猪链球菌病的病原分离鉴定及防制措施研究

为了更好地防制猪链球菌病,从沈阳市多个地区疑患猪链球菌病的病死猪中分离到9株链球菌,通过细菌分离鉴定确定这9株链球菌中有1株为猪链球菌,其它8株为马链球菌兽疫亚种;致病性试验结果表明,9株均具有致病性;药敏试验筛选出了对各菌株高敏的药物;选择2株链球菌制备疫苗并免疫仔猪,结果证明有较好的免疫原性,可以作为疫苗株预防猪链球菌病。     

广西猪源链球菌分离株的分群鉴定

从广西南宁、玉林、来宾、柳州、钦州等9个市29个猪场的送检材料中,分离出95株猪链球菌.使用链球菌乳胶凝集标准诊断试剂盒(有兰氏A-G群)对其中56株典型链球菌进行了培养特性、生化试验和血清分群鉴定.结果有32株为D群链球菌,9株为C群链球菌,1株为F群链球菌,5株为G群链球菌,1株与C群和D群有交叉反应,2株与D群和G群有交叉反应,6株未能定群.小白鼠对56株分离菌的敏感性有所不同.本试验结果表明,广西地区猪链球菌病的病原已不是单一血清群,同一猪场存在着多种血清群的链球菌.这为猪链球菌病的防制提供重要依据.     

上海地区猪源链球菌分离株的病原特性鉴定

1997－1999年从上海地区分离出15株猪源链球菌，结合培养特性、生化特性及血清定型等对其进行了鉴定。其形态、染色及培养特性基本符合链球菌的特点，大多具有α或β溶血，生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A－G乳胶分型诊断液和猪链球菌1、2型标准阳性血清检测5株分离菌，4株为C群链球菌，1株为2型猪链球菌，1株为B群链球菌，1株为D群链球菌，1株与A群和C群有交叉反应，7株不在其检测范围。小鼠对15株分离菌的敏感性有所不同。本试验表明，上海地区猪链球菌病的病原已不再是单一的C群链球菌。对新出现的2型猪链球菌，应引起足够重视。     

猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

通过生化试验、药敏试验、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离的猪源链球菌进行药物敏感性、血清型和分子流行病学初步研究。从不同省份猪链球菌病疑似病例猪的心血、肝、淋巴结、脑和关节液组织分离出97株链球菌,药敏试验结果表明各菌株对13种抗菌素的耐药谱不同,但对先锋霉素V和环丙沙星的耐药率均低于5%。通过对分离菌株进行PCR鉴定和分型,确认26株为猪链球菌,其中1株为1型,16株为2型,4株为7型,没有9型,另5株为其它型。进一步对1型、2型和7型猪链球菌mrp、epf和sly3种毒力基因的分布情况进行了PCR检测。动物试验表明能100%致死小白鼠的猪链球菌基因型均为epf^＋mrp^＋sly^＋2型猪链球菌,1株2型和1株7型猪链球菌均能复制出典型的猪链球菌病例。     

猪链球菌2型的鉴定及其毒力因子检测

猪链球菌的感染不仅对养猪业造成巨大的损失,同时对公共卫生尤其是相关从业人员的生命造成威胁,严重感染引起死亡.根据参考文献,设计了1对猪链球菌2型特异性引物.对四川分离的7株链球菌、江苏分离的1株、北京分离的6株和菌种中心保存的5株C群马链球菌兽疫亚种、1株D群链球菌、4株R型链球菌、2株S群链球菌和E、F、G、K、L、M、N、O、P群链球菌各1株进行了检测.结果7株四川分离株均为2型;1株江苏分离株为2型;6株北京分离株有3株为2型;1株R群、2株s群链球菌为2型猪链球菌.对检测出的14株猪链球菌2型的毒力因子做进一步检测.MRP基因检出率为92.9%(13/14);EF基因检出率为100%(14/14);sly基因检出率为71.4%(10/14);Cps2A基因检出率为92.9%(13/14);gapdh基因检出率为64.3%(9/14);FBPS基因检出率为92.9%(13/14);orf2基因检出率为71.4%(10/14).毒力因子全为阳性的菌株有6株,MRP-EF+菌株有2株.本研究从259份健康猪扁桃体中分离到16株2型猪链球菌,健康猪带菌率为6.2%(16/259).16株猪链球菌2型中,MRP、EF、Cps2A全为阴性,只从1株2型猪链球菌中检测到了sly基因(1/16);gapdh基因检出率为56.25%(9/16);FBPS基因检出率为75.0%(12/16);Orf2基因检出率为37.5%(6/16).     

