ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒

建立了ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的方法,其最佳反应条件是：包被液为０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ９．６的碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液（ＣＢＳ）,免疫ＩＢＶ ＩｇＧ的最佳工作浓度为１：８０;抗原的最佳浓度为１：８００;封闭剂选用０．０１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４含３０ｍＬ／Ｌ白明胶的ＰＢＳ,Ｂ－ＡｇＧ和ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２００。用ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２０     

氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

以人工合成的氯霉素－牛血清白蛋白（ＣＡＰ－ＢＳＡ）为包被抗原,氯霉素（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ,ＣＡＰ）为竞争的半抗原,两者与一定量的抗ＣＡＰ单抗（ＣＡＰ－ＭｃＡｂ）反应。实验结果表明,理想的包被抗原浓度为１．２５μｇ／ｍｌ,抗ＣＡＰ－ＭｃＡｂ工作浓度为１：１２０００,酶标二抗工作浓度为 １： ５０００,可测最适范围为 １ｎｇ／ｍｌ－１００ｎｇ／ｍｌ,最小检测量为０．１ｎｇ／ｍｌ,批内和批间变异系数分别为３． ６２％和 ５． １９％。得到回归方程 ｙ ＝１．２７３０－ ０．６７４５ｘ（ｒ２＝ ０． ９７７９）和标准曲线,从而建立了快速定量测定 ＣＡＰ含量的间接竞争酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。整个测定时间为６小时。     

嗜水气单胞菌与迟缓爱德华氏菌亚单位二联疫苗对小鼠的免疫效果

将嗜水气单胞菌（Ａｈ）Ｊ－１株的ＨＥＣ毒素和胞外蛋白酶（ＥＣＰ）分别与迟缓爱德华氏菌（Ｅｔ）３８株的脂多糖（ＬＰＳ）及脱毒多糖（ＰＳ）偶联,制成３种亚单位二联疫苗;ＨＥＣ－ＰＳ、ＨＥＣ－ＬＰＳ。将它们与ＡｈＪ－１和Ｅｔ３８全菌灭活疫苗一同分别免疫小鼠,并设注射ＰＢＳ对照组,检测各组小鼠体液免疫及细胞免疫水平。结果显示,用间接ＥＬＩＳＡ、溶血抑制和全菌凝集试验检出这３种亚单位疫苗的抗体水平无明显差异     

应用葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测鸭肝炎病毒的研究

用提纯的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）免疫家兔制备高免血清，常规方法提取ＩｇＧ，与１％葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）阳性菌悬液混合，以ＰＨ７．２０．２ｍｏｌ／ＬＰＢＳ作缓冲液，制成鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）ＳＰＡ协同凝集试验（ＳＰＡ－ＣｏＡ）诊断试剂，同时制备阴性对照试剂。用ＳＰＡ－ＣｏＡ检测人工感染致死的雏鸭肝脏、含ＤＨＶ强毒的鸭胚液、适应鸡胚的疫苗毒鸡胚尿囊毒的检出率均为１００％。用ＳＰＡ－ＣｏＡ检测强毒时，样品     

禽流感RT—PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法,应用此法对鸡胚培养ＡＩＶ尿囊液,ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩莠试验和电镜技术作了对比,特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）,传染性氏囊病病毒（ＩＢＤ     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒变异株的比较研究

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）变异株Ｈ９５提纯样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ,证明Ｈ９５株单抗ＤＥ７和Ｍ４１株单抗６ＤＨ８均能识别Ｈ９５株５４０００蛋白多肽。采用单抗、多抗介导间接ＥＬＩＳＡ试验表明,Ｈ９５毒株能与抗ＩＢＶＭ４１Ｎ蛋白单抗６ＤＨ８和ＩＢＶＭ蛋白单抗ＭＣ发生反应,也能与抗Ｍ４１、Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ、Ｔ、Ｈ５２、Ｎ１１５和分离株Ｃ９００１、ＤＬＺ９１１１的多抗血清反应,同时抗Ｈ９５株的４株单抗、多抗血清也能与上述毒株反应。卵磷脂酶Ｃ处理的Ｈ９５株的血凝活性能被相应的Ｈ９５株的单克隆抗体和高免血清所抑制,也能被Ｍ４１单抗和高免血清所抑制。通过ＲＴ－ＰＣＲ获得了Ｈ９５毒株的免疫原基因Ｓ１,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＩＢＶ的Ｓ探针检测呈阳性。     

