新型高致病禽流感疫苗研制成功

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（国家禽流感参考实验室）的科研人员选择我国自行培育．免疫效果良好的一株新城疫病毒弱毒疫苗为载体，采用国际先进的反向基因操作技术．经过近四年努力，在国际上首次研制了表达H5亚型高致病力禽流感病毒抗原基因的重组新城疫病毒活载体双价疫苗。     

哈兽研研制出新禽流感疫苗

农业部昨天宣布，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（国家禽流感参考实验室）的科研人员选择我国自行培育、免疫效果良好的一株新城疫病毒弱毒疫苗为载体，采用国际先进的反向基因操作技术，经过近四年努力，在国际上首次研制了表达H5亚型高致病力禽流感病毒抗原基因的重组新城疫病毒活载体双价疫苗。     

我国研制成功新型高致病性禽流感疫苗

新华网北京10月14日电（记者董峻）农业部14日宣布，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（国家禽流感参考实验室）的科研人员选择我国自行培育、免疫效果良好的一株新城疫病毒弱毒疫苗为载体，采用国际先进的反向基因操作技术，经过近四年努力，在国际上首次研制了表达H5亚型高致病力禽流感病毒抗原基因的重组新城疫病毒活载体双价疫苗。     

牛β-干扰素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效稳定表达及抗病毒活性检测

研究利用新城疫病毒La Sota株作为表达载体,构建表达牛β-干扰素基因的重组新城疫病毒全基因组质粒pFL-BoIFN-β, 与辅助质粒共转染BHK-21细胞后获得表达BoIFN-β的重组新城疫病毒.收获的鸡胚尿囊液内的重组病毒经RT-PCR检验证实重组病毒含有相应外源基因.将重组病毒尿囊液经紫外线照射以灭活新城疫病毒,利用表达绿色荧光蛋白的重组水泡性口炎病毒在牛肾细胞上测定rL-BoIFNβ抗病毒活性, 表达BoIFN-β的重组新城疫病毒能有效抑制重组水泡性口炎病毒在牛肾细胞上的复制, rL-BoIFNβ接种SPF鸡胚所收尿囊液抗病毒活性高达2×107 IU/mL.结果表明:重组新城疫病毒rL-BoIFNβ接种的SPF鸡胚尿囊液具有高效而稳定的抗病毒活性,重组新城疫病毒可以作为外源蛋白的高效表达载体而广泛应用.     

免疫蛋鸡携带新城疫病毒的调查研究

实验对江苏省某地区 2 2个免疫鸡场进行了新城疫病毒抗体随机抽样监测 ;并从所抽样的鸡只中无菌采集气管及泄殖腔棉拭子样品 ,接种非免疫鸡胚进行病毒分离与鉴定。结果表明 ,在不同新城疫病毒抗体水平的鸡群 ,均可分离到新城疫病毒 ;这提示了新城疫病毒抗体水平只能用于衡量机体的体液免疫状况 ,而不能作为评价鸡群是否带毒的指标     

哈兽研新禽流感疫苗明年有望上市

从哈兽研获悉．经过近4年努力。该所国家禽流感参考实验室科研人员选择我国自行培育、免疫效果良好的一株新城疫病毒弱毒疫苗为载体，采用国际先进的反向基因操作技术，在国际上首次研制成功表达H5亚型高致病性禽流感病毒抗原基因的重组新城疫病毒活载体双价疫苗。预计这一新型双价疫苗12月末可正式进入产业化，明年1月有望投放市场。     

新城疫病毒样颗粒疫苗研究进展

病毒样颗粒是指利用异源宿主系统表达的病毒,结构蛋白自行组装成不含病毒基因组、不能复制、不具有感染能力的病毒样蛋白颗粒。病毒样颗粒具备构象逼真、安全、稳定、可刺激体液和细胞免疫应答、作为载体表达其他抗原以及可设计成区分自然感染与免疫接种等诸多优点。有研究表明,新城疫病毒样颗粒可用来研制针对新城疫流行变异株的高效疫苗。作者就新城疫病毒样颗粒相关研究进展进行较为详尽的综述,以期为中国新城疫病毒样颗粒疫苗的研究提供参考。     

