驴乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了查明导致新疆某规模化奶驴场乳房炎的主要病原菌及其生物学特性,试验采用常规微生物学方法对病原菌进行分离,采用生化鉴定管和16SrRNA的PCR扩增方法对病原菌进行鉴定,采用K-B药敏纸片法测定其耐药性,D_(600nm)值绘制细菌生长曲线,最后分析同源性并构建系统进化树。结果显示,分离株为革兰氏阴性短杆菌,能在麦康凯培养基上长出粉红色菌落,在伊红-美兰培养基上长出有金属光泽的菌落;生化鉴定分离株的葡磷胨水、赖氨酸、鸟氨酸、棉子糖、山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖试验均呈阳性,而苯丙氨酸和硫化氢试验均为阴性;PCR扩增后测序得到205bp的1号菌株和203bp的2号菌株,其特性符合大肠杆菌的特性;药敏结果表明,分离株对链霉素和氯霉素高度敏感,对青霉素、阿莫西林和庆大霉素耐药;生长曲线表明,分离株在2～16h时为高度繁殖期,16～32h处于稳定期,32h以后开始进入衰退期;1号菌株与2号菌株同源性高达99%,1号菌株与大肠杆菌11J和RCB800的同源性最高(100%);2号菌株与大肠杆菌675SK2和DTU-1的同源性最高(100%);由系统进化树分析可知,1号菌株与大肠杆菌11J和RCB800处于同一个小分支,2号菌株与大肠杆菌675SK2和DTU-1处于同一个小分支。因此,导致本次驴乳房炎的病原菌为大肠杆菌,本研究结果为进一步系统研究导致驴乳房炎大肠杆菌的致病机制提供参考。     

奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药物敏感试验

为了解2016年春夏季安徽某奶牛场奶牛乳房炎的病原菌及主要致病菌的耐药性情况,采用PCR方法对奶牛场74份乳房炎病牛奶样及30份垫料样品中分离的菌落进行鉴定。结果显示:分离得到4种致病菌,共计147株,其中大肠杆菌108株,金黄色葡萄球菌8株,乳房链球菌29株,停乳链球菌2株;药敏试验显示,青霉素、阿莫西林和庆大霉素对引起该奶牛场的4种病原菌有较好的抑制作用。     

榆林部分地区湖羊乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性和毒力基因检测

【目的】明确规模化湖羊场乳房炎的主要病原菌种类及其耐药性和毒力基因分布情况,指导临床治疗湖羊乳房炎合理用药。【方法】在6个规模化羊场采集临床型乳房炎乳样43份,采用细菌形态学鉴定、生化鉴定及16S rDNA序列分析的方法确定引起湖羊乳房炎的主要病原菌,采用纸片扩散法检测其耐药性,并通过PCR方法检测相关毒力基因。【结果】革兰染色镜检显示获得了革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌。革兰阳性球菌在Baird-Parker琼脂平板上呈现出边缘圆润,中间呈黑色的菌落;生化试验鉴定结果显示,分离株对甘露醇、过氧化氢和兔血浆凝固试验为阳性;经16S rDNA测序比对,与金黄色葡萄球菌高度相似的分离株共31株。革兰阴性杆菌在伊红-美蓝琼脂平板上呈现出黑紫色泛有金属光泽的菌落,在麦康凯琼脂平板上呈现出粉红色的菌落;生化试验鉴定显示,分离株对吲哚试验和甲基红试验为阳性,对VP试验和枸橼酸盐利用试验呈阴性;经16S rDNA测序比对,与大肠杆菌高度相似的分离株共12株。药敏试验结果显示,分离的金黄色葡萄球菌对环丙沙星、左氧氟沙星和头孢噻肟具有较高的敏感性,对青霉素、红霉素和链霉素耐药;分离的大肠杆菌对环丙沙星和左氧...     

河南省临颍县奶牛乳房炎病原菌感染情况调查与药敏分析

为初步分析临颍县奶牛乳房炎致病菌的种类与感染情况,并对其主要病原菌进行药敏分析,本试验对全县部分地区采集患有奶牛乳房炎的乳汁样品73份,分离并鉴定病原菌。结果表明:共分离96株菌株,其中金黄色葡萄球菌、乳房链球菌、棒状杆菌和大肠杆菌的分离比例分别为38.54%、30.21%、17.71%和13.54%。对金黄色葡萄球菌和乳房链球菌分离菌株的药敏试验结果表明:2种菌株对环丙沙星、恩诺沙星敏感,对青霉素和氨苄西林具有较强的耐药性,不同菌株对其他药物耐药程度有较大差异,提示环丙沙星和恩诺沙星可作为该地区奶牛乳房炎治疗的首选药物。     

