鸡肠炎沙门氏菌ompA基因的克隆与表达

根据GenBank中鸡肠炎沙门氏菌ompA基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌贵州分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌ompA基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-ompA,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞, 经IPTG诱导, 实现了鸡肠炎沙门氏菌ompA蛋白在大肠杆菌中的表达。SDS-PAGE分析结果表明, 该重组蛋白的分子质量约为55 ku,可溶性分析结果表明表达蛋白大部分以包涵体形式存在。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白具备免疫原性。     

鸡肠炎沙门氏菌外膜蛋白F的原核表达及免疫原性分析

根据GenBank中收录的鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌辽宁分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因,用IEDB Analysis Resource在线预测分析,该基因可能存在15个线性B细胞抗原表位;同时将该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-OmpF,转入大肠杆菌BL21中,获得OmpF重组蛋白。Western-blot检测结果表明,该重组蛋白的分子质量约为66 kD(含标签蛋白),能被鸡沙门氏菌阳性血清识别,初步证实该蛋白具有免疫原性,为鸡肠炎沙门氏菌亚单位疫苗的进一步研究和开发奠定了理论基础。     

我国鸡源沙门氏菌的血清型分布和对黏菌素耐药性的研究

黏菌素是目前临床治疗多重耐药革兰阴性菌感染的重要药物之一,mcr-1基因的携带可介导黏菌素耐药性的产生和扩散。鸡源沙门氏菌作为重要的食源性病原菌,其血清型分布、对黏菌素的耐药性及mcr-1基因的携带对于公共卫生安全具有重要意义。研究对2014-2016年从全国12个省份成鸡分离的450株沙门氏菌进行了血清分型;用微量肉汤稀释法进行了对黏菌素的MIC检测;并用PCR方法对mcr-1基因的携带情况进行了调查。结果表明,鸡源沙门氏菌的优势血清型以肠炎、鸡白痢和鼠伤寒为主;肠炎沙门氏菌对黏菌素的耐药性最强(62.9%),其次为鸡白痢(50.5%)和杜伊斯堡(38.1%);鼠伤寒沙门氏菌对黏菌素最敏感(仅7.1%的菌株耐药);未检测出mcr-1基因阳性的沙门氏菌。研究结果为鸡源沙门氏菌感染的防控以及兽医临床黏菌素的使用和风险评估提供了技术参考。     

沙门氏菌感染后鸡血液中核苷酸结合寡聚化结构域1基因的表达量变化分析

为了探讨核苷酸结合寡聚化结构域1(nucleotide-binding oligomerization domain containing 1,NOD1)在抗沙门氏菌感染过程中的作用,本试验采用实时荧光定量PCR的方法检测了血液中NOD1基因在转录水平的表达量变化.试验分为3组,鸡白痢沙门氏菌组、肠炎沙门氏菌组和对照组,分别在感染后1、3、5、7 d检测NOD1 mRNA的表达水平.结果显示,感染后的1~7 d,鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染后的表达量变化趋势不同,其中,鸡白痢沙门氏菌感染后表达量呈先上升再下降然后再上升的波浪形变化,而肠炎沙门氏菌感染后的表达量呈逐渐上升趋势.与对照组相比,血液中NOD1 mRNA的水平,在鸡白痢沙门氏菌感染后的3和7 d的表达量显著高于对照组(P <0.05),在肠炎沙门氏菌感染后的5、7 d的表达量显著高于对照组(P <0.05).提示,鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染后均可促进鸡血液中NOD1基因的表达,NOD1基因可能参与了机体抗沙门氏菌感染过程.     

柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋和感染肠炎沙门氏菌敏感性的影响

为揭示球虫感染对蛋鸡的肠炎沙门氏菌敏感性及鸡蛋的肠炎沙门氏菌污染率的影响而进行了本研究。结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋及感染肠炎沙门氏菌的敏感性均具有增强作用。具体表现为：柔嫩艾美耳球虫感染可使肠炎沙门氏菌污染蛋壳显著增多（Ｐ＜０．０５）;球虫感染鸡所产蛋,无论是新鲜的还是贮存１周后的,其蛋内容物的肠炎沙门氏菌阳性率比仅感染肠炎沙门氏菌鸡所产蛋要高;球虫感染鸡盲肠中的沙门氏菌阳性率和沙门氏菌数显著增加（Ｐ＜０．０１）;球虫感染鸡输卵管中的肠炎沙门氏菌也有增多;球虫感染使泄殖腔拭子的肠炎沙门氏菌阳性率增加。研究结果表明,柔嫩艾美耳球虫感染可以增加鸡群中肠炎沙门氏菌的水平及其垂直传播的危险。     

