荧光定量PCR技术及其在动物营养中的应用

实时荧光定量PCR技术是一种通过检测PCR荧光信号的变化进行核酸定量的技术。目前,该技术已经应用于病原微生物、基因表达、基因组变异和多态性检测等许多方面。本文综述了定量PCR技术的基本原理及其在动物营养中的应用。     

荧光定量PCR技术及其应用研究进展

荧光定量PCR是近年发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量PCR的核心.荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应争特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围.论文综述了FQ-PCR技术的原理、FQ-PCR实时定量检测系统及其应用.     

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术.它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点.文章就常用的4种方法,即DNA结合染色、水解探针、分子信标和杂交探针的原理和特点进行介绍,同时综述了荧光定量PCR技术在实践中的应用.     

实时荧光定量PCR技术在水产研究中的应用

实时荧光定量PCR（Real—time fluorescent quantitative PCR,FQ—PCR）技术是1996年由美国Applied Biosystems公司推出的一种通过检测荧光信号的变化进行核酸定量的技术。与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。本文综述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及其在水产研究中的应用。     

实时荧光定量PCR技术原理与应用

实时荧光定量PCR(real-ti me fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的主要原理及目前在分子生物学领域,病原体和肿瘤等方面的检测和诊断应用进行了概述。     

荧光定量PCR技术在疾病检测上的应用

实时荧光定量PCR技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,以直接探测PCR过程中荧光信号的变化获得定量的结果。因其具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点,成为当前疫病检测广泛采用的分子生物学诊断技术。本文就实时荧光定量PCR技术在疾病检测上的应用作一综述。     

荧光定量PCR技术及其在动物传染病定量检测中的应用

荧光定量PCR是近年发展起来的一 种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核 酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR 技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量 PCR的核心。目前报道的荧光探针主要有 TaqMan、Amplisensor、分子信标、Lightcycler 以及在这4种探针基础上发展起来的其他荧 光探针。各种荧光探针在定量PCR中的作 用是识别和报告特定核酸。这些荧光探针与 相应的靶分子杂交时经历一个自发荧光形成 或消失的构象变化,只有与完全互补的靶核 酸杂交时才会出现这种变化,当靶核酸存在 碱基错配或缺失时,荧光探针就不会与之杂 交,也不会出现荧光的变化。在检测时根据 这种荧光变化来确定检测中特定核酸的存在 和量的多少。荧光探针用于定量PCR不但 提高了PCR的检测灵敏度,还能在同一封闭 管中对模板进行准确定量检测,特别适合特 定核酸扩增的实时监测。荧光定量PCR用 于动物传染病的诊断,不但能定量检测病原 体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵 敏、快速、省力的特点。     

实时荧光定量PCR技术

荧光定量PCR技术是一种目前国内外应用较为广泛的定量PCR技术,是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的,具有灵敏度高、特异性强、线性关系好、操作简单等优点,不但能够用于基因定量检测,还能准确定量疾病相关基因的表达,现已广泛应用于人类和动物疾病的快速检测、定量分析、早期诊断、基因分型等方面。它可以采用绝对定量和相对定量2种方式实现定量检测,但都有各自的优缺点,需根据具体的试验选择合适的定量方式,从而得到更准确的试验结果。提高荧光定量PCR技术的特异性和灵敏度需从多方面着手,主要指特异性探针及引物的设计,选择合适的Mg2 浓度、引物和探针浓度、循环数等。     

实时荧光定量PCR技术及其在蜜蜂疾病诊断中的应用前景

实时荧光定量PCR技术是一种建立在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术,它不仅实现了对DNA模板的定量,而且具有灵敏度高、特异性和可靠性强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、实时性和准确性的特点,目前已广泛应用于基因表达、基因检测、单核苷酸多态性的测定、诊断遗传缺失、细胞因子的表达分析、动物疾病诊断等现代生物医学领域方面的研究。对实时荧光定量PCR技术的原理、技术发展、优缺点及其在蜜蜂疾病诊断中的应用与研究进展进行简要概述。     

FQ-PCR在转基因产品检测中的应用研究进展

实时荧光定量PCR（real-time fuoreseent quantitative PCR,FQ—PCR）是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术,因其具有灵敏性高、特异性强、结果精确、反应快速、安全可靠等优点,现已广泛应用于医学和生命科学的各个研究领域,论文就实时荧光PCR技术的主要原理、分类方法以及在转基因产品检测中的应用等进行简要综述。     

对虾桃拉综合征病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立一种敏感、定量、快速、特异、安全的实时荧光定量PCR检测方法,用于对虾桃拉综合征病毒(TSV)的早期诊断和监测.方法:从GeneBank下载所有Taura病毒的序列,用生物软件进行序列比对,在TSV保守区序列设计特异性引物和探针.对实时荧光定量PCR反应条件进行优化,提高特异性和灵敏度.结果:检测灵敏度达450个病毒拷贝,超过普通PCR100倍;检测特异性为100%,高于普通PCR;检测时间在60 min内,约为普通PCR的1/4;有效解决PCR产物的气溶胶污染问题,安全性高.结论:本研究应用荧光定量PCR技术用于对虾桃拉综合征病毒检测具有敏感、定量、快速、特异、安全等优点.     

