用逆转录病毒法制作鸡输卵管生物反应器的研究

本文综述了鸡的生物反应器和逆转录病毒法的研究，目前逆转录病毒法是制作鸡生物反应器的最适合的方法。     

用逆转录病毒法制作鸡输卵管生物反应器的研究

自80年代以来,人们对转基因鸡的方法进行了探索。已经运用的制作转基因鸡的方法有显微注射法、精子载体法、原生殖细胞法、逆转录病毒法。从目前世界各研究室的研究结果来看,逆转录病毒法是制作转基因鸡最有效、最成功的方法。所以在鸡的胚胎干细胞的筛选还未成功、基因打靶尚不可能的情况下,此法是制作鸡的输卵管生物反应器首选的方法。下面就鸡的生物反应器和逆转录病毒法分别作以综述。 1 鸡生物反应器的研究 从80年代以来随着转基因动物个体表达系统的研究,哺乳动物的乳腺生物反应器如鼠、牛、羊等已有成功的报道。作为禽类的生物反应器也已经起步,鸡是禽类中最常见、数量最多的。鸡蛋成分简单,由白蛋白、卵黄、卵壳组成,白蛋白又包括卵清蛋白、卵转铁蛋白、卵粘蛋白、溶菌酶,其中卵清蛋白最多可达重量比的65%,在产蛋母鸡输卵管管状腺体细胞总合成蛋白中占55%～60%,在成熟母鸡输卵管的管状腺体细胞中主要白蛋白的合成超过了总翻译能力的70%,卵清蛋白的高效合成过程促使研究者想到它的启动子,高效启动合成外源蛋白。     

逆转录病毒载体介导的转基因鸡研究进展

转基因鸡作为重要的经济动物和理想的生物反应器,具有广阔的应用前景。鸡基因组测序的完成加快了转基因鸡的研究和发展。病毒载体法是转基因鸡制备的主导方法之一,具有效率高和遗传稳定性良好的优势。本文对逆转录病毒载体特征、复制缺陷型病毒载体和复制整合双缺陷型病毒载体的优缺点及其介导的转基因鸡研究进行综述,展望人工核酸酶技术结合复制整合双缺陷型逆转录病毒载体在转基因鸡研究领域的应用前景。     

鸡输卵管生物反应器的研究进展

目前鸡输卵管生物反应器的研究集中在以卵清蛋白调控区来调控外源基因的表达。鸡输卵管生物反应器的研究以输卵管细胞的培养为起点 ,再研究外源基因在输卵管内定位表达的可能性 ,最后制作转外源基因能稳定遗传的转基因鸡。本文对鸡输卵管生物反应器研究作一综述 ,提出了存在的问题并作以展望。     

CRISPR/Cas9 knock-in介导的输卵管特异性表达转基因鸡研究进展

利用动物生物反应器生产重组蛋白是一种具有应用前景的生物技术。鸡输卵管生物反应器是理想的动物生物反应器之一,其优点在于表达的外源蛋白能够分泌到蛋清中,可避免蛋白提取过程中对鸡本身造成伤害,同时蛋清成分简单,便于后期的纯化。目前利用慢病毒结合原始生殖细胞(PGCs)制备转基因鸡被认为是最可行的方法,但因外源基因随机整合且生殖系传递效率较低,使转基因鸡研究受到技术上的限制。而2013年问世的CRISPR/Cas9基因敲入(CRISPR/Cas9 knock-in)技术能够使外源基因精准定向插入基因组特异性位点,这对生产输卵管特异性转基因鸡具有重大意义。文章综述了鸡输卵管反应器的研究进展、CRISPR/Cas9 knock-in技术在输卵管特异性表达转基因鸡研究和鸡育种领域的应用现状,并指出了目前存在的问题和相应的解决办法。     

鸡输卵管生物反应器的研究进展

随着人们对营养类蛋白、医用类蛋白需求量的增长,建立经济高效的生产技术平台成为转基因动物研究的重要领域,鸡输卵管生物反应器作为转基因鸡重要的应用器官得到越来越多的重视。目前,构建用于携带外源基因的高效表达载体和良好的导入方法是制备能够稳定生产外源基因转基因鸡的关键技术,文章对鸡输卵管生物反应器的研究进展进行了综述,并提出了存在的问题。     

