噬菌体展示三肽囊素模拟肽的研究

本研究分离纯化抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2),利用噬菌体环7肽库筛选抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)结合肽,测定阳性克隆ssDNA序列,并与Bursin序列进行同源性分析,通过ELISA法检测其结合活性和竞争ELISA法检测其抗原性,以Busin为对照,验证阳性克隆(№4)在鸡体内的生物学效应.序列分析表明,"LNXT"短肽序列可能为结合抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的保守序列,但与Bursin无同源性;噬菌体(№1)在序列中含有K、H、G.ELISA和竞争ELISA检测,表明Bursin对阳性克隆1、4、5、6号和抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的结合有一定的抑制作用:生物学活性初步验证表明,阳性克隆(№4)与Bursin具有类似作用,能促进抗体产生,有望成为一种模拟Bursin新型的免疫增强剂.     

合成囊素三肽对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为验证囊素三肽对猪瘟疫苗的免疫增强作用,通过3个剂量、2种与疫苗配伍方式进行细胞源和脾淋源猪瘟疫苗的猪体免疫试验.于免疫后14d、28d和42d采血,测定猪瘟抗体阳转率.结果表明,囊素三肽可以显著提高猪瘟疫苗(细胞源或和脾淋源)的免疫应答效果.推荐使用剂量为100μ g/头份,肌肉注射,安全无毒.     

M2e合成肽流感通用疫苗的研究

M2蛋白是甲型流感病毒的跨膜蛋白,其优点为不易变异,且N端24个氨基酸组成的胞外区(M2e)十分保守,适合作为通用流感疫苗的靶标.因此本实验将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽(M2e-MAP),添加弗氏佐剂制备成合成肽疫苗免疫小鼠,评价其免疫原性及异源攻毒保护效力.ELISA实验结果表明,该疫苗能刺激机体产生高水平的抗M2e特异性IgG抗体；细胞因子IL-4的检测进一步说明了其能诱导产生高的体液免疫应答水平,ELISPOT实验从IL-4和IFN-γ两个方面分别说明了该疫苗不仅可以诱导高的体液免疫应答,而且能刺激机体产生高水平的细胞免疫应答.对免疫小鼠攻H9N2,通过肺病毒分离滴定和肺组织病理切片等方法检测攻毒保护效果,结果均表明,M2e分支肽疫苗能对异源病毒的攻击产生较好的保护效力.上述结果为流感通用疫苗的研究提供了一种参考思路.     

几种新型佐剂的研究近况及存在问题

佐剂(Adjuvant)又称免疫调节剂(Immunomodulator)或免疫增强剂(Immunopotentiator),是指先于抗原或与抗原混合或同时注入动物体内,能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答,发挥辅助作用的一类物质。随着亚单位疫苗、重组疫苗、合成肽疫苗等弱免疫原性疫苗的开发研究,原有的免     

MTT法评价猪口蹄疫合成肽疫苗的细胞免疫应答

为评价猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪后的细胞免疫应答,用含有E、F两种多肽抗原的猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪,二免后两周采血分离猪外周血淋巴细胞,再用E、F两种合成肽及二者混合物对淋巴细胞刺激培养48 h,用MTT法检测特异性T淋巴细胞增殖反应。结果显示,在抗原E、F混合物浓度为50μg/mL时,抗原对免疫组淋巴结细胞的刺激增殖作用显著高于未免疫对照组（P〈0.01）。表明,该猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪能有效引起特异性T淋巴细胞免疫应答。     

猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测

为了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,选用了两个厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗,对80头试验仔猪进行了免疫注射,并在6、7、8、9、11、13、20周龄采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体;疫苗的免疫副作用小;使用VP1ELISA和LPB-ELISA检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好。     

三肽囊素和环磷酰胺对鸡免疫器官发育与组织结构的影响

目前，尽管在养禽生产中对许多疾病采用相应的疫苗进行预防，由于病原种类极其复杂，而且不断产生变异，使疫苗的研制往往滞后于疫病的发生，单纯依赖疫苗不能解决疫病的防制问题。解决家禽疫病防制问题应从提高家禽的内在免疫机能人手，通过增强其自身的抗病能力，达到预防疫病的目的。三肽囊素(Bursin，Bs)是AudhyaT等11986年利用层析技术首次从鸡法氏囊(BF)中提纯的一种序列为Lys-His-Gly-NH2的三肽，     

