多头带绦虫Tm16与Tm18抗原基因的克隆及原核表达

为原核表达Tml6和Tm18重组蛋白,本研究以自然感染羊源脑多头坳原头节基因组DNA为模板分别扩增Tml6和Tm 18杭原基因全基因片段,测序鉴定后合成其开放阅读框架DNA片段,将基因组序列中的内含子去除并对其稀有密码子进行改造优化,构建重组表达质粒pGEX-Tm 16和pGEX-Tml8.转化大肠杆菌BL21后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物并进行纯化.结果显示:在大肠杆菌中表达出带有GST标签的大小约为39.6 ku和39.4 ku的重组蛋白,经谷胱甘肤琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性的GST-Tm 16及GST-Tml8重组蛋白,western blot分析表明重组蛋白均能够被兔抗GST单克隆杭体特异性识别.     

多头带绦虫甘肃分离株线粒体NADH脱氢酶亚基Ⅰ基因片段差异分析

应用线粒体DNA中的NADH脱氢酶亚基Ⅰ(ND1)基因作为分子标记,对我国甘肃省景泰和平凉地区10个绵羊源脑多头蚴进行分析,构建系统进化树,分析其种内变异.结果表明,所有多头带绦虫(T.multiceps)分离株均成功扩增出约0.5kb的ND1基因片段.序列分析显示,去除引物序列后多头带绦虫的ND1基因片段长为488bp,可以分为9类,共有22个核苷酸变异位点,变异率为0.20%～2.66%.基于ND1序列的系统进化树表明所有T.multiceps分离株构成1个分支,可分为3个亚群,国内分离株分别处在不同的亚群中.国内分离株中除了与已知的遗传变异型Tm1(AY669089/Tm-JT081204/Tm-JT090331)和Tm3(DQ077820/Tm-JT080526)相同外,还存 在新的遗传变异型(Tm-JT081008/Tm-JT090603/Tm-JT090115-2),独立为一支,与其他分离株亲缘关系较远;表明ND1基因片段适合作为研究T.multiceps分离株种内变异的分子标记.     

微小牛蜱Bm86基因的克隆及真核表达载体的构建

为了克隆微小牛蜱Bm86基因及构建该基因的表达载体，以微小牛蜱饥饿幼蜱的破解物提取的总RNA为模板，参照已发表的微小牛蜱Bm86基因的核苷酸序列，设计了1对引物，采用RT—PCR技术获得微小牛蜱Bm86基因；将Bm86基因克隆入载体，并进行序列分析，结果证明，克隆的Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因序列的同源性达97．4％，而且该序列包含完整的开放阅读框。将该基因克隆入真核表达载体pPIC9K，构建并获得了重组真核表达载体pPIC9K—Bm86。     

脑多头蚴病研究进展

脑多头蚴病是由多头带绦虫的中绦期幼虫脑多头蚴寄生于绵羊、山羊、黄牛、牦牛等有蹄动物的脑及脊髓中引起的一种人兽共患寄生虫病,人可因误食虫卵而感染此病。该病在宿主出现典型临床症状后如果得不到治疗,多以死亡为转归,给畜牧业生产造成了巨大的经济损失。论文就脑多头蚴病的病原学、生活史、流行病学、临床症状、诊断、治疗及免疫预防等方面的研究进展进行了综述。     

横断山区小檗属15种植物种子的萌发特性研究

在实验室条件下,探索了小檗属种子的适宜萌发条件,并研究了该属15种植物种子的萌发特性.结果显示,在黑暗、70％湿度的智能人工气候箱中,在20℃(12 h)/25℃(12 h)变温条件下,在主要以医用纱布为介质的培养皿中,11种植物种子的萌发时滞为6～16d,平均为(11.36±4.13)d;萌发持续时间为8～76 d,平均为(29.45±20.27)d;萌发率为53％～99％,平均为(81.00±17.61)％.而在25℃恒温条件下,5种植物种子的萌发时滞为7～22 d,平均为(14.00±5.69)d;萌发持续时间为21～46 d,平均为(31.33±10.19)d;萌发率为34％～94％,平均为(69.50±22.71)％.有关研究结果为小檗属野生植物种子的育苗工作提供了简单易行的方法.     

微小牛蜱Bm86基因的真核表达

采用RT-PCR技术从微小牛蜱饥饿幼蜱破解物中扩增到Bm86基因，将其与巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPlC9K重组构建了重组表达载体pPIC9K-Bm86，测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化后采用电穿孔法转化巴斯德毕赤酵母菌Gs115，经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达，SDSPAGE和Western-blotting分析结果表明，诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的68ku重组Bm86蛋白，目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的32％以上，诱导96h目的蛋白的表达量为0．36mg／mL。