提高基因转染效率方法的研究

本研究旨在提高基因转染的效率。试验使用聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导质粒pEGFP-N1转染NIH-3T3细胞,分为两组,分别进行一次转染和二次转染,于转染48h后在荧光倒置显微镜下观察。结果显示,部分细胞发出绿色荧光,二次转染组发绿色荧光的细胞明显多于一次转染组,且二次转染法可以明显提高基因的转染效率。     

培养时间和表皮生长因子对兔卵母细胞体外成熟的影响

本试验旨在探讨培养时间和表皮生长因子(EGF)对兔卵母细胞体外成熟及受精的影响。分别用切割法和针刺挤压法取经超排后母兔卵巢表面的卵母细胞颗粒细胞复合体(COCs),将COCs分别在不同时间(24、30、36及40h)和在基础培养液中添加不同浓度表皮生长因子(0、50、100ng/mL)进行体外成熟培养并观察其第一极体排出率。结果表明:①针刺挤压法获得COCs数明显高于切割法(P0.05);②体外成熟培养时间30(36)h的第一极体排出率高于24(40)h(P0.05);③添加50和100ng/mLEGF组卵母细胞第一极体排出率明显高于对照组(P0.05)。因此,①兔卵巢卵母细胞的获得方法以针刺挤压法较好;②兔卵母细胞成熟时间以30～36h为宜;③EGF对兔卵母细胞体外成熟有促进作用,在基础培养液中添加100ng/mLEGF为宜。     

浅析西泉眼水库建设对阿什河流域生态环境的影响和改善

建成后的西泉眼水库为生态环境的良性发展起着良好的推动作用 ;大量的裸露沙地正在减少 ,湿地和滩涂地逐渐增加 ,避免了水土流失现象的发生 ;气候和环境的改善将使那里成为鸟类和昆虫的良好栖息地     

鸡Mx基因原核表达载体的构建及其表达分析

旨在大肠杆菌中表达鸡抗病毒Mx蛋白,为进一步研究该基因抗病活性奠定基础.本研究通过设计一对特异性引物,从已构建好的鸡Mx基因真核表达载体pcDNA3.0-MMx上扩增出Mx基因开放式阅读框(2118 bp),并将其编码区重组于原核表达载体PGEX-6P-1中,经酶切和序列鉴定分析后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)和Rossetta-gami(DE3),并比较其表达效率.结果显示,经不同浓度IPTG诱导后,该基因在Rossetta-gami(DE3)中获得表达.SDS-PAGE检测结果显示,蛋白大小与预期结果相符,说明重组质粒pGEX-Nix在大肠杆菌中成功诱导表达出鸡Mx蛋白,为下一步鸡Mx蛋白活性检测及抗体制备奠定基础.     

美系獭兔和苏Ⅰ系粗毛型长毛兔的遗传多样性分析

采用15个微卫星标记,对关系獭免和苏Ⅰ系粗毛型长毛兔进行了遗传多样性分析。结果显示：在美系獭兔和苏Ⅰ系粗毛型长毛兔群体中,15个微卫星座位均表现出较好的多态性。关系獭兔的平均等位基因数和有效等位基因数分别为4．6000±1．0556和3．5520±0．9703个．群体期望杂合度和多态信息含量平均值分别为0．7067±0．1030和0．6501±0．1050,群体内近交系数平均值为-0．2580＋0．0033：苏Ⅰ系粗毛型长毛免的平均等位基因数和有效等位基因数分别为5．1333±1．2459和3．7506±0．8081个,群体期望杂合度和多态信息含量平均值分别为0．7270±0．0709和0．6750±0．0824．群体内近交系数平均值为-0．2300±0．003。表明两个家兔群体的微卫星座位有丰富的遗传多样性。     

用PCR扩增兔SRY基因的研究

用家兔外周血提取基因组DNA,根据欧洲家兔SRY基因的cDNA序列中开放性阅读框部分设计引物,采用PCR技术对基因组DNA进行了SRY基因检测。结果显示,SRY基因(+)是雄性决定基因,这对于幼兔的性别鉴定、性别选择及在胚胎时期诊断性连锁疾病有重要意义。     

利用微卫星标记分析五个家兔群体的遗传多样性

利用15个微卫星座位,分析了新西兰白兔、德系安哥拉兔、美系獭兔、齐卡G系肉兔、福建黄兔5个家兔群体的遗传多样性。结果表明：15个微卫星位点的平均等位基因数和平均有效等位基因数分别为7．400±1．639个和5．694±1．470个;5个家兔群体的平均基因杂合度和平均多态信息含量分别为0．7367和0．6994;新西兰白的平均基因杂合度和平均多态信息含量最高,福建黄兔最低。5个家兔群体的平均总近交系数（F_is）为-0．03,群体内平均近交系数（F_is）为-0．151,群体平均分化系数（F_is）为0．105（P〈0．001）。采用UPGMA法进行聚类分析,5个家兔群体聚为三类：新西兰白兔和德系安哥拉兔聚为一类;齐卡兔G系和美系獭兔聚为一类,福建黄兔独自为一类。     

禽流感病毒NA基因稀有密码子分析及其原核表达

通过原核表达获取禽流感病毒(AIV)NA蛋白,为深入研究该蛋白的抗病性奠定基础.本试验以pMD19-T-NA为模板,PCR扩增M基因完整开放阅读框(ORF),然后克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建表达质粒pET-NA;转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析检测;并利用稀有密码子在线分析软件对NA基因ORF进行分析.SDS-PAGE分析显示融合蛋白获得了表达,大小为65.4 ku;稀有密码子统计表明,NA基因ORF中稀有密码子的比例高达13.4%,甚至还有多个稀有密码子串联成簇存在.重组质粒pET-NA构建正确,且在Ecoli BL21(DE3)中成功诱导表达出目的蛋白.     

禽流感病毒神经氨酸酶的研究进展

神经氨酸酶是禽流感病毒的两种表面糖蛋白之一,是一种由AIV基因组第6节段编码的Ⅱ型糖蛋白。宿主细胞膜上的唾液酸（SA．又名神经氨酸）是流感病毒的主要受体。流感病毒与宿主细胞膜上SA受体结合后,才能进入细胞。而神经氨酸酶可以降解AⅣ识别的宿主细胞膜上的受体,抑制病毒进入细胞。神经氨酸酶的这一独特功能特点使其成为国内外抗禽流感病毒研究的热点之一,同时也为制备抗禽流感转基因家禽提供了理论依据。本文简要综述了禽流感病毒的背景知识,着重介绍了神经氨酸酶的结构与功能以及目前国内外神经氨酸酶的研究状况,并对其今后的研究和应用进行展望。     

苏系长毛兔微卫星多态性与产毛量关系的研究

研究了苏系长毛兔群体12个微卫星座位多态性与1岁兔产毛量之间的关系.结果表明:苏系长毛兔群体12个微卫星座位上平均检测到5.083 3个等位基因,平均有效等位基因数为3.689 7个,平均基因杂合度为0.719 9,平均多态信息含量为0.666 3.利用最小二乘法分析发现,在D3Utr2座位上,398/424基因型个体的产毛量显著低于388/424基因型和404/434基因型个体的产毛量(P<0.05);在D7Utr5微卫星座位上,163/163基因型个体的产毛量显著高于139/139基因型和139/163基因型个体的产毛量(P<0.05).