绿色荧光蛋白基因在家蚕的表达研究

将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入家蚕蛹(G_0)的睾丸,利用荧光显微镜技术检测到绿色荧光蛋白基因在家蚕卵(G_1)表达的荧光图像。     

禽流感研究概述(下)

5．3．2．5 免疫荧光技术(IFT) 免疫荧光技术就是荧光抗体技术(FAT)。IFT早在1961年就开始用于人类流感的快速诊断。1984年美国宾西法尼亚州爆发禽流感时Skeeles将IFT首次用于AIV的检测。IFT最早用于病毒的鉴定和定位病毒感染细胞中特异性抗原，主要是核内荧光；用MP抗原的荧光抗体主要出现胞质荧光，核内也有部分荧光。     

荧光原位杂交技术在染色体上应用的研究进展

荧光原位杂交(FISH)技术是20世纪80年代开始发展起来的一种新的定位技术,在染色体研究中得到了广泛的应用.该文主要从荧光原位杂交技术的发展概况、探针的类型及标记方法、探针和染色体的杂交、荧光显微镜检测方面介绍了荧光原位技术的原理及FISH目前的发展现状.     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要。目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量PCR(qPCR)、多重PCR(mPCR)、微滴数字PCR(ddPCR)、巢氏PCR(nested-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、交叉引物扩增技术(CPA)、原位杂交技术(ISH)以及生物传感器技术等,抗原检测常用荧光抗体试验(FAT)、抗原ELISA、侧向流动免疫色谱分析(LFA)等,而抗体检测主要通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFA)、胶体金快速免疫层析法(GICA)、免疫印迹法(IBT)等方法。每种诊断技术都有其特点,从而为不同情况下的A SFV诊断提供了多种选择。未来,其他技术如CRISPR等与上述技术的结合应用,以及不同诊断技术的联合应用,将成为非洲猪瘟诊断技术发展的趋势。     

布鲁氏菌病实验室检测方法的研究进展

本文概述了布鲁氏菌病的实验室检测方法研究进展,主要包括病原分离、免疫学检测技术和分子生物学检测技术,如酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光偏振试验(FPA)、虎红平板凝集试验(RBPT技术)、胶体金免疫层析技术(GIGA)、补体结合试验(CFT)、新型可视化环介导等温扩增技术(LAMP技术)和PCR技术等,希望可为布鲁氏菌病基层实验室检测的技术推广提供参考。     

二种方法检测牛病毒性腹泻病毒的比较

荧光抗体试验(FA)是用于检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的传统方法。但由于此技术需要价格昂贵的荧光显微镜,复杂的操作程序及专门的试验人员,使该技术的应用受到限制。为克服FA的缺点,目前世界上一     

利用荧光定量RT-PCR法与间接免疫荧光法比较测定猪瘟兔化弱毒病毒含量

利用荧光定量RT-PCR技术与间接免疫荧光技术(IFA)对12份猪瘟兔化弱毒(ST细胞毒)病毒含量与毒价进行了测定,并与兔体反应热法测定结果进行了比较分析。结果显示:12份猪瘟兔化弱毒(ST细胞毒)可根据兔体感染量分为4组,各组间荧光定量RT-PCR法与IFA法测得的病毒含量间差异极显著(P<0.01);3种方法的检测结果间呈显著正相关性(γ>0.9)。研究结果提示:可用荧光定量RT-PCR技术结合IFA替代传统的兔体反应热法,高通量、快速、准确地测定猪瘟兔化弱毒病毒含量,其有助于简化疫苗检验工作并提高准确度。     

酶免疫测定技术在沙门氏菌快速检验中的应用

自Coons等(1942)引入抗体标记技术以来,多种标记抗体免疫测定技术,如荧光抗体技术(FA)、放射免疫测定技术(RIA)、酶免疫测定技术(EIA)等业已得到广泛的应用,已成为微生物学工作的重要手段和方法。但是标记抗体也有其自身的缺点,如:荧光抗体技术要求被检材料中含有大量的细菌或病毒等抗原;放射免疫测定虽然敏感,但放射性同位素的使用费用较大而且必需配备严格的安全措施。这使得基层单位难以开展此项工作。 EIA方法具有RIA的敏感性和FA的安全性,用于     

犬瘟热病毒一步法荧光定量PCR检测方法的建立

为建立犬瘟热病毒(CDV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,根据CDV核衣壳蛋白(NP)基因序列,设计合成2对通用引物和1条通用探针,通过体外转录构建绝对定量标准品RNA。对荧光定量PCR方法的各项条件进行优化,建立CDV荧光定量PCR检测方法,该方法检测灵敏度可达4.02拷贝/μL,比普通RT-PCR方法的灵敏度高出100倍,具有良好的重复性。对犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV-1)、犬冠状病毒(CCV)、犬副流感病毒(CPIV)核酸检测为阴性,具有很好的特异性。研究结果表明,建立的CDV荧光定量PCR方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,为犬瘟热的早期诊断提供了重要的技术支撑。     

