扩增SRY基因鉴定牛、羊胚胎性别的初步研究

本研究利用本试验室设计的SRY基因3对常规PCR引物扩增牛SRY基因和羊的SRY基因,结果表明:第2对引物扩增出公牛和公羊基因组的DNA 750 bp左右清晰条带,而母牛、母羊基因组DNA无此扩增条带,说明第2对引物可以应用于牛和羊的早期胚胎性别鉴定;     

扩增SRY基因鉴定牛、羊胚胎性别的初步研究

本研究利用本试验室设计的SRY基因3对常规PCR引物扩增牛SRY基因和羊的SRY基因，结果表明：第2对引物扩增出公牛和公羊基因组的DNA 750 bp左右清晰条带，而母牛、母羊基因组DNA元此扩增条带，说明第2对引物可以应用于牛和羊的早期胚胎性别鉴定；     

兔早期胚胎PCR性别鉴定体系的建立

根据兔SRY基因序列设计两对引物作为兔雄性特异性引物,根据兔APP基因序列设计1对引物作为内标引物,分别建立了兔早期胚胎性别鉴定的双重PCR和巢式PCR反应体系,在不同浓度的基因组DNA和兔早期胚胎上进行性别鉴定应用,同时,对兔SRY巢式PCR引物特异性进行了分析。结果表明,多重PCR扩增兔基因组DNA可以准确判定其性别,扩增灵敏度为100pg基因组DNA;多重PCR鉴定24枚兔32细胞桑椹胚性别,只能对整胚成功鉴定。巢式PCR,公兔基因组DNA扩增出282bp的SRY基因片段,母兔没有扩增产物,扩增灵敏度为10pg;对24枚兔32细胞桑椹胚性别鉴定结果表明,巢式PCR可以对少至4个胚胎细胞进行准确鉴定,同一胚胎结果符合率为100%(24/24)。SRY引物只对兔雄性基因组DNA特异,而其他动物(人、牛、绵羊、小鼠)雄性DNA及兔的冲卵液,均无PCR产物。     

SRY基因和MCM158、MAF45鉴定哺乳动物性别

为了研究SRY基因和Y染色体上微卫星标记对性别鉴定的影响,试验以哺乳动物为研究对象,采用多重PCR技术扩增绵羊和牛基因组中Y染色体上的2个微卫星标记和SRY基因,根据其基因型进行性别鉴定,试图通过一次DNA扩增同时提供性别鉴定和基因分型的信息。结果表明:所设计的SRY基因引物具有高度特异性,是性别鉴定的主要依据;Y染色体上的MCM158、MAF45两标记由于特异性不好而不适用于性别鉴定。     

牛早期胚胎的性别鉴定PCR技术的研究

根据牛SRY(Y-染色体性别决定基因)基因序列自行设计合成3对常规PCR引物作为牛性别鉴定特异性引物,对15头公牛、20头母牛的样品进行检测.结果表明,第2对引物可清晰扩增出公牛基因组DNA750 bp左右条带,而母牛基因组DNA无此扩增条带,证明这条引物可以应用于牛的早期胚胎性别鉴定研究与应用.     

应用母体外周血中游离DNA鉴定细毛羊胎儿性别研究

本研究针对不同妊娠时期细毛羊进行胎儿性别鉴定工作。首先对外周血浆/血清分别采用加热法和酚-氯仿法提取游离DNA。通过普通PCR扩增雄性性别决定基因(sex determining region Y,SRY)和β-actin检测基因的目的片段。鉴于部分样品未扩增出SRY基因目的片段,设计2对内外引物,运用优化后的巢式PCR体系再次针对SRY目的基因展开特异性扩增。最后对每个妊娠时间段的鉴定结果和实际生产结果进行统计,计算准确率。结果表明:加热法和酚-氯仿法均成功分离提取出妊娠母羊外周血浆/血清中的游离DNA,并扩增出β-actin检测基因片段;SRY阳性样本扩增出了SRY目的基因片段和β-actin检测基因片段,SRY阴性样本只扩增出了β-actin检测基因片段;性别鉴定的平均准确率达到81.25%(19.5/24),SRY基因检出率与妊娠时间的长短呈正比。结论,本研究建立了一种基于外周血游离DNA检测细毛羊胎儿性别的非创伤性且高效低廉的产前诊断技术,但性别鉴定的准确率还有待提高。     

超微量DNA模板扩增鉴定绵羊早期胚胎性别体系优化

本实验旨在运用超微量胚胎DNA模板扩增SRY基因鉴定绵羊早期胚胎性别PCR体系和方法优化。根据绵羊Y染色体性别决定SRY基因的723 bp的保守序列设计引物,析因法建立巢式PCR体系,联合扩增SRY和GAPDH基因,经绵羊静脉血液和胚胎超微量DNA样本调整测试灵敏度后,切割40枚绵羊桑椹胚的少量胚细胞进行性别鉴定,并对PCR产物进行测序对比。结果显示:通过2%的琼脂糖电泳检测,除363 bp的GAPDH基因扩增条带公母羊皆出现外,只有公羊出现209 bp的雄性特异扩增条带。本实验建立的绵羊早期胚胎性别鉴定方法体系灵敏度可以达到约10 pg(3～4个细胞),对胚胎进行性别鉴定的准确率为100%。     