转基因动物的生物反应器

本文介绍了啮齿类，反刍类，猪，鸡等各种动物的转基因生物反应器，动物血液，器官等不同组织／器官的生物反应器，生物反应器的途以及启动子，增强子，内含子，ＭＡＲｓ，ＬＣＲ反式作用因子等调控元件的作用，并对生物反应器存在的问题，应用前景及我国目前的研究现状作了探讨。     

输卵管生物反应器的研究和应用前景

基因工程是生命科学的重要一环,输卵管生物反应器是转基因鸡的理想反应器,为将来鸡育种、药用蛋和免疫球蛋白(IgY)生产开辟了广阔的前景。由于禽的繁殖方式特殊,它也为转基因技术研究提供了又一途径。     

科技

<正>家蚕生物反应器家族再添新成员近日,农业农村部向中国农业科学院生物技术研究所颁发了重组杆状病毒rBmNPV表达的鸡γ-干扰素和猫ω-干扰素两项生产应用安全证书,标志着利用家蚕生物反应器生产动物用基因工程制品范围得到进一步拓宽。生物所微生物蛋白质工程创新团队通过多年研究,成功实现了鸡γ-干扰素在家蚕生物反应器中的重组表达。该产品具有生物活性好、生产成本低(每粒蚕蛹可产千万IU的干扰素、每只鸡全龄应用的直接成本约1分钱)、可     

转基因鸡的制作及研究展望

鉴于转基因鸡在输卵管生物反应器、抗病育种及发育生物学等多种领域的广阔前景,鸡的转基因技术正受到广泛的关注.本文主要就转基因鸡的研究进展、制作方法和存在的问题进行了介绍,并对转基因鸡的前景进行了分析.     

河南省4种地方品系鸡的RAPD分析

应用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD) 技术分析河南省4个地方鸡的品系,固始鸡快羽G_K系、固始鸡慢羽G_M系、矮小型绿壳蛋鸡、黄麻羽丝毛乌骨鸡的遗传变异。用186个随机引物对4个鸡种基因组DNA池扩增筛选,40个引物产生多态性。此40个引物经重新优化反应体系后,对120个个体的基因组DNA 进行RAPD分析。40个引物共产生387种扩增片段,扩增产物片段的长度大小在100～2220 bp范围内。利用电泳分析数据分别计算4个品系群体之间的遗传相似系数和遗传距离指数,结果4个鸡种的亲缘关系与它们的引种情况基本一致。同时也证明了RAPD技术可以作为分子标记,很好地检测鸡种群内的遗传变异及区分不同鸡品系。     

The susceptibility of chicken kidney and oviduct organ cultures to a vaccine strain of avian infectious bronchitis virus.

The minimal infectious dose of the H52 strain of infectious bronchitis virus for organ cultures of oviduct and kidney was compared in chickens of different ages. Organ cultures of oviduct were found to be highly susceptible to infection regardless of the age of chicken and no difference in susceptibility could be demonstrated between cultures of the magnum and uterus regions of the mature oviduct. Kidney organ cultures were less susceptible and resistance to infection increased significantly (P less than 0.001) with the age of the chicken from which cultures were prepared.     

猪ESR基因一个外显子片段的克隆与序列分析

参考人、鸡、鼠的ESR基因序列，设计一对引物，采用PCR技术扩增出猪ESR基因一段DNA片段，将该片段克隆到pGEM-T Easy质粒中，重组质粒用PCR扩增和酶切分析进行阳性克隆鉴定，然后测定核苷酸序列，并推导其氨基酸序列。将测定的猪ESR基因的部分序列（332bp)与人、鼠、鸡的序列进行比较，结果表明：猪的核苷酸和氨基酸序列与人、鼠、鸡相比，同源性分别为90．06％和86．36％，85．54％和88．18％，74．10％和71．82％，显示了强的保守性，猪的核苷酸序列与人、鼠、鸡相比存在着4处特有变异，氨基酸序列aa25-30存在高变异区。     