鸡白痢沙门氏菌与其它致病性沙门氏菌的血清型特异性PCR鉴别检测方法的建立

为建立鸡白痢沙门氏菌与其他常见致病性沙门氏菌的血清型特异性快速PCR检测方法,本研究通过对Gen Bank中鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌全基因组进行生物信息学分析,确定SEEP17495基因为鸡白痢沙门氏菌的检测靶基因,设计特异性引物,建立了一种能够直接从粪便样品中检测鸡白痢沙门氏菌的PCR检测方法。结果显示:该方法对于两株鸡白痢沙门氏菌均可以特异性地扩增出356 bp的目的片段,但对于7株常见非沙门氏菌致病菌和29株其他常见致病性沙门氏菌血清型的扩增结果均为阴性。该方法无论检测鸡白痢沙门氏菌纯培养菌,还是检测模拟鸡粪样品中的鸡白痢沙门氏菌,检测的灵敏度均为103cfu/m L。本研究建立的PCR检测方法具有良好的特异性和灵敏性,并且能够快速检测出粪便样品中的鸡白痢沙门氏菌,为鸡白痢沙门氏菌的检测提供了一种快速、有效的方法。     

柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋和感染肠炎 …

为揭示球虫感染对蛋鸡的肠炎沙门氏菌敏感性及蛋鸡的肠炎沙门锚菌污染率的影响而进行了本研究。结果显示：柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染及感染肠炎沙门氏菌的敏感性均具有增强作用，具体表现为，柔嫩艾美耳球虫感染可使肠炎沙门氏菌污染蛋壳显著增多；球虫感染鸡所产蛋，无论是新鲜的还是贮存１周后的，其蛋内容物的肠炎沙门氏菌阳性率比仅感染肠炎沙门锚菌鸡所产蛋要高；球虫感染鸡盲肠中的沙门氏菌阳性率和沙门氏     

双重PCR检测肠炎沙门氏菌方法的建立

沙门氏菌是引起人类食物中毒事件的主要病原之一,其中,肠炎沙门氏菌因其可感染家禽、污染禽蛋而受到广泛关注。本试验根据沙门氏菌属特异性基因片段fimY和肠炎沙门氏菌特异性基因片段sdfI分别设计一对引物,对25株沙门氏菌和大肠杆菌进行双重PCR扩增,结果显示22株沙门氏菌均出现与理论值大小497bp相符的属特异性条带,作为对照的3株大肠杆菌则未显示该条带,并且7株肠炎沙门氏菌均出现与理论值大小293bp相符的特异性条带。另外,敏感性试验结果显示肠炎沙门氏菌50336和鸡白痢沙门氏菌SP1的模板浓度分别为18ng和15ng时仍能清晰扩增出特异性条带。上述结果表明建立的PCR方法具有快速简便、灵敏性高、特异性强等特点,为公共卫生、食品安全、畜牧兽医及出入境安检等多部门检测和监测沙门氏菌提供了前提基础和技术保障。     

四环素耐药基因在鸡源沙门氏菌中的分布和传播

试验分析了84株鸡源沙门氏菌分离株的四环素耐药性,用PCR方法检测四环素耐药基因在分离株中的分布情况。结果显示,四环素耐药率为49%(41/84),鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌仅携带tet(A)基因(23/23),肠炎沙门氏菌和德尔卑沙门氏菌携带tet(A)(8/18)、tet(B)(17/18)或tet(G)(10/18)三种基因,tetC基因在这些沙门氏菌中都没有检测到。该类基因多数位于结合性质粒上,但是不在整合子范围内。     

鸡肠炎沙门氏菌感染

鸡肠炎沙门氏菌感染是一种近几年才被人们重视的疾病。肠炎沙门氏菌（SE）不仅能引起鸡发病死亡造成严重的经济损失,而且感染鸡的产品作为肠炎沙门氏菌的携带者,还严重危害着人类健康[1]。目前,在沙门氏菌属中肠炎沙门氏菌是引起家禽发病和人食物中毒的最常见血清型之一。人类食物中毒中40％的病例是由沙门氏菌所致。在美国及欧洲一些国家,近年来人和鸡感染肠炎沙门氏菌的数量明显增多,且病原主要是噬菌体4型肠炎沙门氏菌[2,3]。要降低人感染肠炎沙门氏菌数量,就必须重视鸡肠炎沙门氏菌感染的防制。1流行状况鸡肠炎沙门氏菌感染呈世…     

广东省东莞地区农贸市场肉鸡屠宰过程中肠炎沙门氏菌污染情况调查

农贸市场简易宰杀的鸡胴体存在被肠炎沙门氏菌污染的风险,对消费者的健康构成威胁.为了监测广东省东莞市肉鸡在屠宰过程中被沙门氏菌污染的情况,在东莞市某镇随机抽取来自10个农贸市场经三鸟档主宰杀的100份鸡肉,对其进行了肠炎沙门氏菌检测,调查结果表明,该镇农贸市场宰杀的鸡胴体肠炎沙门氏菌检出率仅为1％,其肠炎沙门氏菌污染情况处于极低水平.     

