内源性逆转录病毒的转录表达与宿主功能关系的研究进展

内源性逆转录病毒（ERVs）是几百万年前感染并整合进宿主基因组中，通过孟德尔规律进行遗传的逆转录病毒的遗留物。ERVs具有重要的生物学功能，对宿主表型、生产性能、胚胎发育及免疫调节等方面发挥重要作用。本文对内源性逆转录病毒的基因组结构、表观修饰和整合位点效应的活性调控及其与宿主胚胎发育、免疫调控等进行综述，为深入了解内源性逆转录病毒在基因组的功能及其对宿主的影响与进化提供参考。     

内源性绵羊肺腺瘤病毒与宿主共进化研究进展

近年来的研究表明,内源性逆转录病毒作为哺乳动物基因组的重要组成部分,在与宿主共进化过程中发挥重要作用.对内源性绵羊肺腺瘤病毒的研究,为揭示哺乳动物内源性逆转录病毒与宿主共进化关系提供了一个独特的模型系统.内源性绵羊肺腺瘤病毒在与宿主共进化过程中不断的增强自身的宿主适应性,通过取代宿主原有的促进孕体发育及胎盘形成的机制而...     

异种移植的现状与未来

应用猪的细胞、组织或器官移植治疗人类疾病的研究方兴未艾.本文综述了异种移植的最新进展,侧重阐明了异种移植存在的生理学和免疫学障碍及解决异种移植排斥的策略.讨论了应用猪作为供体进行异种移植可能存在的一些潜在危险性,特别是猪内源性逆转录病毒造成的一系列问题.     

骨髓性淋巴白血病

骨髓性淋巴白血病（ＭＬ）隶属于白血病／肉瘤群，是第６个亚型。前５个亚型是：Ａ和Ｂ是常见的外源性病毒；Ｃ和Ｄ少有野外病例的报道；Ｅ是到处都有的内源性病毒。白血病病毒属于逆转录病毒科逆转录病毒属的禽白病病毒。它们的核衣壳的蛋白质由ｇａｇ基因编码，包括主要...     

异种移植的现状与未来

应用猪的细胞、组织或器官移植治疗人类疾病的研究方兴未艾。本文综述了异种移植的最新进展，侧重阐明了异种移植存在的生理学和免疫学障碍及解决异种移植排斥的策略。讨论了应用猪行为供体进行异种移植可能存在的一些潜在危险性，特别是猪内源性逆转录病毒造成的一系列问题。     

ALV-E的结构、活性调控以及对宿主功能的影响

禽白血病病毒E亚群(ALV-E)是整合在鸡基因组中的内源性逆转录病毒元件。近年来，随基因组测序的深入，许多新的ALV-E被发现，但关于ALV-E对宿主的影响尚不清楚。本文对ALV-E的结构及其功能进行总结，阐述了ALV-E转录启动活性的调控以及ALV-E整合位置的结构特征，最后讨论了ALV-E对宿主功能的影响，为深入探究禽内源性白血病病毒的宿主功能及其表达调控机制提供参考。     

禽白血病的研究进展

禽白血病是最先被人们关注并研究的鸡肿瘤性疾病之一。禽白血病病毒是目前已知的唯一拥有外源性和内源性重复活性的逆转录病毒。文章对禽白血病的相关研究情况进行总结概括,系统阐述了禽白血病的病原特征,包括目前发现的基因组、亚群及同源性的差异,以及常见临床症状、传播途径、流行情况、常用实验室诊断方法、疫苗情况、防制措施,为该病的深入研究和防控提供参考。     

动物基因转移技术--逆转录病毒载体法研究进展

本文概述了逆转录病毒的发现以及国内外发展状况,逆转录病毒勒体同其它方法比较的突出优点,同时介绍了逆转录病毒的定义和生活周期,反转录过程和整合过程,重点介绍了逆转录病毒载体的构建原理。     

逆转录病毒载体及其在动物病毒病的研究进展

逆转录病毒系统由于其病毒的高感染效率,在RNA干扰中的应用越来越多,在对基因功能的研究中起了很大的作用.逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,由逆转录病毒载体、包膜蛋白载体和包装细胞系组成.逆转录病毒载体具有基因组结构简单,便于基因操作、转染效率高、容量较大、宿主范围广、易于分离等优点,在外源基因表达、基因...     

miRNA在J亚群禽白血病中的研究进展

J亚群禽白血病病毒是一种高致癌性逆转录病毒,可引发鸡白血病及各种肿瘤性疾病。由于其传播方式的复杂性以及逆转录病毒的特征,目前尚未研制出有效的疫苗来解决J亚群禽白血病病毒给家禽养殖业带来的巨大经济损失。miRNA是一种小的内源性非编码RNA,在调节包括肿瘤发生在内的各种生物过程中发挥着重要作用,据推测,其最终可能有助于肿瘤癌细胞的诊断和治疗。近年来,一些研究已经证明许多细胞miRNA在肿瘤的发展和进展中发挥关键的致癌和肿瘤抑制作用。然而,关于miRNA在由J亚群禽白血病病毒诱导的肿瘤形成的潜在作用却鲜有报道。文章结合禽白血病的致病机制、传播方式,以及miRNA在肿瘤性疾病上的差异表达,对miRNA在J亚群禽白血病上的研究进展进行总结。     