河南省遂平县奶牛乳房炎致病菌感染情况调查与药敏试验分析

为了初步分析河南省遂平县奶牛乳房炎致病菌种类与感染情况,采集全县部分乡镇患有奶牛乳房炎的乳汁样品73 份进行调查,分离并鉴定病原菌。结果表明,分离的96 株菌株中,金黄色葡萄球菌、乳房链球菌、棒状杆菌和大肠杆菌的分离比例分别为38.54%、30.21%、17.71%和13.54%。对金黄色葡萄球菌和乳房链球菌分离菌株的药敏试验结果表明,2 种菌株对环丙沙星、恩诺沙星敏感,对青霉素和氨苄西林具有较强的耐药性,提示环丙沙星和恩诺沙星可作为该地区奶牛乳房炎治疗的首选药物。     

某奶牛场临床型乳房炎的病原分离及鉴定

从某奶牛场患乳房炎的奶牛乳汁中共分离到 13株细菌 ,经培养特性、菌落形态和生化特性等鉴定表明 ,13个分离菌株中 ,无乳链球菌最为多见 ,占 10株 ;金黄色葡萄球菌 2株及大肠杆菌 1株。将 3种细菌经人工感染小白鼠 ,都具有一定的致病力。药敏试验结果表明 ,氨苄青霉素及丁胺卡那对上述细菌具有较好的抑制作用     

上海地区奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为了获得上海地区奶牛乳房炎病原菌及其药物敏感性的系统资料并为指导临床合理用药和提高奶牛乳房炎防治效果提供理论依据,本研究对在上海郊区4个奶牛场采集的临床型和隐性乳房炎患牛的126份奶样进行细菌培养、分离鉴定和药敏试验.共分离到萄葡球菌,无乳链球菌,大肠杆菌3种主要病原菌107株,其中金黄色葡萄球菌74株,占分离菌株的69.16%;无乳链球菌27株,占分离菌株的25.23%;病原菌单独感染率为48.78%,其中金黄色葡萄球菌的单独感染率达39.02%;病原菌混合感染率占51.22%,多为金黄色葡萄球菌和无乳链球菌混合感染.主要病原菌对头孢拉定、环丙沙星、庆大霉素敏感,对大多数抗菌素产生了不同程度的耐药性,对氨苄青霉素产生了完全耐药性.     

新疆铁门关地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及主要病原菌药敏试验

本试验从新疆铁门关地区采集166份乳房炎患牛的奶样,进行了细菌分离鉴定并对主要病原菌进行药敏试验。结果表明,从奶样中共分离出12种267株细菌,其中主要病原菌为:金黄色葡萄球菌86株,检出率33.6%;大肠杆菌68株,检出率25.5%;停乳链球菌33株,检出率12.4%;无乳链球菌25株,检出率9.4%。临床型乳房炎大部分为混合感染(混合感染的感染率为61.4%),隐性乳房炎大部分为单独感染(单独感染的感染率为88.5%)。选择16种抗生素采用K-B纸片法对分离出的病原菌进行药敏试验,4种主要病原菌对头孢曲松钠、头孢哌酮、克林霉素、氟苯尼考敏感。该试验为本地区奶牛乳房炎的防治提供了理论依据。     

黑龙江西部地区奶牛临床型乳房炎病原菌分离鉴定及耐药性分析

将从黑龙江西部地区部分奶牛场采集的临床型乳房炎奶牛的22份奶样进行细菌培养、分离鉴定和药敏试验。共分离到葡萄球菌,无乳链球菌,大肠杆菌3种主要病原菌56株。金黄色葡萄球菌32株,占分离菌株的57．14％;大肠杆菌15株,占分离菌株的26．79％;无乳链球菌3株,占分离菌株的5．36％,多为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的混合感染。主要病原菌对头孢噻呋、达诺沙星、新霉素敏感,对大多数抗生素产生了不同程度的耐药性,对氨苄青霉素已经产生完全耐药性。     

