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根据兔SRY基因序列设计两对引物作为兔雄性特异性引物,根据兔APP基因序列设计1对引物作为内标引物,分别建立了兔早期胚胎性别鉴定的双重PCR和巢式PCR反应体系,在不同浓度的基因组DNA和兔早期胚胎上进行性别鉴定应用,同时,对兔SRY巢式PCR引物特异性进行了分析。结果表明,多重PCR扩增兔基因组DNA可以准确判定其性别,扩增灵敏度为100pg基因组DNA;多重PCR鉴定24枚兔32细胞桑椹胚性别,只能对整胚成功鉴定。巢式PCR,公兔基因组DNA扩增出282bp的SRY基因片段,母兔没有扩增产物,扩增灵敏度为10pg;对24枚兔32细胞桑椹胚性别鉴定结果表明,巢式PCR可以对少至4个胚胎细胞进行准确鉴定,同一胚胎结果符合率为100%(24/24)。SRY引物只对兔雄性基因组DNA特异,而其他动物(人、牛、绵羊、小鼠)雄性DNA及兔的冲卵液,均无PCR产物。 相似文献
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利用牛性别决定基因(SRY)和酪蛋白αs1基因(CSN1S1)分别设计雄性特异性引物和内标引物,两对引物均各设计一对嵌套式引物进行多重PCR和多重巢式PCR,用于牛早期胚胎性别鉴定。SRY基因和CSN1S1基因外、内引物扩增片断长度分别为357bp、232bp、528bp和367bp。实验结果表明,这两个引物组合建立的多重PCR扩增体系均有较高的扩增稳定性和准确率,但在常规PCR体系中,它们的灵敏度均不高(约50pg,相当于16个细胞的DNA量),这在一定程度上限制了其在胚胎性别鉴定中的应用。而由二者建立的巢式PCR灵敏度可达到5pg,故可以很好地满足胚胎性别鉴定的需要。 相似文献
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应用Sry-PCR扩增鉴定狍(Capreolus capreolus)的性别 总被引:2,自引:0,他引:2
根据人的SRY基因核心序列设计合成1对引物C1、C2,应用PCR技术对野生狍(Capreolus capreolus)Sry基因(哺乳动物Y染色体DNA雄性特异区)进行扩增.结果在野生狍雄性样本扩增出1条带(221bp).而在雌性样本未见扩增带.显示了Sry基因的性别特异性。应用这1对引物对42个未知性别狍肌肉组织样本进行了性别鉴定.结果雄性22个,雌性20个。对Sry-PCR产物克隆测序,得到185bp的Sry基因部分核苷酸序列。本试验为狍种群性别比率及其种群动态变化机制研究提供了资料。 相似文献
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牛胎儿成纤维细胞的培养及性别鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探索和建立牛胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法,试验取自怀孕40 d的奶牛胎儿耳组织用组织块贴附法进行原代培养和传代培养,用倒置相差显微镜观察成纤维细胞形态;根据牛Y染色体上的性别决定区域(SRY)基因序列设计合成1对PCR引物作为性别鉴定引物, 同时根据牛403 bp的β-珠蛋白基因序列设计1对引物作为内参照引物,建立PCR 反应体系进行性别鉴定.结果表明:分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖;阳性对照和第1牛胎儿成纤维细胞系PCR鉴定扩增得到255 bp的片段和403 bp的β-珠蛋白基因片段,第2,3牛胎儿成纤维细胞系和母牛血液PCR扩增只得到403 bp的β-珠蛋白基因片段,通过电泳证明PCR产物255 bp的片段为SRY基因片段,说明有255 bp扩增带的细胞系为雄性;无255 bp扩增带的细胞系为雌性.结果说明该方法所获得的牛胎儿成纤维细胞可在体外稳定培养,利用PCR鉴定牛胎儿性别具有简单、快速、准确的特点,可应用于基因克隆动物研究中体细胞系的早期性别鉴定. 相似文献
