超抗原SEB与MDV对雏鸡胸腺细胞IL-2生成能力的影响

将1日龄雏鸡分组接种高剂量金黄色葡萄球菌肠毒素（SEB）1ng/只、低剂量SEB0.01ng/只和马立克氏病病毒（MDV）京-1株，分别于接种后1，5，10，15，20，25d，应用MTTI地检测雏鸡胸腺细胞IL-2的生成能力，结果表明，高、低浓度SEB对IL-2生成有不同影响，高剂量SEB诱导其短暂升斋，而低剂量SEB诱导其大幅升高且持续时间较长，而MDV明显降低胸腺IL-2的生成能力，其原因可能是高剂量SEB诱导雏鸡胸腺细胞VβT细胞增殖后的细胞凋亡和免疫无反应性，低剂量SEB促进IL-2生成；对感染MDV11日龄雏鸡接种SEB0.1ng/只后，可降低死亡率，说明一定浓度的SEB具有利于降低MD致死率的作用。     

金黄色葡萄球菌融合肠毒素的构建及高效表达

以食物中毒性金黄色葡萄球菌毒素为研究对象,利用PCR方法分别扩增出金黄色葡萄球菌肠毒素SEB1、SEB2、SED1、SED2、SEE基因片段。将克隆得到的5个毒素基因片段采用柔性的Linker序列(Gly4Ser)3进行串联(SEB1-SEB2-SED1-SED2-SEE),通过重叠延伸PCR法扩增出了融合毒素T,目的基因全长1 835 bp,测序结果同源性达99%。将融合基因克隆到pET-28a( )原核表达载体,转化大肠杆菌后成功表达了融合蛋白,蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的29.6%。     

鸡肌肉组织中氯霉素残留ELISA检测方法的研究

本文利用活化酯法合成了氯霉素抗原 ,作为免疫原免疫新西兰大耳白兔得到氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素间接竞争酶联免疫检测方法 ,进行了药物交叉反应性试验 ,并对鸡肌肉进行添加回收试验。结果显示抗体效价可达 1∶ 6 4 0 0 0 0 ,IC50 为 1.3ng/ ml,最低检测限达到 0 .0 5 ng/ ml,线性检测范围为 0 .1～ 36 .4 5 ng/ ml。在 0 .5、1、2 .5、5 ng/ g浓度水平添加到鸡肌肉组织中 ,测得回收率为 5 5 .4 %～ 119.0 % ,变异系数为 4 .3%～ 10 .4 %。该 EL ISA方法快速、灵敏、方便 ,满足了氯霉素残留检测的要求。     

双抗体夹心ELISA检测水牛γ-干扰素方法的建立及初步应用

纯化2株针对水牛γ-干扰素的单克隆抗体,其中1株进行HRP标记作为检测抗体,另1株单抗作为捕获抗体,建立检测水牛γ-干扰素的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)。通过对封闭液、抗体稀释液等条件进行优化,经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为625 ng/mL,检测抗体的工作效价为1∶100;所建立的DAS-ELISA方法检测灵敏度25 ng/mL,批内变异系数为0.52%～6.86%,批间变异系数为5.6%～7.07%。采集60头单次皮内注射结核菌素的水牛肝素钠抗凝全血,利用牛结核杆菌特异性抗原rHIS-CFP10/ESAT-6融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA检测所有样本,与皮内变态反应试验比较,结果显示,自制夹心ELISA方法检测水牛结核病的敏感性为62%,特异性为87%,符合率为75%,表明可应用于水牛结核病的检测。     

去氢甲睾酮ELISA试剂盒的研制

以实验室自主研发的一株能稳定分泌去氢甲睾酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株为基础,应用ELISA原理研制去氢甲睾酮残留快速检测试剂盒,并对试剂盒特性进行测定。结果表明,该试剂盒标准曲线的回归方程为y=-0.205 5x+0.516(R2=0.993 1),线性检测范围为0.1ng/mL～100ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为3.20ng/mL,对猪肉加标样品的检测回收率在87.41%±5.44%～110.70%±2.05%之间,试剂盒检测与去氢甲睾酮结构类似物丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1%;试剂盒在4℃能稳定保存6个月。说明试剂盒能够应用于食品中残留去氢甲睾酮的快速检测。     

鸡新城疫病毒B_(95)株的RT-PCR检测方法研究

本试验设计了一对B95 株的特异引物NDV -P1/P2,探讨了对其进行RT-PCR检测的可行性。结果证明 ,用该引物可以扩增出一条310bp的特异核酸带 ,敏感性为0.0043ng/ul。     