荒漠猫血液蛋白质和酶多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对５只荒漠猫（Ｆｅｌｉｓｂｉｅｔｉ）血液中的血红蛋白（ＨＢ），运铁蛋白（ＴＦ），亲血色蛋白（Ｈｐ）以及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），淀粉酶（ＡＭＹ），酯酶（ＥＳ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的多态性进行了研究。结果发现，被检荒漠猫的ＴＦ，Ｈｐ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｓ－ＥＳ和Ｓ－ＡＬＰ共５个基因座存在多态性，ＨＢ，ＲＢＣ－ＡＭＹ，Ｓ－ＡＭＹ，Ｓ－ＬＤＨ，ＲＢＣ－ＥＳ和ＲＢＣ－ＡＬＰ共６个基因座为单态，表明荒漠猫的血液蛋白质和酶具有颇大的遗传变异性     

马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究

本文用混合酸酐法和活化酯法合成４各马杜霉素结合抗原。用其中一和免疫原,。用其中一种作名单原,免疫家兔产生抗体;用其余三种包被原,探讨不同包被原用于ＥＬＩＳＡ检测马杜霉素残留时,对其灵敏度和方法回收率的影响。试验结果表明,马杜霉素结合抗原免疫家兔制备的抗体对马杜霉素具有很高的特异性,亲合性和选择性。在间接免疫ＥＬＩＳＡ中,使用Ｍ－Ｃ６－ＯＶＡ（ＡＥ）、Ｍ－ＯＶＡ（ＭＡ）和Ｍ－ＯＶＡ（ＡＥ）作包被原时     

棘球蚴囊液抗原A和B在酶联免疫吸附试验中的应用比较

用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵边续沉淀法从绵羊棘球囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原     

氯霉素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

本研究旨在建立检测动物源性食品中氯霉素（CAP）残留的间接竞争ELISA（ci-ELISA）方法。在CAP羟基（-OH）位点上引入活性基团羧基（-COOH）得到氯霉素半琥珀酸酯（CAP-HS）;采用混合酸酐法将CAP-HS分别与BSA和OVA偶联合成人工免疫原CAP-HS-BSA和包被抗原CAP-HS-OVA,用CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和ci-ELISA筛选细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备抗CAP单克隆抗体;以CAP单克隆抗体为基础、CAP-HS-OVA为检测原建立ci-ELISA方法。结果显示,试验成功筛选获得一株稳定分泌抗CAP抗体的杂交瘤细胞株（2C4）,抗体效价为4.8×10^-5,利用2C4腹水优化得到ci-ELISA最佳试验条件：0.4 μg/mL CAP-HS-OVA 37℃包被2 h;5%猪血清37℃封闭1 h;1：6.4×10⁴ CAP单克隆抗体37℃孵育15 min;1：1 000羊抗鼠酶标二抗（GaMIgG-HRP）37℃孵育30 min;室温显色9 min。绘制的CAP残留ci-ELISA标准曲线为典型的S型,与4参数logit拟合曲线相吻合,半数抑制浓度（IC₅₀）为0.53 ng/mL。添加回收试验结果显示,阴性鱼肉、牛奶的回收率分别为93.3%~96.6%和93.7%~96.8%,批内变异系数分别为2.3%~5.0%和2.2%~4.6%,批间变异系数分别为2.7%~4.1%和2.3%~3.6%。HPLC对比试验结果显示,ci-ELISA与HPLC的测定结果无显著差异。本试验成功建立了CAP的ELISA残留检测方法,该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度,可满足动物源性食品中CAP残留检测要求。     

磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究

试验旨在研究磺胺二甲嘧啶（SM2）免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。     

Preparation of protein-steroid conjugates and antisera against oestradiol-17

A conjugate of oestradiol-17β and bovine serum albumin (BSA) has been prepared by the mixed anhydride method. The conjugate was characterized by u.v.-analyses and immunoelectrophoresis, and the number of moles of oestradiol-17β per mole of BSA was found to be 25. The conjugate was used for immunization of two sheep and one rabbit in order to elict antisera against oestradiol-17β. Antibodies could be detected in all three animals after 5–16 weeks depending on the route of immunization. The antiserum from one sheep could be used in a radioimmunoassay system for oestradiol-17β in a dilution of 1:5000 and was found to cross-react with oestrone and oestradiol-17α to a lesser extent than another antiserum against oestradiol-17β.     