禽法氏囊三肽囊素免疫生物学及其同功能单链抗体研究进展

法氏囊（BF）是禽类特有的免疫器官，为B细胞发育、成熟提供微环境，是免疫球蛋白基因转变场所；其免疫活性物质为三肽囊素（Bursin)；它不仅分布于BF，还存在于胸腺Hassall小体、哈德氏腺、脾脏、BF T细胞区及骨髓；它能诱导家禽和哺乳动物B细胞前体分化；其靶器官是BF，能够拮抗IBD疫苗对BF的损伤，提高ND弱毒疫苗及油苗产生抗体水平；人工合成Bursin作用的靶器官也是BF，可促进BF发育、抗体的产生、维持母源抗体作用。     

传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫功能研究

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,本研究根据已发表的鸡源补体C3d序列,设计并合成在5’端添加编码连接肽(Gly4Ser)2序列的C3d基因。用同尾酶BglⅡ和BamHⅠ构建含有3拷贝C3d与VP2基因融合的重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d。用脂质体法转染BHK21细胞,48 h后,westernblot分析表明,表达的重组蛋白为162 ku;间接免疫荧光试验检测转染细胞中具有特异性荧光。用pcDNA-VP2-3C3d与前期构建的pcDNA-VP2分别免疫2周龄SPF鸡,二免14 d后,间接ELISA法检测IBDV抗体效价,pcDNA-VP2-3C3d组抗体水平显著高于pcDNA-VP2组;MTT法检测鸡脾淋巴细胞增殖活性,pcDNA-VP2-3C3d组免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性显著高于pcDNA-VP2组(p<0.05)。本研究表明C3d可以增强VP2基因免疫诱导的IBDV特异性体液和细胞免疫应答。     

小肽对刺参免疫酶活性及抗病力的影响

本文研究了注射不同剂量的小肽对刺参体腔液中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及抗病力的影响。各试验组(0.2 mg组、0.4 mg组、0.6 mg组)分别注射浓度为0.4、0.8、1.2 mg/mL的小肽溶液500μL/只,对照组注射等体积无菌过滤海水。在注射后第2、4和7天,检测刺参体内ACP、AKP和SOD活性。结果表明,试验组刺参体腔液中ACP(0.4 mg组)、AKP(0.4 mg组)活性及SOD(0.6 mg组)活性分别在第4、4、7天达到最高值,与对照组相比差异均显著(P<0.05),分别为对照组的2.6、2.3、1.9倍。攻毒试验结果证实,各试验组均产生了一定的免疫保护率,0.4 mg组最大,达33.3%。结果提示,小肽作为饲料添加剂能够提高刺参的非特异性免疫水平,且注射量为0.4 mg效果最好。     

山羊IFN-γ免疫血清制备及抗体ELISA检测方法的建立

为制备山羊干扰素-γ(IFN-γ)免疫血清并建立山羊IFN-γ抗体ELISA检测方法 ,以原核表达的山羊γIFN重组蛋白(rIFN-γ)为材料,免疫小鼠制备免疫血清;通过对测定不同的抗原包被浓度及包被时间,酶标抗体稀释度,免疫血清的孵育时间等条件的优化建立检测抗体效价的ELISA检测方法,并采用建立的方法测定免疫血清的抗体效价。结果显示,rIFN-γ抗原包被浓度为10μg/mL,4℃包被12h;酶标抗体稀释度为1∶5 000;免疫血清孵育时间为60min,可以得到最佳ELISA的检测结果。重复试验显示该方法变异系数(CV)在1.5%~5%之间。采用建立的方法测得免疫小鼠免疫血清效价为107。该ELISA检测方法灵敏高,稳定性好,为山羊IFN-γ抗体检测提供了技术支持。     

H5N1亚型禽流感疫苗对供港鸡免疫效果评价

针对供港活鸡饲养周期长(85日龄～105日龄),禽流感抗体滴度要求高(21/28检测样品抗体滴度需≥4 log2)的特点,在原有H5N2疫苗对供港活禽免疫效果不理想的情况下,对哈尔滨兽医研究所研制的H5N1亚型禽流感疫苗进行了免疫效果评估.结果显示,H5N1疫苗免疫效果明显高于原有的H5N2疫苗,初步推荐该禽流感灭活疫苗对供港鸡场的免疫程序为:首免7日龄～10日龄,0.3 mL/只,皮下注射;二免45日龄,0.5 mL/只,肌肉注射.     

