大肠杆菌和肺炎克雷伯氏杆菌表面抗原的研究

采用热抽提和ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理种方法提取大肠杆菌ＥＬ０－１株和肺炎克雷伯氏杆菌ＥＬ－２株表面抗原，经胃蛋白酶处理，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹分析表明，ＥＬ－１，ＥＬ－２株主要表面抗原耐热，对胃蛋白酶不敏感，分子量分别是２０ＫＤ，３３ＫＤ和３６ＫＤ，４３ＫＤ，其抗原成分是多糖或多糖－磷脂和蛋白质的复合物。     

猪链球菌多价灭活疫苗对实验小鼠免疫效果的研究

临床分离的猪链球菌经随机扩增多态性DNA分析，挑选出4株毒力强。免疫原性好且遗传距离较远的猪链球菌作为疫苗株，研制出猪链球菌病氢氧化铝胶多价灭活疫苗。该疫苗对实验小鼠安全性好，无不良反应。实验室的小鼠免疫效力试验证实该苗的保护率为100％，优于单价灭活疫苗和猪链球菌病活疫苗。     

猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析

根据猪链球菌2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为1496bP目的片段的引物，建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌2型参考株SS2—N株的检测结果为阳性，对马链球菌善疫亚种(C群)参考株ATCC35246、分离株SESZ—Y、SESZ—T、SESZ—C和猪葡萄球菌、大肠埃希氏茵的检到结果均为阴性；用EcoR I内切酶进行酶切．获得了与预期结果一致的863bP和633bP的2个片段。经对SS2—1株的PCR产物进行测序及序列分析，表明其与1933株、P1／7株的核苷酸同源性分别为99．7％和100％。     

牛传染性鼻气管炎病毒TK基因缺失株与野毒株PCR鉴别诊断方法的研究

根据已发表的牛传染性敢管炎病毒（ＩＢＲＶ）ＴＫ基因和ｇＢ基因序列，应用Ｏｌｉｇｏ４．１程序设计两对引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２及ＰＢ１和ＰＢ２，分别对已构建的ＴＫ基因缺失（ＴＫ）ＩＢＲＶ以及ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南－１和云南－２分离株进行了ＰＣＲ扩增，结果显示７株ＩＢＲＶＤＮＡ用引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２扩增产生４５７ｂｐ的特异性片段，而ＴＫＩＢＲＶ只出现１１０ｂｐ     

湖南省猪链球菌的分离与鉴定

从病猪脏器病料中通过细菌培养、生化试验分离鉴定出了121株猪链球菌.经PCR技术鉴定马链球菌兽疫亚种28株,占23.1%,猪链球菌24株,占19.8% ,其中猪链球菌2型4株,占3.3%,猪链球菌9型2株,占1.7%,猪链球菌1型和7型都没检测到,证实省内除了猪链球菌2型外,也存在其他血清型的猪链球菌.     

猪链球菌的分离鉴定

对禾自锦州市的疑似猪链球菌送检病料进行分离，结合培养特性和生化试验鉴定为猪链球菌，经血清学试验进一步鉴定为猪链球菌1／2及2型混合感染。毒力试验结果：病原株对小鼠有致死性；药敏试验结果：猪链球菌对头孢菌素敏感，对洁霉素和卡那霉素中度敏感，而对土霉素、链霉素、青霉素和庆大霉素不敏感。     

互助县杂种黄牛红细胞钾型的研究

根据青海省互助县４０头杂种黄牛的红细胞钾（ＥＫ）浓度分别为高钾（ＨＫ）和低钾（ＬＫ）两种表型，其中ＬＫ型占３５头（８７．５％）为优势表型。ＬＫ型杂种黄牛的ＥＫ浓度为８．９～３０．１ｍｍｏｌ／Ｌ，ＨＫ型的为４５．８～７５．３ｍｍｏｌ／Ｌ，等位基因频率Ｋ＾ｈ＝０．３５３６，Ｋ＾Ｌ＝０．６４６４。     

红细胞钾含量对奶牛耐热性的影响

１９９５年１～８月，我们测定了江西省畜牧良种场５４４头泌乳牛的红细胞钾含量，并根据其出生年月、胎次、产犊日期、产奶量和红细胞钾含量选出２２头，分成高钾（ＨＫ）和低钾（ＬＫ）两组进行耐热性观察。结果表明ＬＫ组产奶量下降率极显著低于ＨＫ组（Ｐ＜０．０１），ＬＫ组较ＨＫ组耐热。ＬＫ组直肠温度（ＲＴ）低于ＨＫ组，但差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