湖南省猪链球菌的分离与鉴定

从病猪脏器病料中通过细菌培养、生化试验分离鉴定出了121株猪链球菌.经PCR技术鉴定马链球菌兽疫亚种28株,占23.1%,猪链球菌24株,占19.8% ,其中猪链球菌2型4株,占3.3%,猪链球菌9型2株,占1.7%,猪链球菌1型和7型都没检测到,证实省内除了猪链球菌2型外,也存在其他血清型的猪链球菌.     

广西部分地区猪链球菌的分离鉴定及小鼠致病性研究

对来自广西边境地区部分发病猪场及屠宰场的370份猪组织进行细菌分离鉴定,共分离到16株链球菌,对这16株链球菌进行了形态学观察、PCR鉴定及小鼠致病性试验。结果表明,其形态、染色、生化特性均符合猪链球菌的特点,通过GDH鉴定与测序,证实这16株菌株均为猪链球菌,分别命名为GX1~GX16。通过特异性引物PCR分型（35个血清型）,其中有1株为1型,1株为2型,1株为5型,1株为29型,5株为8型,7株未分出型。用这16株猪链球菌对昆明小鼠和BALB/c小鼠进行动物致病性试验,结果发现,菌株GX10对昆明小鼠和BALB/c小鼠致死率均为100%;菌株GX11对BALB/c小鼠致死率为80%;其他菌株对昆明小鼠和BALB/c小鼠均无致病性。菌株GX10、GX11对BALB/c小鼠的LD₅₀分别为4.5×10⁵和3.6×10⁹ CFU。本试验结果表明,广西边境地区存在致病性猪链球菌8型。BALB/c小鼠对猪链球菌的敏感性高于昆明小鼠,更适合作为猪链球菌致病性研究的动物模型。     

河南省规模化猪场猪链球菌2型的分离鉴定和药敏试验

从2006-2009年河南省发生猪高热综合征的113家规模化猪场291份病料中分离革兰氏阳性球菌,通过培养特性试验、生化试验、猪链球菌和猪链球菌2型的PCR试验,结果鉴定125株为链球菌,其中35株为猪链球菌2型。对35株猪链球菌2型进行小鼠毒力试验及药敏试验,结果显示,35株猪链球菌2型对小鼠均有毒力,均对头孢噻肟、头孢唑啉、头孢他啶、阿莫西林、氯霉素、环丙沙星、氧氟沙星敏感。     

猪链球菌2型多重PCR检测方法的建立及应用

设计3对引物,分别扩增链球菌属特异性gdh、猪链球菌种特异性16S rRNA和猪链球菌2型特异性cps2J等基因,目的片段大小分别为725bp、523bp和387bp。利用合成的3对引物并通过对反应条件与反应体系的优化建立了多重PCR。应用该多重PCR检测了分离到的链球菌1105株,检出猪链球菌667株,猪链球菌2型33株。研究结果表明,该方法特异性高、敏感性强,可广泛应用于猪链球菌病的快速诊断及流行病学调查。     

猪链球菌病病原分离鉴定及防治试验

从20份疑似猪败血型链球菌病和神经型链球菌病的病料中分离到12株细菌,通过培养特性、菌落形态、染色特性、生化试验及血清学试验确定为C群兽疫链球菌7株,D群猪链球菌5株。药敏试验证明分离菌对先锋霉素Ⅴ、阿米卡星最敏感,经临床应用效果良好。用分离菌株研制成二价氢氧化铝胶灭活苗能有效地预防猪链球菌病。