17罗伯逊易位猪SRY基因的克隆及其序列分析

以13/17罗伯逊易位纯合子(2n=36)、杂合子猪[2n=37,XY或XX,rob(13;17)]及正常猪为试验材料,根据猪SRY基因蛋白质编码区的核心序列,设计PCR引物,扩增得到SRY基因片段,随机选取克隆质粒进行测序分析。结果表明,13/17罗伯逊易位纯合子猪与正常猪的SRY基因的核心序列相比有1个碱基发生突变;而13/17罗伯逊易位杂合子猪与正常猪SRY基因的核心序列相比有5个碱基发生突变。     

红豆草生长发育的气候条件分析

红豆草系豆科红豆草属的多年生牧草 ,含有丰富的营养物质 ,是各类牲畜喜食的优良牧草。本文就青海省畜牧兽医科学院和青海省牧草良种繁殖场协作完成的“青海高寒牧区豆科牧草选育”课题 ,种植红豆草的气象条件作一分析     

Disorder of sex development (XX male, SRY negative) in a French bulldog

A female French bulldog was presented with an enlarged clitoris. Abdominal surgery revealed a normal uterus and gonads resembling testes. Histologically, the gonads contained seminiferous tubules. The karyotype was XX, and the SRY gene was not detected. A diagnosis of XX male, SRY negative disorder of sexual development was made.