SRY基因研究进展及其在动物性别鉴定中的应用

SRY基因是哺乳动物雄性的性别决定基因。研究发现SRY基因的启动能够促进雄性发育,从而控制动物性别。因此SRY基因在动物性别鉴定和性别控制中发挥了重要的独特作用。本文从3个方面阐述了应用SRY基因进行性别鉴定,同时又论述了利用SRY基因进行性别控制的应用现状和发展方向,以期为将来能有效利用该基因达到性别控制提供思路。     

哺乳动物胚胎性别鉴定试剂盒的研究

依据牛、山羊、兔、猪等哺乳动物SRY基因高度同源性设计一对22 bp的SRY引物,按照3×2×3因子组合,建立了PCR扩增胚胎DNA最适条件。采用此最适条件扩增了15个羊-兔异种克隆胚胎DNA,结果表明PCR法可以用来鉴别哺乳动物胚胎的性别。采用设计的性别鉴定引物,按照最优PCR扩增胚胎DNA条件配制了PCR性别鉴定试剂盒。     

云南黑山羊性别决定基因体外扩增研究

对云南黑山羊 (10♂ ,2♀ )的基因组DNA性别决定基因 (SRY)进行了体外PCR扩增的研究 ,结果表明适当引物可特异性扩增出雄性个体的性别决定基因片段 (大小约为 185bp) ,而对雌性个体则不能扩增出任何片段 ;研究还利用已筛选出的性别决定基因特异性引物对少量的胚胎细胞进行了特异性扩增 ,检测了 2 0枚云南黑山羊的胚胎 ,其中有 5枚胚胎可扩增出约为 185bp的特异性片段。以上结果为山羊胚胎早期性别鉴定奠定了技术基础。     

香猪SRY基因的克隆及序列分析

试验参照猪SRY基因保守序列设计了1对引物,对香猪基因组DNA进行PCR扩增。将扩增产物通过T—A互补法克隆到质粒pGEM—T载体中,筛选阳性克隆进行DNA测序。测序结果显示,香猪SRY基因开放阅读框全长627bp,编码227个氨基酸。其中核心区域HMG—box长237bp,并且编码79个氨基酸。与白鲸、人、牛、绵羊4种哺乳动物的SRY基因序列相比较,香猪和白鲸的SRY序列具有较高的相似性,相似度达82．1％。序列相似性和邻接法聚类树的结果均显示,在SRY基因中香猪和白鲸有着较近的亲缘关系,表明以白鲸为代表的鲸目和以香猪为代表的偶蹄目有较近的亲缘关系。     

不同PCR法对牛性别鉴定的影响研究

为建立一种有效的牛早期胚胎PCR性别鉴定方法,试验以12头已知性别的牛全血为试验材料,提取基因组DNA,分别运用常规PCR法、多重PCR法和巢式PCR法进行牛性别鉴定研究,用2对SRY(Y染色体性别决定区)引物和1对牛特异性引物扩增牛核基因组DNA进行牛性别鉴定,建立3种牛性别鉴定的PCR反应体系。结果表明,3种方法准确率均为100%,其中巢式PCR法检测灵敏度可达13pg,多重PCR法整个鉴定过程约需3h。     

草原红牛胎儿成纤维细胞的分离培养及性别鉴定

为了获得高质量的草原红牛胎儿成纤维细胞,试验以发育40 d的草原红牛胎儿为材料,采用组织块贴壁法及胶原酶消化法分离纯化草原红牛胎儿成纤维细胞,并绘制生长曲线,再以SRY基因为模板设计性别鉴定引物,通过对已知性别草原红牛血液基因组PCR扩增检验所设计引物的性别特异性,最后采用基因组PCR方法鉴定分离得到的成纤维细胞的性别。结果表明:成功分离纯化出草原红牛胚胎成纤维细胞,经基因组PCR检验该细胞株性别为雄性。     