2013—2014年南宁地区临床型奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定及药敏试验

为了了解南宁周边地区大型养殖场现阶段奶牛乳房炎主要病原菌种类、组成及药敏情况,试验对南宁地区3个大型奶牛场多次采集到的奶样进行病原菌分离鉴定及药敏试验。结果表明:试验分离得到7种共73株细菌,其中包含无乳链球菌12株(16.43%)、停乳链球菌7株(9.58%)、乳房链球菌3株(4.11%)、金黄色葡萄球菌14株(19.17%)、大肠杆菌34株(46.57%)、变形杆菌2株(2.74%)、黏质沙雷杆菌1株(1.37%);分离菌株对青霉素G、氨苄西林、头孢拉定、复方新诺明等抗生素有不同程度的耐药性。说明南宁地区现阶段奶牛乳房炎主要病原菌种类的变化不大,但病原菌组成呈现非典型化,且病原菌对常用广谱抗生素的耐药性呈增强趋势。     

鸭源致病性大肠杆菌耐氟苯尼考floR基因的克隆与序列分析

为调查鸭源致病性大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的存在情况,利用PCR对20株临床分离的耐氟苯尼考的致病性大肠杆菌进行floR分子检测,分子检测结果显示,全部菌株floR基因阳性;对其中2株大肠杆菌的氟苯尼考耐药基因floR进行了克隆和测序,结果表明,鸭源大肠杆菌floR基因片段的克隆测序结果与预期所得片段结果相符,长度为753 bp,2株鸭源大肠杆菌floR基因的同源性为99.6%,与牛源、鸡源等floR基因的同源性为84.8%～99.9%。系统发育分析发现,2株鸭源大肠杆菌floR基因不在同一支上,亲缘关系较远,表明floR基因的亲缘关系与该基因的来源动物无关。     

蠓虫源盖塔病毒(SZC30)结构基因分子生物学特征分析

为了解云南蠓虫源盖塔病毒（GETV） SZC30株分子特征及其与国内外其他媒介和宿主动物中分离病毒的遗传进化关系,本研究采用5对盖塔病毒特异引物对2013年首次在云南省蠓虫中分离的盖塔病毒SZC30株结构基因进行RT-PCR扩增,并对扩增产物进行测序;采用DNAStar软件中SeqMan进行序列拼接,获得SZC30株病毒结构基因序列长3 762 nt,编码衣壳蛋白（C）、E1、E2、E3和6K蛋白,序列长度分别为804、1 317、1 266、192和183 nt,编码蛋白长度分别为268、438、422、64和61个氨基酸。C、E1和E2基因系统进化分析显示,SZC30株与1955-2018年不同地域、宿主分离的27株盖塔病毒分离株形成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ 4个进化分支;SZC30株与中国、韩国和日本蚊虫和动物分离株位于Ⅲ进化分支内,核苷酸同源性最高,在98.0%以上,氨基酸同源性在98.9%以上,亲缘关系较近;而与马来西亚、俄罗斯等蚊虫分离株位于不同进化分支,核苷酸同源性低于97.6%,亲缘关系较远;与马来西亚蚊虫分离株（GenBank登录号：AF339484）、中国海南和云南蚊虫分离株（GenBank登录号：EU015061和KY434327）在C、E1和E2蛋白存在31个氨基酸差异位点,而与日本蚊虫分离株（GenBank登录号：LC152056）、中国猪分离株（GenBank登录号：MG865966和MG865969）氨基酸位点无差异,且同源性为100%。SZC30株与27株盖塔病毒在E1、E2蛋白上存在2个潜在糖基化位点和3个跨膜区;T细胞抗原表位分析结果显示,SZC30株与分离自蚊、猪、狐、牛和马等的盖塔病毒分离株均存在表位差异,其中,E1、E2蛋白发现较多表位差异。以上结果提示,蠓虫源盖塔病毒与大多数蚊虫和动物分离毒株同源性高、遗传进化关系近,且氨基酸位点、糖基化位点、跨膜区结构等分子特征相似,提示蠓虫可能作为一种潜在的传播媒介参与了当地盖塔病毒的传播扩散。     

新疆某牛场大肠杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

为了调查新疆某规模化奶牛场犊牛腹泻的原因并确定病原,无菌采集15份腹泻犊牛粪样进行病原的分离培养,采用形态学观察、生化试验、血清学和致病性分析等方法鉴定分离菌株,利用大肠杆菌16S rRNA通用引物进行基因序列扩增并测序,使用DNAStar软件将分离菌株测序结果与GenBank中的其他菌株序列进行同源性比对,采用Mega 6.0软件依据16S rRNA序列构建分离株系统进化树并进行分析,同时对分离菌株的黏附性基因进行鉴定。结果从15份样品中分离获得2株分离菌株;试验显示,分离株均发酵葡萄糖,MR试验、吲哚和甲基红试验呈阳性,硫化氢、氧化酶、DNA酶、VP试验呈阴性。2株分离菌株血清型均为O78,且均具有致病性。药敏试验显示,分离菌株均对环丙沙星、卡那霉素、氟哌酸、庆大霉素、磺胺甲唑、头孢哌酮、壮观霉素、多黏菌素B、呋喃妥因敏感。分离株16S rRNA基因序列与大肠杆菌菌株NF738(GenBank登录号:MT649856)同源性为≥99.7%,且处于同一大分支。经PCR鉴定,分离菌株具有K88黏附性基因。本研究结果证实了引起新疆某规模化奶牛场犊牛腹泻的病原为致病性产肠毒素型大肠杆菌。     

