固相补反检测马乙脑抗体的研究

固相补体结合反应,是某种抗原结合特异性抗体,补体在固体介质中进行的一种反应。我们应用固相补体结合反应检测马流行性乙型脑炎抗体,取得了一定效果。此方法在兽医界还是一种新技术,目前尚未见应用于检测乙型脑炎的报道。我们经过较长时间     

两种补体结合反应对马来因阳性马骡血清抗体检测的比较

本文对鼻疽固相补体结合反应的条件进行了筛选,建立了术式。通过对417匹马来因点眼阳性马骡血清抗体检测证明,建立的固相补反的敏感性高,其阳性反应占29.5％,疑似反应占23％,阴性反应占47.5％;而常规补体结合反应则分别为14.7％、3.8％、81.5％。对10匹其它传染病血清和20匹马来因点眼呈阴性的健康马血清检测结果,除类鼻疽血清外,均呈阴性反应,证明固相补反具有一定的特异性。     

应用固相补体结合法检测牛肺疫抗体的初步探讨

常规补反试验用于临床检测牛肺疫抗体,在我省铁路兽医检疫工作中已有三十多年的历史。现在,只有内蒙、吉林、辽宁等省的铁路兽医在做牛肺疫的检验工作,并仍用常规补反法。常规补反法操作麻烦,费时,费物。根据常规补反试验的原理,我们试用固相补体结合法对971头被检牛血清作了检测。此法是将补反中的溶血系融合在固相琼脂糖中制成板,並在该板的孔内作溶菌系试验,观察溶血系反应孔周围是否发生溶血来判定被检血清中有无抗体存在。当被检血清中含有牛肺疫抗体时,溶血系反应孔周围,不发生溶血,为阳性反应。当被检血清中不含牛肺疫抗体时则出现溶血,为阴性反应。固相补体结合反应在兽医临床上应用尚少,我们也是初次试验,感到本方法快速特异,省时,易于判定。     

马传贫琼扩抗原与马抗羊血清之间的非特异性反应

随着免疫化学诊断药盒在临床医学上的广泛应用,其药盒中重要试剂之一——第二抗体的需求量不断增加。近年来,多用马和驴等大动物为免疫动物,以限量多次采血法生产大量第二抗体血清。我们在研制出口用马抗羊血清过程中,观察到马抗羊血清与传贫琼扩抗原之间可发生非特异性反应。通过试验,明确了该反应是由传贫琼扩抗原中被浓缩的牛血清同马抗羊血清抗体之间交叉所致的,现报道如下。     

ELISA及琼扩试验检测马传贫病毒抗体之比较

ＥＬＩＳＡ及琼扩试验检测马传贫病毒抗体之比较ＡｎｄｒｅｗＭＬｅｔａｌ马传贫病毒（ＥＩＡＶ）引起马慢性病，其症状为周期性发热、消瘦、贫血及血小板和白血球减少症等。该病仅见于马并与人类免疫缺陷病毒相关。通常用血清学试验来确诊此病，防止其在各州之间扩散（美...     

检测马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区抗体间接ELISA诊断方法的建立

本试验以纯化的重组马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区蛋白作为诊断抗原建立了间接ELISA诊断方法，确定其最佳工作条件为每孔包被重组抗原2仙g，兔抗马IgG酶标抗体以1：4000，血清以1：40倍稀释，底物作用时间为10 min；判定标准为P／N值大于2，且OD值大于0．2的血清为阳性，否则判为阴性。本试验所建立的诊断方法与琼扩试验以及以琼扩抗原作为包被抗原的ELISA试验进行了比较，表明该诊断方法敏感性更高。特异性和重复性试验表明该诊断方法具有良好的特异性和重复性。通过对4匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马血清抗体的检测，发现均在接种2周后可产生抗马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区相应抗体。此抗体一直持续存在到本试验检测的免疫后17个月，且效价较高。，用此方法检测203份马血清样品，其中161份呈抗体阳性，还检测了马传贫自然感染马血清93份，结果全部为阳性。     

马传贫血清学强、弱毒鉴别马及其生物学试验马病理学及免疫形态学观察

接种马传贫疫苗地区琼扩阳性、班点试验阴性4匹马.属慢性活动型传贫马;其生物学试验的8匹马,一匹呈现急性型传贫的病理变化,一匹为亚急性型传贫病理变化,5匹为慢性活动型传贫病理变化,一匹为慢性静止型传贫病理变化.斑点试验阳性、琼扩试验阴性的2匹马.无传贫病理变化.为Ⅱ型免疫马;其生物学试验的2匹马亦未见明显的病理改变.     