1型鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及其ompA基因B细胞表位预测

本研究从贵州发病鸭中分离到1株致病菌,经生化试验、16S rRNA序列分析、血清学试验和动物回归试验,鉴定为1型鸭疫里氏杆菌(RA),药敏试验结果表明,其对头孢拉定、头孢曲松钠、头孢噻肟和氟苯尼考高度敏感;同时根据GenBank中鸭疫里氏杆菌ompA基因序列,设计1对引物,成功克隆出鸭疫里氏杆菌ompA基因,扩增产物大小为1149 bp。采用DNAStar Protean程序,综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数,对鸭疫里氏杆菌ompA基因的氨基酸序列进行了B细胞表位预测,为进一步研究鸭疫里氏杆菌表位疫苗和分子诊断技术的建立奠定基础。     

鸡肠炎沙门氏菌的分离鉴定与药敏试验

通过分离培养、染色镜检、特异性基因鉴定和动物致病性试验,对辽宁某规模化养鸡场疑似鸡沙门氏菌病的病鸡,采集肝脏和肠内容等病料进行病原学检测和鉴定分型,同时对所鉴定的菌株通过药物敏感试验筛选敏感药物。病原学鉴定结果确定所分离的病原为肠炎沙门氏菌;药敏试验结果表明,该菌株对头孢噻呋、恩诺沙星、氧氟沙星、沙拉沙星高度敏感,本试验结果为临床上对鸡沙门氏菌病的诊断和治疗提供了一定的参考依据。     

山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及毒力基因分析

本研究旨在调查山东地区鸡源沙门氏菌的流行情况及毒力基因分布。在山东地区规模化养鸡场采集病料,利用四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）进行沙门氏菌选择增菌,并对分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色、生化试验、培养基菌落形态鉴定,利用沙门氏菌属及血清型特异性引物对分离菌进行PCR扩增鉴定,并利用PCR方法检测分离菌中33种毒力基因分布。结果显示,分离菌在LB固体培养基和麦康凯培养基上呈无色半透明、光滑且边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阴性、两端钝圆的小杆菌。生化试验、培养基菌落形态鉴定、沙门氏菌属及血清型特异性引物PCR扩增结果显示,共分离到25株鸡源沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌9株,鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌各8株。毒力基因检测结果显示,33种毒力基因在25株分离菌中均有检出,其中20种毒力岛基因（invJ、virK、sopA、mogA、hilA、hisJ、ssaB、ssaQ、ssiD、misL、mgtC、orf319、siiE、siiD、bcfA、pipC、sopB、araB、spoB和avrA基因）、肠毒素基因（stn基因）及菌毛毒力基因（fimA基因）检出率均为100%;2种毒力岛基因（sipA和sodC基因）及4种毒力质粒基因（spvA、spvC、spvD和spvR基因）检出率均为96%,spoE基因检出率为68%,fliC基因检出率为36%,gipA与spvB基因检出率均为32%,sseL基因检出率为4%;25株鸡源沙门氏菌中,分别携带31种（8株）、30种（1株）、29种（15株）和24种（1株）毒力基因;毒力基因gipA和spvB只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,且在鼠伤寒沙门氏菌中检出率为100%。本研究结果表明,山东地区鸡源沙门氏菌主要为肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,分离菌皆携带多种毒力基因,其中gipA和spvB毒力基因只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,可作为鼠伤寒沙门氏菌鉴定的备选基因之一。     

用PCR检测和鉴定家禽样品中的沙门氏菌

巴西研究人员研制了一种PCR测定法对在现地从家禽收集的材料中进行沙门氏菌基因检测和进行肠炎沙门氏菌(SE)、鸡沙门氏菌(SG)、鸡瘟沙门氏菌(SP)和鼠伤寒沙门氏菌(ST)鉴定。测定了这种测定法与Rappaport-Vjassiliadis选择增富肉汤(PCR-RV)结合使用的特异性和敏感性,并分析现     