实时荧光定量PCR技术及应用

实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上发展起来的核酸定量技术,于1996年由美国Applied Biosystems公司推出.当前,实时荧光定量PCR技术应用范围很广,例如,能从粪便材料中分离出的细菌DNA来精确定量检测肠道菌,使我们能详细地分析肠道中优势菌与荧光原位杂交(FISH)及培养方法检测不到的非优势菌,为理解肠道菌群与机体状况关系提供重要线索.该技术从原理上分为荧光染料检测模式和荧光探针检测模式两方面.     

实时定量PCR技术在弓形虫研究中的应用

实时定量PCR技术（real-time polymerase chain reaction/quantitative real time polymerase chain reaction,real-time PCR/qPCR）是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法;该技术具有特异性强、灵敏度高、定量准确和快速等优点,在生物医学领域中得到广泛的应用。笔者对实时定量PCR技术的原理和近几年新兴的荧光探针的原理和类型进行了论述,并对实时定量PCR技术在弓形虫基础生物学、诊断及检测、药物和疫苗研究中的应用进行了综述。     

数字PCR技术在动物疫病诊断中的应用进展

数字PCR技术是一种能够进行绝对定量的核酸检测技术,与实时荧光定量PCR技术相比,该技术敏感性更高、定量不依赖于标准曲线、对反应抑制物的耐受能力也更高。目前,该技术在转基因检测、物种鉴定、疾病诊断、病原微生物鉴定和精确定量分析等领域具有较广阔的应用前景。论文对数字PCR的发展历史、原理、优缺点及在动物疫病诊断中的应用进行了综述,以期为提高动物疫病诊断能力的提供借鉴。     

实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用

实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为：SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中,以期得到最优的定量检测效率。     

实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用

聚合酶链反应(PCR)技术自1985年问世以来,以其灵敏性高、特异性强和速度快在分子生物学等科研领域得到了广泛应用。但是,由于传统的PCR技术不能准确定量,在操作过程中易受污染而使假阳性率偏高;因此,使其应用受到限制。实时荧光定量PCR技术拥有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点,已成为了分子生物学研究的重要工具。文章对实时荧光定量PCR技术的原理、检测方法、定量方法及其应用进行了综述。     

影响实时荧光定量PCR技术的因素及对策

<正>实时荧光定量PCR技术以其特异性强、灵敏度高、重复性好、自动化程度高、检测速度快等优点在动物疫病的监测、检测和诊断中发挥巨大的作用,但是影响实时荧光定量PCR技术的因素却不容忽视。试验就实时荧光定量PCR技术的影响因素及相应对策进行综合分析,以提高动物疫病监测、检测和诊断的水平。1样品处理因素1.1样品的采集应按照活体动物样品的采集要求采集猪扁桃体、家禽咽肛拭子、牛羊食道-咽部分泌物(O-P液)、     

牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

本研究旨在建立一种快速检测牛支原体(Mycoplasma bovis)的实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank中收录的牛支原体OPPD/F基因序列(登录号:AF130119),利用Primer 5.0软件设计特异性引物与TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,构建检测牛支原体的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该检测方法线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=0.994,扩增效率E=1.280。荧光定量PCR法检测的敏感性是常规PCR的10倍;特异性良好,检测9种相关细菌和病毒均为阴性;重复性好,组内及组间样本检测Ct值均小于2%。牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法较之于常规PCR方法有快速、特异性强、敏感性高、稳定性好的优点。     

牛诺如病毒RdRp基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

牛诺如病毒(BNoV)是国内新发的犊牛腹泻病病原,高度变异且传染性极强.牛感染该病毒后发病较为突然,能够引起腹泻呕吐等临床症状,一般情况下诺如病毒较为温和但是在暴发时感染率可达45％以上,甚至引起出血性的死亡,给养牛业造成经济损失.因此,建立一种特异性强、灵敏度高、耗时短的检测方法对准确检测BNoV及其流行病学调查等均具有重要意义.实时荧光定量PCR方法敏感而快捷,操作简便,因此荧光定量PCR技术被广泛应用于兽医学的检测.本研究设计了一对BNoV的特异性引物和探针,建立了TaqMan荧光定量PCR的检测方法,为快速检测和及早诊断BNoV提供有效的技术保障.     

PCR检测技术在奶牛结核病鲜乳样本监测中的应用

奶牛结核病是一种严重的人兽共患传染病,为建立可快速评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本试验根据牛分枝杆菌基因组合成特异性引物,建立普通PCR方法和实时荧光定量PCR方法,并评价该方法的性能。结果可见,本试验所建立的普通PCR方法和实时荧光定量PCR方法能有效检测牛分枝杆菌目的基因,且均具有较好的敏感性、特异性,可对鲜乳样本进行检测,且实时荧光定量PCR方法比普通PCR方法更敏感。试验结果表明,所建PCR方法可用于鲜乳样本牛分枝杆菌的定性和定量检测,这为鲜乳牛分枝杆菌污染状况和食品安全评估提供重要技术。