马循环免疫复合物检测法的建立及其应用

确定了检测马循环免疫复合物(CIC)的聚乙二醇(PEG)沉淀试验及固相C_(1q)-ELISA的最适条件.PEG沉淀试验/C_(1q)-ELISA对健康马(n=60)、传贫马(n=83)和注射传贫疫苗马(n=79)的检测结果(OD值,x±2S)分别为:O.066±0.042/0.288±0.206,0.124±0.067/0.712±0.344和0.081±0.053/0.425±0.217).经统计检验,这两种方法相关性显著,3类马血清的OD值相互差异非常显著.本实验结果提示,马传染性贫血的发病与循环免疫复合物有关.     

用斑点试验测定马传贫母源抗体的探讨

用斑点试验测定马传贫母源抗体的探讨于秀英焦淑红（内蒙古哲盟兽医工作站）张志明（哲盟家畜繁育指导站）哈尔滨兽医研究所应用生物工程杂交瘤技术研制成功有株系特异性的抗马传贫驴白细胞弱毒疫苗抗原的单克隆抗体，并制成试剂盒，以斑点（ＤＢ）试验和免疫扩散（ＩＤ）...     

马传贫弱毒疫苗免疫马与自然病马沉淀及补反抗体耐热性差异的探讨

本试验测定了马传贫弱毒疫苗免疫马与传贫病马琼脂扩散沉淀抗体(沉淀抗体)及补体结合反应抗体(补反抗体)活性的耐热曲线。证明免疫马的抗体较传贫病马的耐热性差。64℃水浴15分钟后,免疫马血清沉淀抗体完全丧失反应活性,而传贫病马血清一般多能保持阳性反应。用65℃水浴15分钟处理琼扩阳性反应血清,结果传贫病马血清142份中的128份仍为琼扩阳性,传贫病马注苗后的血清5份均呈琼扩阳性;免疫马血清37份则全部转为阴性反应。65℃水浴15分钟后,免疫马血清补反抗体完全丧失反应活性,而传贫病马血清仍可呈阳性反应。用65℃水浴15分钟处理补反阳性血清,结果传贫病马血清40份、强毒接种马血清2份的补反仍保持阳性;免疫马血清42份则均转为阴性。     

埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

为建立EBOV抗体间接ELISA检测方法,以纯化后的EBOV糖蛋白作为包被抗原,HRP标记山羊抗马IgG为二抗,EBOV阳性马血清和阴性马血清分别为阳、阴性对照,优化反应条件,以EBOV病毒样颗粒免疫获得的高免马血清评价其特异性和敏感性,并将检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相比较,进一步评价EBOV抗体ELISA检测方法在EBOV免疫血清抗体水平检测中的应用。优化后的间接ELISA方法可特异性检测EBOV抗体,与西尼罗病毒等的阳性血清均不发生反应,检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相平行。批内、批间试验变异系数均小于8%。本研究成功建立了EBOV抗体间接ELISA检测方法,为EBOV免疫血清抗体水平检测提供了一种简便、快速的检测方法。     

应用单克隆抗体对马传贫弱毒疫苗接种马血清中相应抗原的检测

应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异单克隆抗体酶结合物的免疫斑点试验检测证明，自28份马传贫弱毒疫苗免疫马血清中均检出与单抗呈阳性反应的相应抗原，持续期达51个月以上，自19份人工感染传贫马、自然感染传贫马、弱毒疫苗免疫后攻毒马及42份健康马血清中均未检出单抗原，病理学检查表明，弱毒疫苗免疫马无马传贫病理学改变，以弱毒免疫马肝、脾、骨髓材料进行生物学试验表明，弱毒免疫马体内不存在致病性病毒，这阐明该弱毒疫苗的免疫本质提出一个非常值得今后深入加以探讨的课题。     

应用单克隆抗体对马传贫弱毒疫苗接种马血清中相应抗原的检测

应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异单克隆抗体酶结合物的免疫斑点试验检测证明,自28份马传贫弱毒疫苗免疫马血清中均检出与单抗呈阳性反应的相应抗原,持续期达51个月以上;自19份人工感染传贫马、自然感染传贫马、弱毒疫苗免疫后攻毒马及42盼健康马血清中均未捡出单抗相应抗原。病理学检查表明,弱毒疫苗免疫马无马传贫病理学改变。以弱毒免疫马肝、脾、骨髓材料进行生物学试验表明,弱毒免疫马体内不存在致病性病毒。这为阐明该弱毒疫苗的免疫本质提出一个非常值得今后深入加以探讨的课题。     