二氟沙星残留检测用单克隆抗体的制备及其鉴定

用DFX-BSA免疫BALB/c小鼠,采用显微克隆技术成功筛选出5株特异性分泌细胞株1a6、2b4、4a4、X1和X2。将X1株细胞株直接注入小鼠腹腔获取腹水,腹水纯化后效价达1:1638400。蛋白质含量为6.86mg/ml,单抗X1属IgG2a亚型。X1株单克隆抗体的检测标准曲线方程为Y=0.4813-3.1067X(R=0.9510),最低检测限(LOD)为2ng/ml,线性范围为0.002-5μg/ml,DFX对其IC50为0.085μg/ml。单抗对氟喹诺酮类药物有一定的交叉反应,对沙拉沙星最高可达10.9%,对兽医临床常用抗菌药物氨苄西林、卡那霉素、盐酸四环素、磺胺甲噁唑和氯霉素等没有交叉反应。Ci-ELISA反应中McAb对低浓度的乙腈和丙酮具有良好的耐受性,而低浓度的甲醇对McAb的结合力有一定的影响。     

羊的早期妊娠诊断

用放射免疫分析法测定配种后16～20日妊娠和未妊娠阿华西母羊血清标本的孕酮浓度.发现妊娠母羊的孕酮浓度(1.89ng/ml)高于未妊娠母羊(0.34ng/ml).依据血清孕酮量作出的妊娠诊断,通过产羔得到证实(以特定期间高于1ng/ml的孕酮量作为妊娠指标).此种诊断的准确率为90％以上.60月龄母羊的孕酮浓度2.65ng/ml),比24月龄母羊的孕酮浓度(1.66nc/ml)更高,但不同体重组母羊的血清孕酮差异不显著.故阿华西母羊配种后16～20日的血清孕酮定量分析适宜于早期妊娠的判定.     

抗氯霉素单克隆抗体的制备与鉴定

本文用人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)免疫 BAL B/ C小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 2株分泌抗氯霉素的单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1D1 0 和 5 E6 。经间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)检测细胞培养上清效价为 1∶ 5 12 ,诱生腹水的效价可达 1× 10 8。两株单克隆抗体的亚型为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目为 84～ 96条。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。ci EL ISA检测显示其与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小 ,其灵敏度为 0 .1ng/ ml,IC50 为 2 .38ng/ m l,这表明该单抗具有较大的应用价值     

牛尿中玉米赤霉醇残留酶联免疫检测方法的研究

在制备了玉米赤霉醇单克隆抗体的基础上 ,建立了牛尿中玉米赤霉醇残留的 EL ISA检测方法 ,确定了各种溶液的最适工作浓度 ,并对最低检测限、5 0 %抑制浓度和空白牛尿添加回收试验进行了研究。本方法的最低检测限为 0 .6 ng/ml,5 0 %抑制浓度为 3.0 ng/ml,以 10、2 1和 35 ng/ml浓度添加空白牛尿 ,回收率在 70 .0 %～ 116 .0 %之间 ,变异系数在 6 .0 %～ 15 .9%之间。此方法快速、灵敏、方便 ,满足了牛尿中玉米赤霉醇残留检测的要求     

饲料中玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用

目的：建立快速、有效检测植物性食品中ZER的残留量。方法：应用间接竞争ELISA法建立玉米赤霉醇单克隆抗体快速检测植物性食品中ZER含量的半定量检测。同时对该ELISA试剂盒进行了调试。结果：实验以人工合成的ZER为包被原,ZER为竞争半抗原,两者与一定量的抗玉米赤霉醇单克隆抗体反应,建立检测ZER的ELISA方法。其最适包被浓度为1：5000,抗体最适工作浓度为1：5000,酶标二抗的最适工作浓度为1：5000。试剂盒检测限为0.5ng/ml,添加回收率在70.0豫～116.0豫之间,变异系数小于20豫,在2～8℃条件下可保存3个月。     

高效液相色谱法测定饲料中地西泮含量

用高效液相色谱仪 ( HPLC)测定配合饲料中地西泮的含量。利用硅酸镁小柱对地西泮提取液进行富集、净化 ,使用 Waters高效液相色谱仪进行检测。结果表明 :样品提取液中各组分分离良好 ,地西泮浓度在 2 0 0 ng/ml～ 1 0 0 μg/ml范围内 ,与峰面积呈线性相关 ( R=0 .9992 ) ;其平均回收率为1 0 5 .3%～ 1 1 4.9% ;变异系数 ( RSD) <5 % ;检测限( S/N=3) 4ng;其他常用安眠药物在该条件下对地西泮均无干扰。     

鸡新城疫病毒B95株的RT—PCR检测方法研究

本试验设计了一对B95株的特异引物NDV－P1／P2，探讨了对其进行RT－PCR检测的可行性，结果证明，用该引物可以扩增出一条310bp的特异核酸带，敏感性为0．0043ng/ul。     