bcl—2在鸡马立克氏病肿瘤中的表达

用来克亨SPF鸡复制马立克氏病（Marek‘s disease,MD)肿瘤模型，取肿瘤和相应正常组织，液氮保存。AGPC（Acid Guanidinium Thiocyanate-Phenol-Chloroform)法的取组织总RNA（TRNA），紫餐测定其浓度，甲醛变性胶电泳观察其纯度。将一个含鸡bcl-21.2kb片段的质粒（PTTCB1），经转化扩增，提取质粒DNA，限制性内切酶（RE）消化，回收纯化bcl-2片段，放射性α^32P标记，制成探针。通过Northern分子杂交检测MD肿瘤组织中bcl-2的表达，并与相应的正常组组织比较。结果：鸡MD肿瘤组织和相应正常组织中均有bcl-2的表达；MD肿瘤组织中bcl-2 的表达显著高于相应的正常组织。结合已进行的凋亡研究表明,bcl-2表达产物通过阻遏细胞凋亡促进MD淋巴瘤的形成。     

Comparative sensitivities of oviduct and tracheal organ cultures and chicken embryo kidney cell cultures to infectious bronchitis virus

In vitro studies with organ (oviduct and trachea) and chicken embryo kidney cell cultures were attempted to assess the pathogenicity of locally isolated infectious bronchitis virus (IBV-P:120) initially isolated from the oviduct of young chicks. In oviduct cultures infected with IBV, ciliary movements decreased as early as 24 hours postinoculation (PI), and on the 6th day ciliary movements ceased completely. Cytopathic changes were also noticed. Immunofluorescent antigen was detected from 1 to 6 days PI, the maximum being on the 3rd day. The characteristic microscopic changes in the oviduct explants were reduced by 24 hours PI and had completely ceased on the 5th day. Cytopathic effect and immunofluorescent antigen were present from 1 to 8 days PI, being maximum on the 5th day. Histological changes marked by loss of cilia, rounding of the epithelial cells, degeneration, and sloughing were detected from 2 to 8 days PI. Low-embryo-passaged (EP-7) IBV did not produce cytopathic effect on the chicken embryo kidney cell cultures. On the contrary, high-embryo-passaged (EP-14) virus produced cytopathic effect at the third tissue-culture-passage level.     

Differences in the tissue tropism to chicken oviduct epithelial cells between avian coronavirus IBV strains QX and B1648 are not related to the sialic acid binding properties of their spike proteins

The avian coronavirus (AvCoV) infectious bronchitis virus (IBV) is a major poultry pathogen. A characteristic feature of IBV is the occurrence of many different strains belonging to different serotypes, which makes a complete control of the disease by vaccinations a challenging task. Reasons for differences in the tissue tropism and pathogenicity between IBV strains, e.g. a predilection for the kidneys or the oviduct are still an open question. Strains of the QX genotype have been major pathogens in poultry flocks in Asia, Europe and other parts of the world. They are the cause of severe problems with kidney disease and reproductive tract disorders. We analysed infectivity and binding properties of the QX strain and compared them with those of the nephropathogenic strain B1648. As most IBV strains do not infect permanent cell lines and show infection only in primary chicken cells of the target organs, we developed a culture system for chicken oviduct explants. The epithelial cells of the oviduct showed a high susceptibility to infection by the QX strain and were almost resistant to infection by the nephropathogenic B1648 strain. Binding tests with isolated primary oviduct epithelial cells and soluble S1 proteins revealed that S1 proteins of two IBV strains bound with the same efficiency to oviduct epithelial cells. This attachment was sialic acid dependent, indicating that the sugar binding property of IBV spike proteins is not the limiting factor for differences in infection efficiency for the oviduct of the corresponding viruses.     

鸭源新城疫病毒分离株的生物学特性鉴定

从河北某鸭场产蛋锐减而无其他典型新城疫症状的高抗体蛋鸭群中分离到1株病毒(命名为HB/1/06/Dk).经过鉴定,该分离株具有血凝性,可被新城疫病毒(NDV)标准阳性血清所抑制,不能被禽流感病毒(AIV H5与H9亚型)阳性血清和减蛋综合征病毒(EDSV)标准阳性血清抑制;该病毒致死鸡胚的平均时间(MDT)为67.2 h,1日龄SPF雏鸡的脑内接种致死指数(ICPI)为0.86,表明该病毒属中等毒力毒株.