三肽囊素对环磷酰胺诱导的鸡红细胞免疫功能低下的阻断作用

本文研究了三肽囊素对环磷酰胺诱导的墟岗黄鸡红细胞免疫功能的抑制模型的影响。180只一日龄墟岗黄母鸡随机分成对照组,三肽囊素组,三肽囊素 环磷酰胺组,环磷酰胺组四个组,三肽囊素组和环磷酰胺 三肽囊素组每只鸡肌注0.01mg/kg剂量的三肽囊素;环磷酰胺组和环磷酰胺 三肽囊素组每只鸡肌注40mg/kg剂量的环磷酰胺,对照组鸡注射等量的生理盐水。结果表明,14日龄和35日龄时各试验组鸡的红细胞总数没有显著差异,而在56日龄时,环磷酰胺组显著低于其它三组(P<0.05);从14日龄开始,环磷酰胺纽的RBC-C3bR花环率显著低于其它三组,而环磷酰胺组的RBC-IC花环率显著高于其它三组,并持续到实验结束。结果提示,三肽囊素可阻断由环磷酰胺诱导的鸡红细胞免疫功能低下。     

山羊免疫弓形虫代谢分泌抗原后的免疫应答

将山羊随机分为6组，即E／SA纽、E／SA＋cpG组（未乳化）、E／SA＋CpG组、E／SA＋IL-2组、E／SA＋IL-2＋CpG组、对照组，每组3只，分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集山羊外周全血及涂血片，IHA法检测抗体滴度的动态变化；ELISA法检测IFN-γ、TNF—a、IL-2、IL-4的表达水平；ANAE染色法检测T淋巴细胞的动态变化。结果显示，免疫后各免疫组的IFN-γ、TNF-a、IL-2、IL-4及T淋巴细胞水平显著高于对照组（P〈0．05），各免疫组的抗体水平均高于对照组。结果表明，E／SA可引起IFN—γ、TNF—a、IL-2、IL-4、T淋巴细胞及抗体水平的升高，说明E／SA免疫后可引起山羊较强的细胞免疫和体液免疫应答。     

不同感染量REV对鸡免疫反应和细胞毒性作用的影响

用不同剂量网状内皮增生症病毒（REV）感染肉鸡和SPF鸡后，检测血液中T淋巴细胞对ConA的反应和NK细胞、细胞毒T细胞（CTL）的细胞毒性作用以及NDV抗体生成变化等，观察REV感染对机体非特异性、特异性细胞免疫反应和体液免疫反应的影响。结果表明无论高剂量还是低剂量REV感染均造成体液免疫和非特异性细胞免疫抑制，而且高剂量比低剂量对免疫功能的抑制作用更强，但对NK细胞和细胞毒T细胞的细胞杀伤活性却有升高趋势，在抗肿瘤方面发挥一定的作用。这种结果说明REV感染对机体的免疫抑制是有选择性的，且抑制程度与感染病毒量有关。     

猪瘟疫苗在猪圆环病毒2型阳性猪场的免疫效果观察

为了研究猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪瘟疫苗免疫效力的影响,对PCR证实为PCV-2阳性的试验猪进行猪瘟疫苗的免疫,分别在免疫后第1、3、7、14、21、28和63天对试验猪进行猪瘟病毒(CSFV)和PCV-2的抗体检测。检测结果表明PCV-2阳性猪在猪瘟疫苗免疫后均未能产生有效的CSFV抗体,从免疫猪的血液和内脏组织中也未能检测到CSFV核酸。虽然只能从1头PCV-2阳性猪的血清中检测到PCV-2抗体,但是却能从全部实验猪的淋巴结中检测到PCV-2的核酸。试验猪的病理组织学观察和白细胞计数也表明PCV-2阳性猪的淋巴结呈典型的PCV-2感染的病理变化,且白细胞数量显著低于健康猪。表明PCV-2的感染会对猪的免疫系统造成损害从而抑制猪瘟疫苗的免疫效果。     