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合 …

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用,分别将按２００倍,５００倍,１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株,肾型Ｊ株,Ｈ１２０,２８／８６株,Ｈ５２和Ｈ１２０株的１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔,同时设单独培养作城疫病毒效价。结果表明,鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作     

ELISA检测鸡新城疫病毒特异性IgM抗体的研究

以新城疫病毒单克隆抗体包被板,用10％小牛血清-PBS封闭后,捕获尿囊液中的新城疫病毒作固相抗原.在此板上应用酶标抗鸡IgM单克隆抗体进行间接ELISA试验检侧鸡血清中新城疫病毒的特异性IgM抗体.试验证明该方法特异性强、敏惑性高.兔抗新城疫病毒阳性血清可特异性阻断反应,将新城疫病IgM阳性血清用2-ME处理可使ELISA反应呈阴性,与禽源多杀性巴氏杆菌鸡IgM阳性血清、鸡传染性支气管炎病毒IgM阳性血清无交叉反应.该试验可检测到La Sota免疫后3天鸡血清中的特异性IgM,对鸡新城疫病毒IgM阳性血清的检测效价可达1:320以上,并可检测到临床新城疫病鸡血清中的特异性IgM抗体.     

新城疫病毒分子生物学及其疫苗的研究进展

新城疫是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一,特别是对养鸡业造成重大经济损失。利用分子生物技术已研究出了很多基因工程疫苗用于预防鸡新城疫,比如基因工程活载体疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗等。近年来随着反向遗传操作技术的发展,新城疫病毒已经被开发成病毒载体,可以携带外源基因研制新城疫病毒活载体疫苗,表达IBDV和IBV的新城疫活载体疫苗已经成功研制。本文将从新城疫病毒的分子生物学及疫苗方面进行综述。     

新城疫病毒在肿瘤治疗中的研究进展

新城疫病毒(NDV)是一种新兴的肿瘤生物治疗因子,反向遗传学操作技术的成熟使其在肿瘤治疗中的应用研究越来越深入。NDV能够通过其直接的溶瘤作用杀死肿瘤细胞,也可通过感染自体肿瘤细胞制成疫苗对患者进行主动特异性免疫治疗。但直接溶瘤效应会对患者产生一定的负面影响,自体肿瘤疫苗的免疫治疗也不能彻底杀死肿瘤细胞。目前,以NDV为复制型病毒载体的肿瘤基因治疗已成为该病毒肿瘤生物治疗的研究热点,这种基因治疗方法被认为是人类征服癌症的潜在手段。论文综述了NDV在肿瘤治疗中的研究与应用,对其溶瘤及抗肿瘤免疫学机制进行了分析,并对NDV作为载体的肿瘤基因治疗前景进行展望。     

新城疫病毒的分子生物学及应用研究进展

新城疫是当今全球范围内最严重的家禽传染病,特别是对养鸡业可造成重大经济损失。新城疫病毒是一种负链RNA病毒,含有六个主要蛋白,按顺序3′-NP-P-M-F-HN-L-5′排列,其中最主要的糖蛋白是F和HN蛋白,这两个蛋白不仅与病毒的毒力和致病性有关,也是诱导产生保护性抗体的蛋白。许多分子生物学技术已经应用于新城疫的诊断。利用分子生物技术也研究出了很多基因工程疫苗比如基因工程活载体疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗等。近年来反向遗传操作技术的发展,新城疫病毒已经被开发成病毒载体,可以携带外源基因研制新城疫病毒活载体疫苗,表达IBDV和IBV的新城疫活载体疫苗已经研制。     

