槲皮素对地塞米松和A β25～35联合诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的研究槲皮素对地塞米松和Aβ联合诱导PC12细胞损伤的保护作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法培养PC12细胞,取对数生长期细胞分为五组,空白对照组、模型组、把槲皮素分为高、中、低剂量组,剂量分别为10 umol/L、5.0 umol/L、2.5 umol/L.药物预处理2 h后,然后孵育地塞米松与Aβ联合24 h诱导氧化损伤。24 h后MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与空白对照组相比,损伤组细胞活力明显低于空白对照组,细胞凋亡率明显升高;与模型组相比,槲皮素能明显改善地塞米松联合Aβ诱导的细胞氧化损伤,可提高细胞活力,明显降低细胞凋亡率。结论槲皮素对地塞米松和Aβ联合诱发PC12神经细胞损伤有显著的保护作用,其机制可能与抗细胞凋亡有关。     

顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞凋亡影响

为研究顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞CHMp凋亡影响,本试验采用不同浓度的顺铂以不同作用时间处理细胞,用MTT法检测细胞活性,通过透射电镜观察CHMp细胞形态学变化,用流式细胞仪研究CHMp细胞凋亡和周期。结果显示,CHMp细胞生长受浓度和时间双重依赖,浓度越高,时间越长,抑制越明显,在电镜下观察细胞出现明显的凋亡形态,同时5μmol/L顺铂作用24 h后细胞阻滞于G1/S期,比例高达75.12%。结果表明,顺铂能抑制CHMp增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞G1/S期。     

柞蚕蛹虫草水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

研究柞蚕蛹虫草水提物（Aqueous extract from cordycep militaris of antheraea pemyi,AEoAPC）对人乳腺癌细胞MCF-7生长抑制与凋亡的作用.将不同浓度的AEoAPC分别作用于人乳腺癌细胞MCF-7 24、48、72 h后,应用倒置相差显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7的形态变化,噻唑蓝比色法测定细胞生长抑制效应,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率.结果表明：AEoAPC能显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度的依赖性;形态学观察发现,细胞形状不规则、变暗、皱缩;FCM检测结果显示,作用72 h后G0-G1期（DNA合成前期）的细胞分布有所增加,使细胞阻滞于G2期（DNA合成后期）和S期（DNA合成期）;0.8g/L AE0-APC在24、48、72 h凋亡率分别为8.65％、14.20％、26.30％,其凋亡程度与时间呈正相关.说明AEoAPC能明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,诱导其细胞凋亡.     

嗅神经鞘细胞条件培养液对PC12细胞活性及分化影响

研究嗅神经鞘细胞(OEC)条件培养液对PC12细胞活性和分化的影响。原代培养并纯化OEC，收集其培养上清并制备条件培养液，然后用其培养PC12细胞，随后于倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化，通过MTT检测PC12细胞活性，免疫细胞染色观察β-tubulin的表达变化。结果显示OEC条件培养液可促进PCI2细胞突起生长，增加细胞活性，促进其β-tubulin的表达升高。从而证明OEC能够分泌一些促进PC12细胞和诱导其向神经元分化的营养因子。     

动物细胞大规模培养中细胞凋亡检测方法的研究

为了探讨动物细胞大规模培养中细胞凋亡的检测方法,以不同浓度氯化铵诱导BHK-21细胞凋亡,每隔12 h收集细胞,采用台盼兰形态学排染法、吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法、FITC-Annexin V/PI双染色荧光显微镜观察法、原位缺口末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳、流式细胞术(FCM)法进行细胞凋亡的检测。通过比较发现,不同方法检测结果都存在着显著性差异,但吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法是一种简单、易行、准确、全面定性细胞凋亡的较为可靠的方法,而FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞仪能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞,是较为理想的凋亡定量检测方法。这2种方法的联合运用更适应于动物细胞大规模培养过程中细胞凋亡的检测。     