禽波氏杆菌外膜蛋白A的克隆测序与生物信息分析

本文旨在克隆禽波氏杆菌外膜蛋白OmpA的编码基因,并预测OmpA蛋白二级结构和B细胞抗原表位,从而探讨禽波氏杆菌外膜蛋白OmpA在免疫保护中所起的作用。作者对禽波氏杆菌的外膜蛋白ompA基因进行PCR扩增、克隆及序列测定。应用生物信息学相关软件和方法,对禽波氏杆菌OmpA蛋白的二级结构和B细胞抗原表位进行预测。禽波氏杆菌ompA基因全长597bp,编码199个氨基酸。二级结构以无规卷曲为主,有少量的α-螺旋和β-片层,少见β-转角;推测OmpA蛋白有5个B细胞优势抗原表位区域、2个糖基化位点。本研究为进一步分析禽波氏杆菌免疫机理、制备单克隆抗体和设计表位疫苗等奠定理论基础。     

肠炎沙门氏菌接种对雏鸡免疫器官指数的影响

为探讨家禽对肠炎沙门氏菌感染的遗传免疫效应,本研究选用济宁百日鸡阴性个体为试验材料,用肠炎沙门氏菌进行接种,分别在接种后第1、3、7、14和21天称重屠宰,采集脾脏,胸腺和法氏囊等组织样品并称重。试验结果显示,肠炎沙门氏菌感染能抑制鸡体重的增加,但不显著。而对脾脏的影响主要体现在接种菌后第7天,其器官指数在肠炎沙门氏菌接种后降低0.04%;接种后第21天,试验组法氏囊指数比对照组显著增加;胸腺在接种后第21天前,细菌对其影响较小,但在接种后第21天,器官指数显著降低。本研究结果初步揭示了肠炎沙门氏菌感染对雏鸡体重和免疫器官的影响,这些作用因接种后的不同时间而有差异,为今后肠炎沙门氏菌感染家禽的机制研究提供了理论依据。     

肠炎沙门氏菌(SE)与长期健康

研究表明，雏鸡感染肠炎沙门氏病会影响长期健康。实验报告（雅典东南家禽研究实验室）指出： ５０％ ｌ日龄雏鸡感染ＳＥ后，直到２３周龄时也不能将鸡体内的肠炎沙门氏菌清除干净。长期感染，会降低免疫系统抵御外来病菌的入侵。在感染鸡中，发现了高水平的病菌：每克粪便中有１０万肠炎沙门氏菌。最近发现，感染鸡对常规的疫苗接种可能产生免疫抑制。部分研究表明，感染鸡同对照组相比对新城疫灭活苗反应降低。以上结果证实了鸡幼龄期远离肠炎沙门氏菌的重要性。肠炎沙门氏菌(SE)与长期健康     

鸡白痢沙门氏菌病的综合防制

鸡白痢沙门氏菌病是由鸡白痢沙门氏菌引起的一种以肠炎和黄白色或灰白色下痢为主要特征的急性、败血性传染病,对养殖业危害极大。本文综述了鸡白痢沙门氏菌病的流行病学、临床症状、病理变化、诊断及其预防与治疗方法,为以后在养鸡场经常出现的鸡白痢病的诊断及综合防制提供了理论依据。     

江苏部分地区鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

为调查江苏部分地区未出壳鸡死胚中沙门氏菌感染情况，试验通过细菌分离培养鉴定、MLST分型对来自13家种鸡场的2 433个未出壳的鸡死胚进行沙门氏菌分离鉴定，并通过药物敏感性试验确定分离株对不同药物的敏感程度和多重耐药性。结果显示：未出壳鸡死胚沙门氏菌感染率为3.00%，其中鸡白痢沙门氏菌占50.68%(37/73)、肠炎沙门氏菌占41.10%(30/73)，同时分离到少量海德尔堡沙门氏菌、科特布斯沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌，分别占4.11%(3/73)、1.40%(1/73)和2.74%(2/73)；鸡白痢沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、海德尔堡沙门氏菌、科特布斯沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌分别对应ST92、ST11、ST15、ST582和ST19型；分离株对萘啶酸、链霉素等耐药率较高，分别达86.30%(63/73)和82.19%(60/73)，对头孢他啶、厄他培南、氨曲南、阿米卡星表现为敏感，且存在多重耐药性，多重耐药菌株占71.23%(52/73)。结果表明：江苏省部分养鸡场存在一定程度的沙门氏菌感染，尤其是鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌，分离株耐药情况较为严重，需进一步规范抗菌药的使用。