实时荧光定量PCR技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种高度接触性传染病,尤其是对母猪,该病毒严重影响其繁殖性能。实时荧光定量PCR以其快速、可靠的诊断技术,为检测和诊断PRRSV开辟了新方法。文内对国内外实时荧光定量PCR技术在PRRSV研究中的应用作了综述。     

免疫荧光技术

兔疫荧光技术又称荧光抗体技术。它是把抗原抗体反应的敏感性和特异性同显微形态学相结合,可以特异、敏感、快速地检测和定位某些未知抗原和抗体。自Coons等(1941)建立免疫荧光技术以来,免疫荧光技术已在医学、农学、兽医学和生物学等领域广泛应用。结合我们的体会,本文对免疫荧光技术作一概括的介绍。     

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术.它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点.文章就常用的4种方法,即DNA结合染色、水解探针、分子信标和杂交探针的原理和特点进行介绍,同时综述了荧光定量PCR技术在实践中的应用.     

猪SP-A基因荧光定量PCR检测方法的建立

SP-A(surfactant protein-A)mRNA的表达对肺的发育、成熟均起关键作用,并且与肺部疾病的发生相关。为了建立荧光定量PCR技术检测猪SP-A表达量的方法,根据猪SP-A基因的mRNA序列(EU622632)设计引物,从纯化模板、PCR程序设计等方面进行了优化,建立了基于SYBR Green I染料技术的Power SYBR(Green荧光定量PCR方法。结果表明,所建立的Power SYBR(Green荧光定量PCR方法检测猪SP-A基因具有特异性好、简便、可靠等特点,为猪SP-A基因定量分析奠定了基础。     

对肉品沙门氏菌用荧光抗体法与常规法检验的对比实验

荧光抗体技术用于食品沙门氏菌的检验已有6—10年的历史,美国的公职分析化学家协会(AOAC)和食品药物管理局(FDA)等组织都已将荧光抗体法作为快速检测方法列入标准。我国国家商检局已于1985年批准荧光抗体法作为出口食品沙门氏菌的筛选检验方法并要求推广应用。我们于1985年12月至1986年9月,用荧光抗体法与原来的     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟是猪的一种急性、高度接触性传染病,致死率可达100%。本文综述了非洲猪瘟病原学和血清学诊断技术研究进展,包括红细胞吸附试验(HAD)、聚合酶链反应技术(PCR)、环介导恒温扩增技术(LAMP)、荧光抗体技术(FAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金快速免疫层析技术(GICA)等,并对各种方法的优缺点进行简要汇总分析,总结认为今后非洲猪瘟诊断的发展趋势在于不同诊断技术的联合应用。     

实时荧光定量PCR技术原理与应用

实时荧光定量PCR(real-ti me fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的主要原理及目前在分子生物学领域,病原体和肿瘤等方面的检测和诊断应用进行了概述。     

实时荧光定量PCR技术及应用

实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上发展起来的核酸定量技术,于1996年由美国Applied Biosystems公司推出.当前,实时荧光定量PCR技术应用范围很广,例如,能从粪便材料中分离出的细菌DNA来精确定量检测肠道菌,使我们能详细地分析肠道中优势菌与荧光原位杂交(FISH)及培养方法检测不到的非优势菌,为理解肠道菌群与机体状况关系提供重要线索.该技术从原理上分为荧光染料检测模式和荧光探针检测模式两方面.     

荧光定量PCR方法与其他动物疫病病原检测方法的应用比较

荧光定量PCR方法是一种发展较快的新型核酸定量检测技术。本文比较了荧光定量PCR检测方法与其他三种常见的动物疫病病原检测方法(普通PCR、酶联免疫吸附试验、胶体金快速检测卡)的优缺点,结果得出:荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,操作简单,结果判定简单、快速。     

荧光抗体法检测猪细小病毒

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)为引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一.猪细小病毒感染的主要特征是孕猪在怀孕前容易受到感染,可引起胚胎或胎儿的感染和死亡,导致母猪发生流产,死胎,胎儿木乃伊化及新生仔猪的死亡.目前,国内外检测猪细小病毒的方法主要有原位杂交、银加胶体金检测法、ELISA双抗体夹心法、聚合酶链反应和荧光抗体法等.免疫荧光技术是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应.笔者认为荧光抗体法较适用,而关于此方法的报道甚少,因此进行了以寻求快速、特异的直接荧光抗体检测方法为目的的研究.     

山羊鼻内肿瘤病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了解山羊鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)的流行情况,本研究针对ENTV-2的env基因设计了1对特异性引物与探针,通过RT-PCR条件优化,成功建立了ENTV-2荧光RT-qPCR检测方法。该方法特异性高、灵敏性强(5.61 copies/μL)、重复性好(CV为0.09%~1.20%)。本研究建立的一步法荧光RT-qPCR方法为ENTV-2的临床检测以及流行病学调查提供技术支撑。