非典型性型猪瘟病毒云南株的分离鉴定及其E0／E2基因序列分析

从云南10个地州13个大型猪场采集到的17份样品中分离得到5株猪瘟病毒。经测序鉴定昆明、玉溪、曲靖地区分离株的核苷酸序列99．99％同源,大理和宝山地区的核苷酸序列99．99％同源,5株分离毒均属于基因二群。5株分离毒在PK-15细胞上的平均毒价约为2×10^6TCID50／mL,应用荧光抗体染色可以检测到CSFV。通过RT-PCR扩增猪瘟病毒约1200bp和700bp的E2和E0蛋白全部抗原编码区序列,并将其分别克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,5株分离株的E0和E2基因片段为697bp和1173bp,与猪瘟病毒Shimen株的核苷酸同源性仅为95．4％和96．6％、82．5g和84．3％,与C-株的核苷酸同源性分别为94．1％和95．2％、83．3％和85．4％。动物试验结果表明,分离的2株猪瘟野毒不能引起典型的猪瘟症状,但是能持续带毒。     

多重PCR快速检测奶牛乳房炎3种主要病原体

奶牛乳房炎是引起奶牛业经济损失的一种重要疫病,目前还没有快速、特异检测奶牛乳房炎主要致病原的方法。本试验根据金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌各自保守的16S或23S rRNA基因序列,合成了3对特异性引物,建立了三重PCR检测方法。特异性试验表明,该方法对所有参与测试的金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌都能扩增出各自的阳性条带,而对所有参与测试的对照菌株则不能扩增出任何条带。敏感性试验表明该方法能检测到4个菌的金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和2个菌的大肠杆菌。对送检的乳房炎奶样36份直接进行PCR检测,金黄色葡萄球菌阳性7份,无乳链球菌阳性2份,大肠杆菌阳性6份。     

Identification of Escherichia coli recovered from milk of sows with coliform mastitis by random amplified polymorphic DNA (RAPD) using standardized reagents

A standardized-reagents commercial kit for random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis was used for typing 58 Escherichia coli strains that were recovered from the milk of sows, having coliform mastitis, within a single swineherd in Sweden. Previously, the 58 E. coli strains were characterized serologically and profiled biochemically. They were also evaluated for their serum resistance and their ability to adhere to fibronectin and bovine fetal fibroblasts. The RAPD analysis was fast, easily performed, and required only a nanogram of DNA. The indistinguishable banding patterns obtained with repeated analyses of 2 isolates from each strain demonstrated that RAPD analysis using standardized beads is a technique that provides reproducible results for typing E. coli strains that cause mastitis in sows. The results of the RAPD analyses demonstrated that E. coli sow mastitis strains are highly variable in serotype, biochemical profiles, virulence factors, and RAPD type, and that all 58 strains can be differentiated by means of the RAPD technique. The strains grouped into 24 RAPD types by combining the results of 2 primers, and into 38 groups by combining the results of serotype and RAPD type. No relationship between serotypes, virulence factors and RAPD types was found.     

Characterization of Escherichia coli isolates from peritonitis lesions in commercial laying hens

Five clinically normal chickens from three farms (farm A, farm B, and farm C), for a total of 15 clinically normal chickens, were examined bacteriologically. In a similar manner, five dead chickens with lesions of peritonitis from each of the same three commercial egg-laying operations were selected for bacterial culturing. Escherichia coli were isolated from the cloaca in 14 of 15 healthy chickens and from all 15 chickens with peritonitis. Oviducts of normal chickens did not contain E. coli (0/15) whereas oviducts from 13 of 15 hens with peritonitis were positive for this pathogen. No lesions and no E. coli (0/15) were found in the peritoneal cavity of healthy hens, but peritonitis lesions from 13 of 15 dead chickens yielded E. coli. On farm A and farm B, a flock consisted of all chickens within a single house and all chickens in each flock were of the same age and same genetic strain. In flock 1 from farm A, all five E. coli isolates from the oviduct and all five isolates from the peritoneal cavity were serogrouped as O78; contained the virulence genes iroN, sitA, iutA, tsh, and iss; and belonged to phylogenetic group A. In flock 2 from farm B, all four E. coli isolates from the oviduct and all four isolates from the peritoneal cavity were serogrouped as O111; contained virulence genes iroN, sitA, iutA, traT, iss, and ompT; and belonged to phylogenetic group D. These data suggest that all chickens with peritonitis in a single flock on farms A and B were likely infected by the same E. coli strain. Escherichia coli isolates from the magnum and peritoneum had the same serogroup, virulence genotype, and phylogenetic group, which is consistent with an ascending infection from the oviduct to the peritoneal cavity.     