猪圆环病毒2型感染对伪狂犬疫苗免疫应答的影响

为明确PCV2感染对伪狂犬(PR)疫苗免疫应答的影响,本研究采用阻断ELISA方法对单独接种猪PR疫苗组(A组)及PCV2人工感染3周后接种猪PR疫苗组(PA组)不同时相血清中的猪PR病毒gB抗体进行检测;同时对不同时相前腔静脉血进行CD4+/CD8+流式细胞术及血常规分析。结果表明,在PCV2感染后2周至5周间,A组白细胞含量均高于PA组,随后PA组白细胞恢复至与A组略高的正常水平;在整个实验中,除接种猪PR疫苗后1周(WPI)和9周(WPI)外的所有时相PA组的淋巴细胞含量均略高于A组;PCV2感染后可使记忆/激活Th细胞数量略有升高,幼稚型Th细胞含量的下降;PCV2感染后2周～7周PA组Tc细胞均高于A组,在9WPIPA组Tc细胞数量显著下降(p0.05);除9WPI外,A组的S/N值均低于PA组。结果表明,PCV2感染看降低机体产生针对PRVgB特异性抗体水平,而且在一定程度上降低了幼稚型Th细胞及Tc细胞含量。     

猪瘟活疫苗与口蹄疫灭活疫苗同期与分期免疫效果对比试验

本试验采用单因子试验设计方法,将2窝同期出生的18头仔猪,随机分为试验组和对照组。试验组8头仔猪分别于35、65日龄进行2轮次猪瘟活疫苗和口蹄疫灭活疫苗同期免疫;对照组10头仔猪分别于25、35、55、65日龄进行相同疫苗的分期免疫。通过所有供试猪免疫后进行临床跟踪观察,并于免疫前的23日龄、免疫后的55、95日龄分别检测免疫抗体水平（应用国家规定的ELISA检测方法）。试验结果表明,两种免疫方法免疫后7 d内均未观察明显的应激反应,试验组与对照组两种疫苗的免疫抗体合格率差异均不显著。     

牛IL-2重组质粒对口蹄疫病毒G-H环多肽免疫小鼠的佐剂效应

本试验目的是研究牛IL-2重组质粒对口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)G-H环多肽免疫小鼠的佐剂效应.作者构建了含有信号肽序列的牛IL-2真核表达质粒pcDNA3.1-pBoIL-2,并体外鉴定其表达,同时原核表达并纯化了Asial型FMDV G-H环多肽.采用不同组合的pcDNA3.1-pBoIL-2、FMDV G-H环多肽分组免疫小鼠,并设阴、阳性对照,通过间接ELISA试验、微量血清中和试验、淋巴细胞增殖试验和实时定量PCR试验对各免疫组小鼠体液和细胞免疫水平进行综合评价.结果表明,与G-H+pcDNA3.1免疫组比较,G-H+pcD-NA3.1-pBoIL-2免疫组特异性抗体水平、中和抗体滴度、淋巴细胞增殖水平和细胞因子相对表达水平显著提高(P<0.05).结果提示,牛IL-2真核表达质粒可以显著提高G-H环多肽的免疫效果.     

泰山松花粉多糖和乳酸杆菌对禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗免疫增强的协同作用

采用改进的水提醇沉法提取泰山松花粉粗多糖,并制备禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗。取1日龄SPF雏鸡300只,随机分为6组,I～V组分别免疫含有松花粉多糖100g／I。的禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗,Ⅵ组只免疫禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗,I、Ⅱ组在前2周分别口服高、低剂量的乳酸杆菌活菌菌液1mL,HI、IV分别口服高、低剂量的乳酸杆菌热灭活菌菌液1mL。在首免后,每周采取血液和小肠,用间接ELISA法检测血清抗体水平、MTT法检测外周血淋巴细胞转化率、全自动血细胞分析仪测定外周血淋巴细胞比率、ELISA法检测小肠sIgA含量和IL-2水平。结果表明,I～Ⅳ组抗体水平、IL一2含量、淋巴细胞比率、淋巴细胞转化率、sIgA含量显著高于V组、Ⅵ组（P％0．05）;V组各检测指标显著高于Ⅵ组（P〈O．05）;乳酸杆菌活菌组各检测指标比灭活菌组略高,高剂量组略高于低剂量组。因此,泰山松花粉多糖作为免疫佐剂能显著提高疫苗的免疫效果,同时1：3服乳酸杆菌能进一步增强动物对疫苗的免疫应答能力,口服乳酸杆菌活菌与口服热灭活菌效果差异不显著,泰山松花粉多糖和乳酸杆菌对增强禽波氏杆菌OMP疫苗的免疫力有协同作用。