用逆转录病毒法制作鸡输卵管生物反应器的研究

本文综述了鸡的生物反应器和逆转录病毒法的研究，目前逆转录病毒法是制作鸡生物反应器的最合适的方法。     

miR-16逆转录病毒载体的构建与表达检测

为了探明miR16在体细胞重编程过程中的作用机制,构建小鼠miR-16逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠miR16的相关序列,从小鼠基因组中扩增miR-16核心序列并将其连接到p MD18-simple载体,对重组质粒进行双酶切回收目的片段。将目的片段与p MXs逆转录病毒载体连接,经过酶切、PCR和测序鉴定,最终构建逆转录病毒载体miR16-p MXs;采用脂质体法将miR16-p MXs转染plat-E细胞,以包装逆转录病毒颗粒;用逆转录病毒颗粒侵染小鼠胚胎成纤维细胞,在侵染后的第5天,提取被侵染细胞的总RNA,反转录后获得cDNA,并采用q PCR方法检测侵染前后细胞中miR-16的相对表达量。结果显示,被逆转录病毒侵染后,小鼠成纤维细胞中miR-16的相对表达量比侵染前约提高1 460倍。结论:成功构建具有表达活性的microRNA16逆转录病毒载体,为进一步开展miR-16在细胞重编程中的作用机制的相关研究提供了依据。     

逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达

为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒（FMDV）衣壳前体基因（P1）和绿色荧光蛋白基因（EGFP）依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞（BHK-21）。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

小鼠miR367逆转录病毒载体的构建与检测

为了探明小鼠体细胞重编程过程中miR367的作用机制,试验构建小鼠miR367逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠miR367的相关序列,从小鼠基因组中扩增miR367并将其连接到pMD18-T载体,然后对重组质粒进行双酶切并回收目的片段。将目的片段与pMXs逆转录病毒载体连接,然后依次经过酶切、PCR筛选阳性克隆和测序,最终构建逆转录病毒载体miR367-pMXs;采用磷酸钙法将miR367-pMXs转染plat-E细胞,以包装逆转录病毒颗粒;用逆转录病毒颗粒侵染小鼠胚胎成纤维细胞,在侵染后的第5天,提取被侵染细胞的总RNA,逆转录后获得cDNA,并采用Q-PCR方法检测侵染细胞中的miR367表达量。结果表明,被逆转录病毒侵染后,小鼠胚胎成纤维细胞中miR367的相对表达量比侵染前约提高了170倍。上述结果表明,成功构建小鼠miR367的逆转录病毒载体,为开展体细胞重编程机制的相关研究提供依据。     

用逆转录病毒法制作鸡输卵管生物反应器的研究

本文综述了鸡的生物反应器和逆转录病毒法的研究，目前逆转录病毒法是制作鸡生物反应器的最适合的方法。     

重组逆转录病毒介导的肿瘤坏死因子基因转移与哺乳动物细胞表达

以构建的重组肿瘤坏死因子逆转录病毒载体ｐＺＩＰＴＮＦ ＤＮＡ转染Ｃｏｓ７细胞，获得了ＴＮＦα暂时性表达。采用ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀法，将ｐＺＩＰＴＮＦ ＤＮＡ导入了单向性逆转录病毒包装细胞ψ２，在Ｇ４１８选择下，克隆出了ψ／ｐＺＩＰＴＮＦ细胞系。该细胞可产生重组ＴＮＦ逆转录病毒。本研究利用ψ／ｐＺＩＰＴＮＦ细胞分泌的重组逆转录病毒连续传代感染ψ２或ＰＡ３１７细胞以及病毒交替感染ψ２和ＰＡ３１７细胞，     

重组逆转录病毒介导的neo~R基因在公鼠生殖系细胞的转移

将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基因转移研究。注射后 45 d,采集公鼠精液 ,进行精液品质与 PCR检测。结果表明 ,在优化的注射条件下 ,曲细精管内注射重组逆转录病毒后 ,不会干扰小鼠精子的正常发育能力 ,并能够将外源基因整合到精子基因组 ,从而首次通过重组逆转录病毒成功地实现了 neo R基因在公鼠生殖系细胞的转移     

动物慢病毒的研究进展及尚待解决的问题

一、马传染性贫血病毒(EIAV) EIAV的研究开拓了逆转录病毒的许多重要领域,这些包括:EIAV是第一个被阐明的引起动物疾病的病毒性病原,并首次建立了诊断试验;此病毒是第一个被证实由昆虫传播的逆转录病毒;它是第一个被描述在持续感染过程中有抗原变异发生;也是最早期研究疫苗预防的逆转录病毒之一。由于     

绵羊、山羊内源肺腺瘤病毒启动子甲基化修饰检测

为分析绵羊和山羊内源性肺腺瘤病毒启动子甲基化修饰状况,参照绵羊、山羊内源性肺腺病毒gag基因上游非编码区序列CpG岛设计特异性甲基化引物,采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测了5只绵羊和5只山羊胎儿的肺脏、皮肤、血液基因组内源性病毒基因启动子区甲基化情况.结果表明：山羊和绵羊肺脏、皮肤、血液基因组中均存在甲基化和非甲基化的内源性肺腺瘤病毒启动子.     

重组逆转录病毒载体的包装

将3.7kb的LacZ基因片段克隆到含标志基因Neo的逆转录病毒载体，pLXSN与pLNCX的多克隆位点，构建了含有LacZ基因的重组逆转录病毒载体pLLSN和pLNCL.在测定了G418对饥装细胞系PA317的最小致剂量后（最小致死剂量为0.3g/L），通过脂质体Lipofectin与磷酸钙2种介质，分别将2种重组逆转录病毒载体导入包装细胞系PA317进行包装，并以0.3g/L，的G418进行筛选，得到多个G418抗性克隆，经扩大培养，传代，分别得到包装pLLSN与pLNCL的2株阳性细胞，电镜下可见阳性细胞的培养上清中具有逆转录病毒形态特征的成熟病毒粒子，本0研究为运用逆转录病毒载体系统，解决转角因效率低的问题奠定了基础。