豫陕两省14株鸡杆菌的gyrB、16S rRNA和rpoB基因序列比较分析

分析河南、陕西分离的14株鸡杆菌(Gallibacterium)之间的进化关系,及gyrB基因序列比较在该菌进化分析中的作用。PCR扩增鸡杆菌分离株的gyrB、16SrRNA和rpoB3个看家基因,PCR产物纯化后直接测序。将鸡杆菌分离株、国外参考株的3个看家基因序列进行比较分析,用Phylip 3.67软件构建进化树。结果表明,14株鸡杆菌与鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)模式株间的相似性为96.3%～98.0%(gyrB)、97.7%～99.6%(16SrRNA)和97.7%～99.0%(rpoB);14株鸡杆菌与鸡杆菌复合群1(Gallibacterium genomosp.1)参考株间的相似性为88.8%～89.9%(gyrB)、96.2%～97.5%(16SrRNA)和92.6%～93.6%(rpoB)。基于3个看家基因序列的进化分析,均显示14株鸡杆菌和鸭源鸡杆菌模式株形成单独的一个群。14株鸡杆菌分离株均属于鸭源鸡杆菌种;在3个看家基因位点,鸡杆菌河南株与陕西株之间、鸡杆菌输卵管炎病鸡分离株与健康鸡分离株之间均无明显遗传上的差异;gyrB基因序列分析可用于鸡杆菌分离株的种类鉴定,且对14株鸡杆菌与复合群1参考株的区别能力优于另外2个看家基因。     

Phylogenetic background, virulence gene profiles, and genomic diversity in commensal Escherichia coli isolated from ten mammal species living in one zoo

Three hundred commensal Escherichia coli recovered from healthy herbivorous, carnivorous, and omnivorous mammals from one zoo were characterized for their phylogenetic origin, intestinal virulence gene (VG) prevalence, and genomic diversity. The phylogenetic structure of the E. coli (groups A, B1, B2, and D) from the herbivores was homogenous, with a prevailing representation of group B1. In the carnivores and omnivores, the phylogenetic diversity was species specific with a higher representation of group A compared to the herbivores. Of 16 intestinal VGs in the whole set, 8 were detected and they formed 13 VG profiles. In the herbivores, all the VG-positive isolates belonged to group B1 and harboured the genes eaeA, eastI, ehxA, stx1, and stx2, which separately or in combination formed 8 VG profiles. In the carnivores and omnivores, the VG-positive isolates frequently belonged to group A and harboured the estI and estII genes or a combination of eastI and estI, forming three VG profiles. Single genes cnf2, in group B2, and eastI, in group D, were found. Similarity analysis of pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) patterns revealed closer relatedness between the isolates from carnivores and omnivores than those from herbivores. The comparison between the prevalence of phylogenetic groups and the phylogenetic origin of VG-positive isolates in the examined E. coli suggested, that E. coli from group B1 in herbivores and E. coli from group A rather than B1 in carnivores and omnivores are "best adapted" to the host organism. The groups revealed different preferences in the acquisition and maintenance of intestinal VGs.     

利福昔明对奶牛乳房炎常见病原菌的体外抗菌活性试验

旨在测定利福昔明对奶牛乳房炎常见病原菌的体外抗菌活性。采用琼脂二倍稀释法测定利福昔明对奶牛乳房炎常见病原菌大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果显示,利福昔明对19株大肠杆菌的MIC值为8~16μg/m L,对25株葡萄球菌的MIC值为0.002~0.06μg/m L,对18株链球菌的MIC值为0.06~2μg/m L。大部分临床分离菌的MIC值与标准菌的相近,表明分离菌株对利福昔明较为敏感,提示利福昔明对奶牛乳房炎常见病原菌具有较强的体外抗菌活性。