饲料中己烯雌酚ELISA检测方法的建立

为了建立一种饲料中己烯雌酚(DES)残留的检测方法,试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测,并对该方法的检测限、准确度、精密度和特异性等参数进行考察。结果表明:本试剂盒的线性工作范围为0.1~8.1μg/kg,IC50浓度为0.417μg/kg,对饲料中DES的检测限为5μg/kg;对饲料样品中DES的添加回收率范围为83%~107%,批内变异系数≤5.7%,批间变异系数≤6.3%;与DES类似物无交叉反应。本研究所建立的ELISA检测方法具有简单、灵敏、准确等特点,适用于饲料中DES残留的快速检测。     

磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit).研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9 μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;试剂盒在4℃可保存6个月.     

雌二醇残留ELISA检测试剂盒的研制

采用包被单克隆抗体直接竞争ELISA法研制一种检测食品中雌二醇残留的ELISA试剂盒。将不同浓度的雌二醇添加到鸡肉样品中,用制备的试剂盒检测雌二醇残留,结果样品的加标回收率在73.1%～102.7%之间,变异系数<20%。对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定,结果表明:研制的试剂盒最低检出限为0.5μg/L;在4℃条件下试剂盒有效期可达6个月。用ELISA试剂盒检测雌二醇残留可批量分析样品,具有快速、简便、灵敏、经济的特点,可广泛应用于食品中雌二醇的监测。     

阿莫西林残留ELISA检测试剂盒质量验证

为了对用于检测牛奶中阿莫西林残留的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒进行质量验证,试验采用不同梯度浓度的方法进行研究。结果表明:阿莫西林标准品浓度在0.5~13.5μg/L范围内具有较好线性关系,50%竞争抑制浓度为2.0μg/L,试剂盒对牛奶中阿莫西林的最低检测限为4.6μg/L。牛奶中分别添加5.0,10.0μg/L的阿莫西林标准品,回收率在72.2%~108.7%之间,批内变异系数小于8.9%,批间变异系数小于11.9%;试剂盒可在37℃条件下保存7 d,可同时检测牛奶中阿莫西林、青霉素、氨苄西林、萘夫西林等药物的残留总量。与仪器方法进行实际样品检测相比,ELISA方法检测结果具有良好的可信度。     

检测动物组织中金刚烷胺残留的酶联免疫试剂盒的研制

通过对金刚烷胺分子结构进行改造,制备得到了金刚烷胺半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性单克隆抗体。在筛选金刚烷胺单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中金刚烷胺残留的试剂盒。该试剂盒工作范围为0.5~40.5μg/L,线性回归方程为y=-2.069x+0.493,IC_(50)为2.1μg/L,相关系数R2为0.998;试剂盒检测限为0.25μg/kg,金刚烷胺回收率在82.5%~91.0%,批内、批间变异系数均小于10%;与阿莫西林、苯唑西林、头孢噻呋三种类似结构药物均无交叉反应。该试剂盒灵敏度高、检测限低、特异性强、操作简便,可广泛用于动物组织中金刚烷胺残留量的测定。     

苏丹红Ⅰ和对位红残留检测ELISA试剂盒的研制

针对苏丹红I和对位红的芳香胺共同化学结构特点,采用琥珀酸酐法人工合成苏丹红I免疫原,建立了快速检测苏丹红I和对位红残留的酶联免疫方法。同时对其灵敏度、准确度、特异性、基质效应性等技术指标进行测定。结果表明:该试剂盒与其它系列苏丹红均无交叉反应;试剂盒检测相关系数R2=99.56%,试剂盒最低检出限为0.1μg/L,半数抑制率IC50=0.599μg/L;油基质和水基质的辣椒样品的平均添加回收准确率分别为79.9%和78.2%;不同基质对该试剂盒的检测结果影响不大。该试剂盒适合于苏丹红I和对位红残留的快速检测,具有较高的推广价值。     

化学发光免疫试剂盒检测猪肉中呋喃西林代谢物的残留

为了快速检测猪肉中呋喃西林代谢物残留量,试验采用自主研发的以磁性微球为固定相的化学发光免疫试剂盒,并对其方法学进行评价及与高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS法)检测结果进行比较分析。结果表明:采用化学发光免疫试剂盒测定猪肉中呋喃西林代谢物的灵敏度为0.331μg/kg,精密度较好,最低检测限为0.077μg/kg,与呋喃西林原药的交叉反应率为8.9%,与其他类似物的交叉反应率均0.1%,平均回收率为92.7%~104.8%,与HPLC-MS/MS法检测样本的阴性和阳性结果一致。说明该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等特点,适用于现场快速检测猪肉中呋喃西林代谢物的残留。     