在缺少SRY基因的男性个体中SOX9的表达上调

在哺乳动物中,正常的性别是由是否存在Y-染色体基因SRY所决定的。SRY基因在未分化的性腺中表达以后,大量与睾丸分化相关的转录因子和生长因子基因开始特异性表达。然而,在XX雄性个体中这些基因一定在缺少SRY基因的情况下得到上调,但是XX雄性个体中缺少SRY基因的原因还不清楚。作者检测了标记的典型性腺基因在缺少SRY基因的XX雄性睾丸中的表达。结果发现,RT-PCR和免疫组化研究结果显示在缺少SRY基因的XX雄性的睾丸组织中SOX9,DAX-1,Ad4BP/SR-1,WT-1,GATA-4和MIS得到了表达。这些病人睾丸组织中SOX9的表达水平是正常XY个体睾丸组织中的1.9倍,而Ad4BP/SF-1,DAX-1和MIS的表达水平SRY缺少的XX个体睾丸低于XY个体的睾丸。所有的XX病人被发现在每个二倍体基因组中带有两个拷贝的SOX9基因,如同正常的XX雌性和XY雄性。XX雄性病人带有两个拷贝的DAX-1基因和正常的XX雌性一样,而正常XY雄性带有1个DAX-1基因。资料表明Lesions影响SOX9的表达是缺少SRY基因的XX雄性性别决定的关键因素,并且Ad4BP/SF-1,DAX-1和MIS表达水平的降低有...     

反刍动物性控基因SRY最新研究进展

SRY基因主导哺乳动物雄性性别决定和睾丸起始发育,在性别决定方面起着主要的调控作用。文章对反刍动物性控基因SRY的功能、与其相关的SOX基因以及其在反刍动物性别控制方面的最新研究进展进行了综述,以期为反刍动物的性别控制提供一定参考。     

利用多重PCR技术快速鉴定牛性别的研究

为了建立一套简单、快速鉴定性别的方法,试验根据牛的Beta基因及SRY基因,设计2对引物(β-1,2和SRY-1,2),对牛96个牛肉DNA样本进行PCR性别鉴定。结果表明:雄性样品扩增出了300 bp和429 bp 2条片段,而雌性样品只能扩增出300 bp 1条片段。40个牛血液DNA样本鉴定结果与实际性别对比,雄性、雌性准确率均为100%。     

尿冰在梅花鹿种群研究中的价值

冬季的野外调查可以收集到动物排在雪地或地面上的尿冰。为评价尿冰在种群生态学研究中的价值,本研究从野外收集15份梅花鹿(Cervus Nippon)尿冰、从动物园收集2份已知性别的梅花鹿尿冰,以实验室保存的2份已知性别的梅花鹿肌肉样品为对照,采用凝胶回收试剂盒提取DNA,通过cyt b和12S rRNA两个线粒体基因片段和AMEL、SRY两个核基因片段的PCR扩增,评价了尿冰DNA的可用性。结果表明:从1 mL融化的尿冰中可提取出650 ng的DNA。线粒体DNA分别成功扩增了0.472~1.2 kb的片段,核基因成功扩增了225~425 bp的片段。利用AMEL、SRY、ZFX 3个基因片段进行性别鉴定时,已知性别样品的鉴定结果均完全正确。野外尿冰样品在AMEL基因片段(大小为282 bp/225 bp)的扩增成功率为88.2%,在MT1/DSRY1—H和ZFX1-L/ZFX1-H进行复合扩增时的成功率为94.1%。上述结果说明,尿冰DNA完全可以满足基于mtDNA和核DNA的遗传学分析,是有价值的DNA来源。     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物，根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明：使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段；而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段，其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果，而常规PCR则需要20～30个细胞，所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别，同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。     

牦牛与其他家牛属动物SRY基因多态性及其父系进化关系分析

为分析牦牛与其他家牛属动物SRY基因多态性及其父系进化关系,从5个麦洼牦牛个体基因组DNA扩增克隆SRY基因,同时从GenBank检索家牛属物种及野牛的SRY基因序列,分析家牛属物种在SRY基因的多态性及其SRY蛋白中HMG-box区域基因序列的变异特征,并基于SRY基因序列构建家牛属物种间的父系系统进化树及其网络中介图,分析进化关系。家牛属物种编码SRY蛋白N、C两端氨基酸(HMG-box侧翼)基因序列的错义突变率(0.57)显著低于编码HMG-box区域基因序列的错义突变率(0.69),推测家牛属物种间在SRY基因进化过程中的正选择同时作用于编码HMG-box及其侧翼区的基因序列;相对水牛和牦牛,欧洲野牛与黄牛的亲缘关系更近,此结果从父系侧面支持现存的黄牛牛种由已经灭绝的野牛或原牛驯化而来的观点;牦牛可能有2个或多个父系祖先;非洲水牛和江河水牛与其他牛种之间在SRY基因存在较多变异导致明显的分歧进化,也支持可划分为沼泽型和江河型2个亚种的论断。所以,家牛属物种间在SRY基因具有特殊的变异特征,物种间的父系进化关系分析结果支持前人论断。     

SRY基因调控网络的研究进展

性别决定过程可能是以SRY基因为主导,由一系列上游或下游基因参入和协调的级联反应过程。研究发现,DMRT1、SOX9、SF1、WT1、LIM1、LHX9和DAX1等基因对动物性别的决定和性器官的分化起着重要作用。本文就SRY及性别相关基因调控网络的研究进展作一综述。