牛传染性鼻气管炎病毒tk基因的克隆

根据牛传染性鼻气管炎病毒ＬＡ株的物理图谱及Ｃｏｐｅｒ株和ＬＡ标ｔｋ基因在基因组中的定位，将ＬＡ株ＤＮＡ ＨｉｎｄⅢＡ片段中的ＳａｌＩ－ＳａｌＩ亚片段、ＢｇｌⅢ－ＳａｌＩ双酶切亚片段分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ中，筛选出３个重组质粒ｐ＾ｔｋ－１，Ｐｔｋ－２和Ｐｔｋ－３，其外源片段大小分别为２．７ｋｂ，１．１ｋｂ和１．６ｋｂ。经酶切分析及同源核酸探针杂交试验表明，２．７ｋｂ ＳａｌＩ－     

牛奶中耐苯唑青霉素葡萄球菌的调查

按美国临床实验室标准委员会（ＮＣＣＬＳ）制定的判定标准，对从牛奶中分离出２１株葡萄球菌经药敏试验（Ｋ－Ｂ法）进行分离菌株的耐药性检查，结果检出耐苯唑青霉素葡萄球菌（ＭＲＳ）８株，检出率为３８．１％，检出耐青霉素Ｇ葡萄球菌１５株，检出率为７１．４％，未检出耐万古霉素葡萄球菌菌株。     

猪链球菌2型江苏分离株溶血素基因检测及序列分析

根据猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2）溶血素基因（sly）设计和合成了一对可扩增其完整阅读框的引物，对HA9801等6株猪链球菌2型江苏分离株，1株德国分离株SS2-D及猪链球菌C群参考株ATCC35246的核酸进行PCR扩增，结果显示HA9801等6株江苏分离株及德国株SS2呈阳性．ATCC35246呈阴性。HA9801株PCR产物纯化后测序．序列分析表明该DNA片段与猪链球菌2型1933株的sly基因同源性为99％。     

犬瘟热病毒的结构多肽分析

差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化经鸡胚成纤维细胞蚀斑克隆后的犬瘟热毒Ｓ＿８毒株，采用ＳＤＳ－ＰＡＥＧ电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ转印技术详细分析了犬瘟热病毒的结构多肽。回收凝胶中１条６３Ｋｄ的蛋白带，经３种不同的蛋白酶消化后，首次证明在犬瘟热病结构多肽中，融合蛋白Ｆ多肽的两个亚单位（Ｆ＿１和Ｆ＿２）是以胰蛋白酶的特异性水解位点精氨酸为桥梁连接形成Ｆ多肽的。试验结果表明，犬瘟热病毒主要包括Ｌ（２００．５Ｋｄ）、ＨＡ（７４Ｋｄ）、Ｐ（６８Ｋｄ）、Ｆ（６３Ｋｄ）、ＮＰ（５６Ｋｄ）、Ｍ（３５Ｋｄ）等６条结构多肽，同时下蛋白可在电泳中裂解成Ｆ＿１（４１Ｋｄ）和Ｆ＿２（２７Ｋｄ）２个亚单位。试验还发现其它３条分子量分别为５２Ｋｄ、４４Ｋｄ、３２Ｋｄ的病毒蛋白成分，它们是否均为病毒的结构多肽仍需深入研究。     

2型猪链球菌河南株cps2J基因的遗传进化关系分析

从河南某猪场断奶仔猪发生疫情的病死猪脑脊液中分离到一株细菌,经革兰氏染色初步确定为猪链球菌,应用PCR方法扩增猪链球菌谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,gdh)和荚膜多糖基因(capsular polysaccharide,cps)进行猪链球菌及血清型鉴定,将阳性产物测序,并进行序列比较分析。结果表明,该分离株为2型猪链球菌,与参考菌株同源性在98%以上,其cps2J基因与人源致病性猪链球菌同源性达99.6%。     