Fas/FasL通路对镉激活PC12细胞MAPK通路的影响

旨在研究Fas/FasL通路对镉激活PC12细胞MAPK通路的影响,用10 μmol L^-1醋酸镉（CdAc₂）分别处理插入非特异性序列PC12细胞与Fas基因沉默PC12细胞12 h;用10 μmol·L^-1CdAc₂与40 μmol·L^-1 Z-IETD-FMK （caspase-8特异性抑制剂）单独或联合处理PC12细胞12 h。通过Western blot检测Fas/FasL通路相关蛋白Fas、FasL、Fas相关死亡域蛋白（FADD）、Cleaved caspase-8、死亡结构域相关蛋白（Daxx）、凋亡信号调节激酶1（ASK1）的表达与MAPK通路相关蛋白ERK1/2、JNK1/2、p-ERK1/2、p-JNK1/2的表达;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,Fas shRNA慢病毒极显著抑制镉引起的PC12细胞Fas/FasL通路相关蛋白表达量和凋亡率的升高（P<0.01）,缓解镉引起的PC12细胞凋亡形态学变化;Fas shRNA与Z-IETD-FMK均能够极显著抑制镉引起的PC12细胞MAPK通路相关蛋白ERK1/2与JNK1/2磷酸化水平升高（P<0.01）。综上表明,Fas/FasL通路调控MAPK通路参与镉致PC12细胞凋亡。     

JA1体外诱导HCC细胞凋亡的实验研究

采用噻唑蓝(MTT)还原法,测定了梯度浓度的某植物种子粗提物JA1对人肝癌细胞株HCC增殖作用的影响;同时采用流式细胞术、DNA凝胶电泳和透射电子显微镜技术,在体外观察了JA1对HCC细胞凋亡的诱导作用。结果显示,JA1可显著抑制肝癌细胞HCC的增殖,而且这种抑制有浓度依赖性和时间依赖性;流式细胞仪分析表明,经JA1作用后的肝癌细胞HCC检测标本中有明显的DNA低含量颗粒(“亚G1期”峰);凝胶电泳呈现出典型的DNA梯形条带;电镜下出现细胞凋亡典型的形态学改变。     

利巴韦林对猫细小病毒诱导的细胞凋亡抑制作用

为了研究利巴韦林对感染猫细小病毒(FPV)细胞的影响,试验将猫肾细胞(F81细胞)随机分为对照组、病毒组、药物组,采用MTT法检测细胞的生长曲线,Hochest 33258染色观察细胞的细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期。结果表明:Hochest 33258染色试验中药物组与病毒组差异不显著(P0.05);药物组细胞的增殖活性始终高于病毒组,但低于对照组;流式细胞仪检测利巴韦林治疗后48小时G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞变化不大;72小时G2/M期细胞增多;药物组与病毒组细胞的流式检测在G1峰的左侧均出现典型的亚G1峰,但各时间点药物组细胞的凋亡指数均明显低于病毒组。说明利巴韦林能抑制FPV诱导的细胞凋亡,具有一定的治疗指导意义。     

鸡免疫器官中半胱天冬酶-3、Bcl-2的表达与细胞凋亡的关系

用流式细胞法测定了30日龄AA肉鸡的胸腺、法氏囊和脾脏细胞中半胱天冬酶－3（caspase-3）、Bcl-2蛋白的表达及细胞周期和细胞凋亡率。结果：胸腺、法氏囊、脾脏中G0／G1期细胞比例分别是：96.44％、68.09％、92.97％；G2／M期细胞比例是：0.80％、1.04％、2.36％；S期细胞分别为：2.77％、30.52％、4.67％，表明细胞增殖活性的增殖指数（PI）是：3.56、31.92、7.03。胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡率分别为：3.99％、0.32％、0.22％；caspase-3表达的阳性细胞率是：14.24％、8.60％、5.49％，与细胞凋亡率呈方向一致的变化；Bcl-2蛋白表达阳性细胞率依次是：20.59％、30.24％、31.32％，与细胞凋亡率呈反向变化。上述结果表明：鸡免疫器官细胞凋亡是依赖caspase-3介导的细胞凋亡，caspase-3和Bcl-2是鸡免疫器官发育的重要调节物。     