间接竞争ELISA法检测玉米中ZEN的提取方法研究

应用抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体(ZEN-McAb)建立间接竞争ELISA,用以检测玉米中的玉米赤霉烯酮(ZEN)。检测限为1ng/ml,检测范围为1～20ng/ml。在提取玉米赤霉烯酮的过程中,提取液中的甲醇含量对检验结果的影响很大。当提取液中甲醇含量为60%时,加标回收率最理想,平均回收率为92.4%。     

酶联免疫法检测饲料中黄曲霉毒素B1

本文采用ELISA法测定黄曲霉毒素B1。本法检测线性范围0.1～10ng/ml,最底检出浓度0.1ng/ml,回收率87%～95%。本法具有快速、简便和一次可批量定性定量的优点,适用于饲料等样品的黄曲霉毒素B1的分析测定。     

牦牛繁殖季节若干激素动态变化研究

为掌握母牦牛繁殖季节促卵泡素(FSH)、促黄体激素(LH)、孕酮(P4)、瘦蛋白(Leptin)、雌二醇(17β-E2)激素含量变化,在牦牛繁殖季节对其卵巢、卵泡变化进行直肠检查,对FSH、LH、P4、Leptin、17β-E2激素进行测定。结果表明,牦牛在繁殖季节非发情期其FSH、LH、P4、Leptin、17β-E2含量在0.0836～0.3767(mIU/ml)、0.1350～1.0109(ng/ml)、3.1283～7.4809(pg/ml)、0.0650～8.0119(ng/ml)、0.1604～0.5139(mIU/ml)。在繁殖季节发情期以上激素含量分别为0.1280～0.4050(mIU/ml)、0.6820～1.6744(ng/ml)、3.1586～3.8438(pg/ml)、0.5275～1.3760(ng/ml)、0.4110～0.5975(mIU/ml)。由此说明牦牛繁殖季节非发情期和发情期其激素变化个体差异很大,因此牦牛发情期的长短个体差异较大。     

醋酸甲孕酮（MPA）间接竞争ELISA检测方法的建立

将半抗原醋酸甲孕酮（MPA）衍生物与牛血清白蛋白(BSA)偶联后，作为包被原与游离的醋酸甲孕酮竞争抗MPA多克隆抗体，通过该模式建立间接竞争ELISA方法检测MPA的残留量。试验结果表明：理想的包被抗原为0.625 μg/ml,抗体的工作浓度为1∶8000，标准曲线在1 ～50 ng/ml之间线性关系较好，最低检测限0.1 ng/ml, 得回归方程y=-1.1479x+0.9426(r2=0.9679),批内和批间变异系数分别为5. 35%、10. 89%。     

抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的制备及定量ELISA方法的建立

采用黄曲霉毒素M1与牛血清白蛋白偶联物免疫8周龄BALB/c小鼠,4次免疫后,使小鼠产生免疫应答.取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合、筛选,最终获得1株能稳定分泌抗黄曲霉毒素M1的杂交瘤细胞株系.其染色体平均计数为90±10对,间接ELISA检测该株系培养上清的效价为1:6 400,纯化腹水效价为5 000×27.与黄曲霉毒素M1及其结构类似物黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的反应率分别为100%、7%、0%.经传30代后.抗体效价稳定.并在此基础上建立了间接竞争ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度是0.08 ng/mL,校正曲线的线性范围为0.08 ng/mL～ 5 ng/mL.该方法的加标回收率为80.0%～128.3%.     

鸡肌肉组织中左氧氟沙星兽药残留ELISA检测方法的研究

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星（LVL）与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备免疫抗原,免疫新西兰大白兔得到LVL的多克隆抗体,建立了LVL间接竞争ELISA方法。结果表明：抗LVL血清效价达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为y=-0.289 4x＋0.049 5（R2=0.987 8）,50%抑制浓度（IC50）为64 ng/mL,最低检测限（LOD）为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10～1 000 ng/mL。批内变异系数为3.51%～7.46%,批间变异系数为8.66%～11.89%,鸡肌肉中的LVL添加浓度在10～1 000 ng/ml范围内时,回收率为73.5%～84.36%。本试验建立的ELISA方法能够满足左氧氟沙星兽药残留检测要求。     

用超高效液相色谱-串联质谱检测动物源性食品中头孢喹肟残留

建立了动物源性食品中头孢喹肟残留量检测的超高效液相色谱-串联质谱法。样品经乙腈水溶液提取后,用C18固相萃取柱净化、浓缩。头孢喹肟残留量在10～500μg/L浓度范围内线性关系良好,r=0.9996。方法检测限为1 ng/g,定量限为5 ng/g。猪肌肉在5～100 ng/g空白添加浓度范围内平均回收率为57.7%～69.4%,RSD为6.68%～13.41%,猪肝在5～100 ng/g空白添加浓度范围内平均回收率为50.6%～58.6%,RSD为5.13%～12.42%,牛奶在5～40 ng/g空白添加浓度范围内中平均回收率为59.2%～65.3%,RSD为6.12%～13.26%。