广西部分地区猪群中猪链球菌分离株的毒力基因检测及毒力测定

为了解广西部分地区(玉林市、大新县、那坡县、东兴市、靖西市和百色市)猪群中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)毒力基因的流行情况和毒力水平,试验采用PCR方法检测分离到的201株(经鉴定猪链球菌2&1/2型24株,猪链球菌7型2株,猪链球菌9型15株,一共41株)猪链球菌的毒力基因orf2、sly、ef和mrp,并通过斑马鱼模型筛选毒力较强的菌株,测定菌株的半数致死剂量(LD₅₀)。结果表明：从广西部分地区分离的201株猪链球菌的4种毒力基因携带率从高到低依次为orf2(85.6%,172/201)>sly(55.2%,111/201)>ef(33.8%,68/201)>mrp(26.4%,53/201);6个市县主要流行的毒力基因不同,玉林市、大新县、那坡县、东兴市、靖西市和百色市分离的猪链球菌携带最多的毒力基因分别为orf2(100%)、orf2(89.2%)、orf2(91.5%)、ef(44.4%)、orf2(86.7%)、orf2(40.0%);经鉴定分型的41株猪链球菌中,有7株(17.1%,7/41)同时携...     

青海半细毛羊红细胞钾型的研究

采用火焰光度法对青海半细毛羊的红细胞钾型进行了研究。结果发现：青海半细毛羊的红细胞浓度存在ＨＫ和ＬＫ两种表型，其频率分别为２２．２２％和７２．７８％，Ｋ＾ｈ和Ｋ＾Ｌ等位基因频率分别为０．４７１４和０．５２８６。     

猪链球菌病病原分群鉴定

从河南郑州、漯河、许昌、南阳等地３０个县（市）送检的２６１份病料中，检出链球菌阳性者１９７例（占７５．６％），并从中分离到８３株链球菌。对其中２０株典型分离株进行了系统的生化分群鉴定。我省发生的猪链球菌病主要由Ｅ群、 兽疫链球菌、Ｄ群和Ｌ群锭球菌引起。其分布无明显的地域性。     

猪链球菌对红霉素耐药性的研究

从发病猪体内分离、鉴定猪链球菌，采用肉汤稀释法和纸片琼脂扩散法筛选对红霉素耐药的猪链球菌，用双纸片法确定耐药株的耐药表型，通过聚合酶链反应检测对红霉素耐药的基因ermb/mefA。猪链球菌对红霉素的耐药表型为cMLS表型，即同时对克林霉素耐药。在3株红霉素耐药株中扩增到ermb基因，其余未能检测到ermb或mefA基因。     

鸡大肠杆菌灭活苗研制及检验

从本地发病鸡群分离的埃希氏大肠杆菌Ｏ７８：Ｋ８０，Ｏ８，Ｏ２分离株经雏鸡和小白鼠毒力复壮后，于ＬＢ肉汤中增菌培养，经甲醛灭活后制成灭活菌苗，通过实验室各项检验后免疫鸡群，经效检，安检和抗体检测证明该制剂安全可靠，接种１月龄左右仔鸡可产生坚强免疫力，免疫期５个月，能有效地预防仔鸡大肠杆菌病的发生和流行。     

K99和ST1双价保护性抗原基因重组苗条表达及其免疫原性研究

大肠杆菌耐热性肠毒素（ＳＴ１）是引起幼畜腹泻的重要毒力因子之一，其结构基因编码１９个氨基酸，无免疫原性。作者以ｐＳＬＭ００４工程菌株为始发菌株，亚克隆ＳＴ１基因，并将ＳＴ１基因分别重组到能有效表达Ｋ９９菌毛抗原的ｐＧＫ９９之Ｋ９９基因（ｐＳＫ２１９）和ｐＵＣ１８多克隆位点中（ｐＸＳＴ系列）。从而成功构建了能表达ＳＴ１－Ｋ９９两种抗原的工程菌苗候选株ｐＳＫ２１９以及能表达ＳＴ１抗原的工程菌株ｐＸＳＴ     

上海地区猪源链球菌分离株的病原特性鉴定

1997－1999年从上海地区分离出15株猪源链球菌，结合培养特性、生化特性及血清定型等对其进行了鉴定。其形态、染色及培养特性基本符合链球菌的特点，大多具有α或β溶血，生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A－G乳胶分型诊断液和猪链球菌1、2型标准阳性血清检测5株分离菌，4株为C群链球菌，1株为2型猪链球菌，1株为B群链球菌，1株为D群链球菌，1株与A群和C群有交叉反应，7株不在其检测范围。小鼠对15株分离菌的敏感性有所不同。本试验表明，上海地区猪链球菌病的病原已不再是单一的C群链球菌。对新出现的2型猪链球菌，应引起足够重视。