I类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定

目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。     

表达新城疫病毒融合蛋白基因禽痘病毒重组体的构建

通过RT-PCR扩增新城疫病毒F基因,利用禽痘病毒复合启动子、SV40 PolyA终止信号序列构建F基因表达盒。将F基因表达盒与loxp-GFP-loxP序列串联插入禽痘病毒重组臂,构建了禽痘病毒转移质粒载体。在脂质体介导下转染CEF,获得了带有绿色荧光信号的重组病毒rFPVFGFP。通过二次转染,利用Cre-loxP位点特异性重组将重组病毒基因组的GFP自动去除,结果获得了只含新城疫病毒F基因表达盒的重组禽痘病毒rFPVF。试验结果表明,rFPVF复制稳定,表达的F蛋白具有免疫原性,能够刺激鸡只产生抗新城疫病毒的中和抗体。     

A fowlpox virus vaccine vector with insertion sites in the terminal repeats: demonstration of its efficacy using the fusion gene of Newcastle disease virus

In this paper we report the development and testing of a fowlpox virus vector system. Insertion sites in non-essential regions within the terminal inverted repeats of the virus have been characterised. Foreign genes inserted into these sites are shown to be present in two copies in the resultant recombinant virus. To test the potential use of this vector as a live vaccine the fusion gene of Newcastle disease virus (NDV) has been inserted into a vaccine strain of fowlpox virus, and inoculated into chickens. The experiments demonstrate the ability of the recombinant to protect chickens against challenge by a virulent strain of NDV and to elicit the formation of anti-fusion protein antibody.     

表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。     

鹅源新城疫病毒ZJ1株拯救体系相关因素的探索

在构建了鹅源新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus,NDV)ZJ1毒株的微型基因组和表达该病毒NP、P与L蛋白的辅助质粒的基础上,通过对该病毒拯救体系中的重要影响因素如ZJ1在易感细胞的增殖、热休克对拯救效率的影响、表达T7RNA聚合酶的重组痘苗的感染复数、胞嘧啶阿拉伯呋喃糖苷(Arac)对重组痘苗复制的影响以及共转染质粒的比例和量等进行了探索。以上研究为该病毒的成功拯救及开展其它相关研究奠定了基础。     

新城疫病毒TL1株M基因的克隆和序列分析

采用RT-PCR方法扩增了新城疫病毒(NDV)TL1株M基因,将扩增产物提纯后克隆入pGEM-T easy载体,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。测序拼接得出M基因的序列长度为1232 bp,该基因的ORF总长为1095 bp,编码364个氨基酸。与GenBank下载的15株参考毒株M基因比较,核苷酸同源性为85.2%~98.1%,编码的氨基酸同源性为85.8%~98.9%。NDV TL1产生M蛋白分子中有7对碱性氨基酸,5个保守的Cys残基,与鹅源新城疫SF02株、ZJ1株具有类似的特征。这些结果为揭示NDV TL1株的分子生物学背景,阐明NDV种间传播机制奠定了基础。     

新城疫病毒LaSotaC5株感染性克隆的构建及病毒拯救

将本实验室保存的一株LaSota病毒用有限稀释法接种鸡胚进行纯化,连续传代5次后筛选到1株高血凝效价的纯培养克隆株,命名为LaSotaC5,并对其进行全基因组测序,克隆株与亲本株在生物学特性与基因序列上都存在一定的差异。参照LaSotaC5株全基因序列单酶切位点,用RT-PCR的方法将基因组分8段扩增,按照病毒基因组的结构顺序,将克隆片段定向插入到TVT转录载体中,成功构建含有病毒全长eDNA的转录载体TVT．LaSotaC5。将TVT-LaSotaC5与辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI—L共转染BSR—T7／5细胞,成功拯救出了具有感染性的LaSota株新城疫病毒。病毒的成功拯救为后续基因功能和疫苗载体开发等方面的研究提供了平台。