固相补体结合反应及间接血凝试验对鼻疽马骡诊断的比较研究

以18匹鼻疽马的病理组织学变化为主要依据,结合常规补体结合反应(CFT)的检查结果,确定了间接血凝试验(IHA)的判定标准,即血清凝集1:800或以上呈现“++”为阳性,1:400呈现“++”为疑似,1:200以下凝集为阴性反应。进而为比较固相补体结合反应(SP—CFT)与IHA检测鼻疽的敏感性,以CFT作对照,对内蒙和吉林两省(区)的1244匹马骤血清进行了检测,CFT、SP—CFT和IHA的阳性率依次为10.8％、16.8％和7.3％,阴性率为84.8％、71.2％和85.4％。用这三种血清学反应检查供作对照的20匹健康马血清及14匹其它6种传染病血清,均未出现影响结果判定的类属反应。1244匹马骡血清中鼻疽菌素试验呈阳性反应的血清540匹份,三种血清学反应阳性率依次为15.9％、30.9％和3.2％,阴性率依次为77.4％、44.8％和35.9％。由上可见,在三种血清学反应中,不论对大面积的鼻疽疫区,还是对鼻疽菌素试验阳性(M~+)马群的检疫,SP—CFT均表现了最高的敏感性,至于IHA的检出率,则较SP—CFT低,但可用于鼻疽的早期诊断,以弥补在此期间补体结合性抗体尚未出现,补体结合反应不能检出的缺陷。     

间接荧光抗体试验诊断马骡伊氏锥虫病的研究

以人工感染伊氏锥虫的小鼠血液涂片为抗原,建立了IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体的方法,并对伊氏锥虫病马、同群马、健康马、非伊氏锥虫病马血清作了检测。伊氏锥虫病马和无症状同群马的抗体阳性率分别为97％(33/34)和12％(18/150);25匹健康马血清伊氏锥虫抗体均为阴性;84份非伊氏锥虫病马血清的IFA试验均为阴性,未出现交叉反应。多数病马发病一周内的血清IFA试验即为阳性。3匹病马血清抗体消长动态观察结果表明,病马于治疗后110天,血清IFA试验仍为阳性。本试验表明,IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体,敏感性高、特异性强,对无症状的感染马也能检出,可用于本病的早期诊断和血清流行病学调查。     

检测马传贫强毒感染马与弱毒疫苗免疫马外周血病毒抗原的研究

从马传贫强毒急性感染马的外周血白细胞、血浆、血清中可检出马传贫病毒抗原;从亚急性感染马外周血的白细胞、血浆中可检出马传贫病毒抗原;从无症状慢性马外周血的白细胞中偶尔能检出马传贫病毒抗原。对9匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马连续跟踪3个月,从外周血的白细胞、血浆、血清中均未检出马传贫病毒抗原。     

马疱疹病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立一种检测马疱疹病毒抗体间接ELISA方法,采用纯化后的马疱疹病毒1型和马疱疹病毒4型g D蛋白作为抗原,经方阵滴定法优化ELISA反应条件,并对该方法进行特异性和重复性试验。结果显示,使用此方法检测其他马常见病毒病阳性血清均为阴性;组内、组间变异系数均小于10%。采用建立的方法与国外商品化的马疱疹病毒诊断试剂盒对送检的300份马血清进行检测比较,两者符合率为95%。结果表明,本次试验建立的间接ELISA方法可以用来检测马疱疹病毒抗体,为马鼻肺炎的防控工作提供技术支撑。     

马传贫琼扩试验中出现沉淀线的检验分析及改进

马传贫是反转录病毒科马传贫病毒引起马属动物的一种危害严重的传染病。最早于 184 3年在法国发现 ,1974年在委内瑞拉召开的国际马传贫座谈会上决定 ,将琼脂扩散试验作为国际通用诊断方法。大庆市万宝环卫站在应用琼脂扩散反应检疫马属动物时 ,除发现了特异性反应沉淀线外 ,还发现了非特异性反应沉淀线和弱阳性反应沉淀线 ,后两者给确诊该病带来了困难 ,下面就此谈一下认识和改进措施。非特异性反应沉淀线在放大镜下观察大致分两种 :一种是与标准阳性血清沉淀线交叉且向外延伸 ;另一种是沉淀线粗而不清晰。出现非特异性反应说明抗原中的其他…     

用间接亲和素—生物素酶标染色法检测马传贫病毒抗体的试验研究

用自制生物素标记兔抗马IgG(简称Bio—IgG)及辣根过氧化物酶与亲和素蛋白偶联物(E—avi),以间接AB酶标染色方法检测马传染性贫血特异性抗体,获得了满意结果。此法比免疫荧光法敏感76信,对照、阻抑试验及类症病马血清均呈阴性结果,43例马传贫血清全部阳性。本试验表明,该方法具有特异、敏感、快速和简便等特点,有实用价值。     

急性传贫马铁蛋白血症的研究

我们曾用急性传贫马血清毒以差速离心法浓缩提取马传贫病毒的试验中发现,凡是急性传贫马高热期血清的超速离心沉淀物都能看到桔红色的物质,而健康马血清则不含这种物质。进一步实验证明此桔红色物质为游离铁蛋白。铁蛋白为一种结合蛋白质,广泛存在于哺乳动物的脏器中,尤其马的脾脏最为丰富。其生理功能是储存铁,以备用于