氨基脲人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

目的合成氨基脲人工抗原并制备其多克隆抗体。方法以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),并采用碳化二亚胺法和混合酸酐法将其分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成氨基脲人工抗原。以氨基脲人工抗原(CPSEM-BSA)为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA法测定其抗体效价。结果经薄层层析、红外光谱和元素分析等方法鉴定合成半抗原即为CP-SEM。紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明人工抗原合成成功。免疫获得抗氨基脲的多克隆抗体,其抗体效价为1:64000。结论氨基脲人工抗原合成成功,并获得抗氨基脲的多克隆抗体。     

短裸甲藻毒素单克隆抗体的制备及其鉴定

采用混合酸酐法将短裸甲藻毒素(brevetoxins,BTX)分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清蛋白(BSA)偶联制备人工抗原。以BTX-BSA作为免疫抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合-ELISA筛选抗短裸甲藻毒素的单克隆抗体,并对其特异性和灵敏性进行了鉴定。结果获得了1株可分泌短裸甲藻毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B4,该株杂交瘤细胞腹水抗体效价达10-5,与其他类似物没有交叉反应。该抗体为建立短裸甲藻毒素免疫学检测方法奠定了基础。     

沙丁胺醇人工抗原的合成与鉴定

通过沙丁胺醇(SAL)与琥珀酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,用EDC法将SAL琥珀酸衍生物偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SAL和包被原OVA-SAL,用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SAL免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-SAL的UV与BSA、SAL的相比发生了改变;通过UV分析,SAL-HS与BSA的分子结合比约为7.2∶1;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

氯霉素化学发光酶联免疫检测方法的建立

在常规酶联免疫法(ELISA)的基础上,用辣根过氧化物酶标记氯霉素与牛血清白蛋白偶联后免疫小鼠制得的单克隆抗体,并优化抗体工作浓度、反应时间等试验参数,建立了一种简便、快速、准确的氯霉素(CAP)残留一步式化学发光酶联免疫检测方法。结果表明:该方法最佳检测范围为20～1620 pg/mL,IC50值达59.911 pg/mL,检测限为9.3 pg/g,可检出国际规定的CAP残留标准限量值以下的残留量。与常规ELISA检测方法相比,不仅提高了检测限和灵敏度,而且反应时间缩短了60 min。采用一步式化学发光酶联免疫检测氯霉素残留,可以大幅度缩减检测时间,更符合快速检测的要求。     

中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究

为探讨牛皮消多糖（CAP）对体外抗新城疫病毒（NDV）能力的影响，本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖，通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测，采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度，多糖的安全浓度统一为625 μg/mL，选择安全浓度范围内的（39.06~625 μg/mL）5种浓度的各级多糖，用3种加药方式（先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药）检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示，先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP₅₀、CAP₃₀、CAP_t、CAP₈₀和CAP₇₀均能显著抑制NDV感染CEF的能力，两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%；先加多糖后接病毒组CAP₅₀、CAP₃₀能显著抑制NDV感染CEF的作用（P<0.05），阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%，其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性，其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP₅₀及CAP₃₀的抗NDV活性较强，可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。     

牛乳中α-酪蛋白完全抗原的合成及多克隆抗体的制备

In order to gain polyclonal antibody against α-casein, the commercial α-casein were linked with carrier protein BSA and OVA, respectively， as immunogen (α-casein-BSA) and coating antigen (α-casein-OVA). The reaction products were identified by nondenaturing PAGE and SDS-PAGE. New Zealand White rabbits were immunized with the immunogen (α-casein- BSA) to produce polyclonal antibody. The results showed that the titer of the antibody was 1∶256000 and had high cross reactivity with κ-casein. It could be used to detect the total amount of α-casein and κ-casein in milk.     

Hypertonic saline/dextran resuscitation of dogs with experimentally induced gastric dilatation-volvulus shock.

We investigated small-volume (5 ml/kg) 7% NaCl in 6% dextran 70 (HS/D70) as an alternative to large-volume (60 ml/kg) 0.9% NaCl for treatment of experimentally induced canine gastric dilatation-volvulus (GDV) shock. The stomach was surgically displaced and then distended with an intragastric balloon in 11 dogs anesthetized with pentobarbital. All dogs were subjected to GDV for 180 minutes before partial decompression and resuscitation. Hemodynamic values, blood gas values, and plasma volume were measured during control, shock, and resuscitation periods. Resuscitation started with 1 group (n = 6) receiving 5 ml of HS/D70/kg, iv, over 5 minutes, and the other group (n = 5) receiving 60 ml of 0.9% NaCl/kg, IV, over 60 minutes. Both groups received a surgical maintenance dosage (20 ml/kg/h) of 0.9% NaCl after initial resuscitation. Resuscitative effects of small-volume HS/D70 were similar to large-volume 0.9% NaCl during the first hour of treatment; however, cardiac output was significantly higher in the HS/D70 group for the last 2 hours of resuscitation. Changes in heart rate, left ventricular pressure change, and systemic vascular resistance appeared to be responsible for improved perfusion. Mixed venous oxygen partial pressure data supported improved perfusion in the HS/D70 group. Packed cell volume remained higher in the HS/D70 group, indicating less hemodilution and improved oxygen delivery. Resuscitation of this GDV-induced shock model was better sustained with small-volume HS/D70, compared with conventional large-volume 0.9% NaCl.