用酶联免疫吸附法测定鸡肉、鸭肉中金刚烷胺药物残留

本实验用酶联免疫吸附法测定鸡肉、鸭肉中金刚烷胺药物残留量。实验结果表明,试剂盒灵敏度为0.27μg/L;方法最低检测限为0.5μg/kg;在添加浓度为0.5μg/kg、1.0μg/kg、1.5μg/kg的空白鸡肉、鸭肉中的回收率均在84%～112%之间;各添加浓度的批内、批间变异系数均小于12%,该方法具有较好的准确度和精密度。因此可用酶联免疫吸附法对鸡肉、鸭肉中金刚烷胺药物残留先进行初步筛选,对疑似阳性样品再用仪器法确认。     

检测利巴韦林残留的化学发光酶免疫法建立

为了建立检测利巴韦林残留的化学发光酶免疫方法,对酶标抗原与磁标抗体的最佳稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的检测限、准确度和精密度进行评价。结果显示:50%抑制浓度(IC_(50))为2.263μg/L,线性范围是0.409～12.527μg/L;在动物组织、兽药、饲料中的检测限为2.0μg/kg,样本添加回收率为83.6%～94.7%,批内、批间相对标准偏差均10%;对实际样本进行检测,与液相色谱-质谱/质谱法的结果无显著性差异(P0.05)。该方法灵敏度高、操作简便,可广泛用于动物组织、兽药、饲料中利巴韦林残留量的测定。     

牛奶中氟喹诺酮类药物残留同步快速检测的酶联免疫吸附法研究

建立同时快速检测牛奶中环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星六种氟喹诺酮类药物残留的酶联免疫吸附法。ELISA法的操作在20℃～25℃下进行,以50%抑制浓度、最低检测限反映方法的灵敏度,同时进行加标回收试验。结果表明,本文所建立的ELISA法的最低检测限为1.48μg/L,50%抑制浓度的范围在0.254～0.361μg/L;在环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星药物添加浓度为5、25、50μg/L时的回收率为84.58%～115.92%,批内变异系数均小于15.0%,批间变异系数均小于16.0%。本方法简便快捷,灵敏度、准确度和精密度高,适用于牛奶中FQs残留的同时快速检测。     

新型喹乙醇残留标志物人工半抗原的设计及其在动物组织残留检测中的应用

为提高酶联免疫方法测定喹乙醇残留标志物(MQCA)的检测性能,设计了一种新型MQCA人工半抗原,该半抗原既完整保留MQCA分子特征性基团和结构,又具有便于和蛋白质载体偶联的基团-NH2。通过三步化学反应合成该半抗原,将其与蛋白质载体偶联成为免疫抗原后,进一步制备特异性抗体,研制了MQCA酶联免疫试剂盒,灵敏度高,特异性好,IC50为1.94μg/L。建立了测定动物性产品中MQCA残留量的直接竞争酶联免疫法,测定猪肝、猪肉、鸡肉、鸡蛋中MQCA的检测限分别为0.42、0.23、0.28、0.28μg/kg。猪肉中不同添加浓度MQCA(1,2,4μg/kg)的回收率为70%~97%;批内、批间变异系数均低于12%。本试剂盒可同时快速检测大批样品,有望在MQCA残留检测中发挥重要作用。研究有助于指导小分子药物半抗原的合理设计,为现有的半抗原设计方法提供新的理念和思路。     

检测磺胺类7种药物ELISA试剂盒的研制

以SAs-BSA的偶联物作为抗原免疫Balb/c小鼠,制备磺胺类药物单克隆抗体。与7种磺胺药(SD、SMM、SMZ、ST、PST、SMT、SPD)有很高的交叉反应性,并建立一种可检测样品中的SAs类药物的间接竞争ELISA法。试剂盒灵敏度为2.14μg/L,对SAs类药物的回收率在56.2%～72.1%之间,变异系数均20%,研制的ELISA试剂盒可进行磺胺类药物多残留快速检测。     

进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立

为了建立进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗残留快速检测技术,试验建立间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行检测。结果表明:包被抗原的最适质量浓度为20.0μg/mL,抗体的最佳稀释度为1∶5 000,半抑制浓度(IC50)=2.1 ng/mL;该方法的最低检测限达0.05 ng/mL,与沙丁胺醇和莱克多巴胺的交叉反应率分别为8.28%、7.75%,平均加标回收率为94.52%。该方法灵敏度高,样品前处理简便、快速,适用于进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗残留的大批量现场检测。     

进出口植物产品中甲胺磷残留量酶联免疫检测试剂盒的研究

采用直接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)对进出口植物产品中甲胺磷残留量进行快速筛选检测。将O,S-二甲基硫代磷酰氯与牛血清白蛋白偶联作为免疫原,免疫试验兔获得特异性抗体,并成功建立了甲胺磷残留直接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。结果:检测线性范围0.95~500μg/mL,检测低限为1μg/mL;大米、青菜、苹果、西红柿和黄瓜的加标回收率为72.6%~94.3%;重现试验变异系数为5.4%;试剂盒贮藏在4℃5个月和30℃7d质量稳定。表明本试剂盒具有操作简便、准确、快速、灵敏等特点。     