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在哺乳动物中,正常的性别是由是否存在Y-染色体基因SRY所决定的。SRY基因在未分化的性腺中表达以后,大量与睾丸分化相关的转录因子和生长因子基因开始特异性表达。然而,在XX雄性个体中这些基因一定在缺少SRY基因的情况下得到上调,但是XX雄性个体中缺少SRY基因的原因还不清楚。作者检测了标记的典型性腺基因在缺少SRY基因的XX雄性睾丸中的表达。结果发现,RT-PCR和免疫组化研究结果显示在缺少SRY基因的XX雄性的睾丸组织中SOX9,DAX-1,Ad4BP/SR-1,WT-1,GATA-4和MIS得到了表达。这些病人睾丸组织中SOX9的表达水平是正常XY个体睾丸组织中的1.9倍,而Ad4BP/SF-1,DAX-1和MIS的表达水平SRY缺少的XX个体睾丸低于XY个体的睾丸。所有的XX病人被发现在每个二倍体基因组中带有两个拷贝的SOX9基因,如同正常的XX雌性和XY雄性。XX雄性病人带有两个拷贝的DAX-1基因和正常的XX雌性一样,而正常XY雄性带有1个DAX-1基因。资料表明Lesions影响SOX9的表达是缺少SRY基因的XX雄性性别决定的关键因素,并且Ad4BP/SF-1,DAX-1和MIS表达水平的降低有... 相似文献
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用家兔外周血提取基因组DNA,根据欧洲家兔SRY基因的cDNA序列中开放性阅读框部分设计引物,采用PCR技术对基因组DNA进行了SRY基因检测。结果显示,SRY基因(+)是雄性决定基因,这对于幼兔的性别鉴定、性别选择及在胚胎时期诊断性连锁疾病有重要意义。 相似文献
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本研究利用本试验室设计的SRY基因3对常规PCR引物扩增牛SRY基因和羊的SRY基因,结果表明:第2对引物扩增出公牛和公羊基因组的DNA 750 bp左右清晰条带,而母牛、母羊基因组DNA无此扩增条带,说明第2对引物可以应用于牛和羊的早期胚胎性别鉴定; 相似文献
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本研究利用本试验室设计的SRY基因3对常规PCR引物扩增牛SRY基因和羊的SRY基因,结果表明:第2对引物扩增出公牛和公羊基因组的DNA 750 bp左右清晰条带,而母牛、母羊基因组DNA元此扩增条带,说明第2对引物可以应用于牛和羊的早期胚胎性别鉴定; 相似文献
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反刍动物性控基因SRY最新研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
SRY基因主导哺乳动物雄性性别决定和睾丸起始发育,在性别决定方面起着主要的调控作用。文章对反刍动物性控基因SRY的功能、与其相关的SOX基因以及其在反刍动物性别控制方面的最新研究进展进行了综述,以期为反刍动物的性别控制提供一定参考。 相似文献
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牙釉质(Amelogenin,AMEL)基因在哺乳动物X、Y染色体上存在不同程度碱基缺失,已在动物性别鉴定方面得到一定程度的应用。本试验对蓝狐牙釉质基因片段进行克隆、纯化和测序,并通过测得序列设计1对引物,对50个蓝狐DNA样本(其中25个来自雄性蓝狐精液,25个来自雌性蓝狐静脉血液)进行PCR扩增和电泳分析,鉴定蓝狐性别。结果显示,雌性蓝狐产生1条X带,雄性蓝狐产生1条X带和1条Y带,50个蓝狐DNA样本鉴定结果符合实际性别。判断所设计牙釉质基因引物可以用于蓝狐性别鉴定。 相似文献
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哺乳动物性别决定机理及性别鉴定方法研究进展 总被引:7,自引:0,他引:7
哺乳动物的性别决定是由SRY基因为调控中心、多基因参与的级联调控过程。本文综述了性别决定基因及其功能、性别决定的分子模型及性别鉴定的方法等方面的研究进展。 相似文献
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性别决定机理与性别鉴定的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
哺乳动物的性别决定是一个以SRY基因为主导,多基因参与的有序协调表达过程.作者对性别决定基因及其功能、性别决定的分子模型及性别鉴定的方法等方面的研究进展作一综述. 相似文献