酶联免疫法检测饲料中氯霉素的方法条件研究

酶联免疫反应检测用试剂盒是利用免疫特异性竞争原理,对饲料中氯霉素的残留进行定量检测。氯霉素作为抗生素广泛应用在养殖领域,主要是添加在饲料中使用,而这种药物长期使用会残留于动物体内,造成动物性食品中氯霉素残留量超标,进而对人体的健康造成危害。文章以酶联免疫方法检测对检测饲料中氯霉素含量加以探讨,试验证明,此方法具有操作简单、灵敏度高、重复性好,检测时间短等特点;标准曲线r值可达到0.9981,回收率≥93.45%,最低检出限≤0.05μg/kg,离散系数(CV值)≤3.6%。     

酶联免疫法检测饲料中孔雀石绿的探讨

目前饲料中违禁药物孔雀石绿的检测方法主要是酶联免疫法、液相色谱法、液相色谱串联质谱联用法,酶联免疫法检测时间最短、操作最简单,但准确度相较于其它方法则不高。而液质联用法检测最准确,但检测时间也最长,操作最繁琐。文章对此做了酶联免疫法与液质联用法同时检测饲料中孔雀石绿的方法比较,并以液质联用法所检测出的结果验证酶联免疫法所检测出的结果,经试验:酶联免疫法与液质联用法测定结果一致;对于饲料样品,所检批次试剂盒在1μg/kg、10μg/kg孔雀石绿添加浓度处的准确度范围为:70.0~84.0%,批内变异系数、批间变异系数均≤7.0%;酶联免疫试剂盒方法饲料中孔雀石绿检测限为0.4μg/kg;用酶联免疫法作为检测饲料中孔雀石绿的筛选方法,当出现阳性样品时再用液相色谱串联质谱法进行确证,可缩短检测时间减少工作量,并有一定的可行性。     

固相萃取-超高效液相色谱法同时测定猪肉中22种磺胺类药物残留

为探索一次性检测猪肉中多种磺胺类药物残留的检测方法,建立了同时测定猪肉中22种磺胺类药物残留的固相萃取-超高效液相色谱方法。样品用3%乙酸乙腈提取,MCX固相萃取柱净化,水和甲醇淋洗,5%氨化甲醇洗脱,氮气吹至近干,0.1%甲酸-乙腈(9:1,V/V)溶液复溶,二极管阵列检测器270 nm检测。结果显示:该方法对22种磺胺类药物检测的线性关系良好(R2 0.999),定量限为2.5～10.0μg/kg,检测限为1.0～4.0μg/kg;各药物平均回收率为83.2%～96.6%,批内和批间变异系数分别为1.1%～3.5%和3.6%～13.4%。结果表明,该方法灵敏度高、重复性好、成本低廉,且操作简单、快速,可用于猪肉样品中多种磺胺类药物残留的同时检测。     

链霉素残留检测ELISA试剂盒的研制及应用

本研究采用EDC法人工合成链霉素抗原（SM—BSA）,免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术获得了分泌抗链霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了快速检测链霉素（SM）残留的酶联免疫方法,并成功研制了试剂盒。然后对其灵敏度、准确度、特异性、基质效应性等技术指标进行检测,同时应用该试剂盒对生长猪尿液中的残留情况进行检测。结果表明：除双氢链霉素外,该试剂盒与其它抗生素类药物均无交叉反应;线性检测范围为1～1289g／L,相关系数R^2=0．9251,灵敏度为0．45μg／L,半数抑制浓度（IC50）为7．769g／L,检测限为19g／L;猪尿样的平均添加回收率为84．1％;基质对该试剂盒的检测结果影响不大。该试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于SM残留的快速检测,具有较高的推广应用价值。     

酶联免疫法测定猪肉中磺胺类药物的残留

利用酶联免疫法对猪肉中的磺胺类药物残留进行检测,结果表明:该方法的灵敏度为1μg/L,最低检测限为1.5μg/kg;向空白样本中添加浓度为100、200μg/kg磺胺标准品时,平均回收率范围为76.1%～101.7%,变异系数为4.6%～11.9%;利用该方法与液相色谱-串联质谱法检测实际样本,其阴、阳性判断结果一致。该法灵敏准确、重复性好、特异性高,适用于对猪肉中15种磺胺类药物进行多残留检测。     

改良QuEChERS结合高效液相色谱-串联质谱法检测饲料中的7种镇静剂

本实验旨在建立以改良的QuEChERS作为前处理技术,结合高效液相色谱-串联质谱技术(HPLC-MS/MS)检测饲料中7种镇静剂的检测方法。样品加入乙腈提取,提取液经增强型基质去脂吸附剂(EMR-Lipid)脱脂,盐析后经PSA和C18吸附剂进一步净化浓缩,然后用高效液相色谱-串联质谱方法检测分析。结果表明:7种镇静剂为1~100μg/L时线性关系良好,相关系数均大于0.99,检出限为1.1~2.8μg/kg,定量限为3.7~9.3μg/kg。分别对配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料进行3个水平的加标回收实验,平均回收率为84.7%~96.5%,相对标准偏差为3.2%~10.8%。该方法前处理方法快速、简便、灵敏度高,适用于饲料中多种残留镇静剂的同时测定。