蚯蚓寡肽对伪狂犬病毒感染细胞和 HeLa细胞凋亡的影响

利用细胞病变抑制法测定了蚯蚓寡肽的体外抗伪狂犬病毒（PRV）作用，分别用AO／EB染色法和DNA琼脂糖凝胶电泳法测定了蚯蚓寡肽对HeLa细胞凋亡的影响。结果显示，蚯蚓寡肽可以抑制PRV感染细胞，同时存在剂量效应和时间效应。蚯蚓寡肽浓度越大细胞病变程度越轻，各处理组在72h的细胞病变程度最轻。蚯蚓寡肽可以诱导HeLa细胞凋亡，且具有浓度效应，1．5mg／mL组、0．75mg／mL组的细胞凋亡率分别为60．20％和48．12％。     

肝脏细胞和胰腺细胞的发育与再生

肝脏和胰腺前体细胞都是由胚胎前肠内胚层细胞发育而来的。脊椎动物中,在高度保守的诱导信号和遗传调节因子作用下,肝脏和胰腺前体细胞特化,并获得器官功能和再生能力。由于对肝脏疾病和Ⅰ型糖尿病有重要的临床价值,肝脏、胰腺的发育和再生机制成为了研究热点。通过对不同模式生物的研究,揭示了进化上保守的诱导信号和转录因子诱导肝脏、胰腺细胞的分化机制,这为干细胞和前体细胞如何诱导分化为肝实质细胞和胰腺β细胞提供了理论依据。     

牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的培养

分离培养牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的目的是克服体外受精中早期胚胎发育阻断,建立有利于牦牛早期胚胎体外发育的共培养体系.采集牦牛输卵管上皮细胞进行原代及传代培养,同时从卵泡液中获取颗粒细胞进行原代培养,培养过程中观察2种细胞的生长方式和形态特点.输卵管上皮细胞贴壁生长时,呈多边形,且呈单层成簇生长.培养144 h～216 h,可形成细胞单层.颗粒细胞贴壁生长时,呈现聚集生长特性,贴壁细胞形状不规则,呈放射状.培养72 h～96 h,形成颗粒细胞单层.     

饲养层细胞对胚胎干细胞的影响及其分离培养的影响因素

胚胎干细胞及其相关研究是生命科学领域中最有活力、最有影响力、最有应用前景的研究方向之一，它与遗传工程，转基因技术等相结合具有重大的理论意义与实践价值。饲养层细胞在胚胎干细胞分离培养的过程中起着异常重要的作用。作者结合实践经验就饲养层细胞对胚胎干细胞的影响进行了概述，介绍了饲养层细胞的分类，并分析了饲养层细胞分离培养的影响因素。     

新生牛雄性生殖细胞源类ES的培养及检测

采用贴壁速率差法分离纯化的新生牛雄性生殖干细胞（Male germ stem cell，mGSCs）和支持细胞（Calf sertoli cell，CSCs）；CSCs饲养层细胞一般维持时间不超过8d；新生牛雄性生殖干细胞在CSCs饲养层上1代培养至5～6d可形成类ES细胞集落，采用机械离散集落传代法有利于集落形成或存在，传代培养至少在前2代细胞集落存在；部分典型细胞集落的中心细胞AKP强阳性，周边细胞AKP弱阳性或阴性；免疫组化检测显示，细胞集落SSEA1强阳性、SSEA3弱阳性和Oct-4呈现阳性染色。表明mGSCs具有ES细胞的某些细胞特性。     

家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养

本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法。用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添加20%胎牛血清(FBS)、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L雌二醇(E2)、7.14nmol/L孕酮(P4)的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2的饱和湿度条件下培养;用免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞并检测分离的细胞纯度。结果表明用该方法成功地分离培养了兔子宫内膜上皮细胞和基质细胞,且2种细胞纯度都达98%左右,基质细胞出现蜕膜化;子宫平滑肌细胞的纯度为97%左右,而且出现横纹状的生长。本研究表明子宫内膜细胞和平滑肌细胞能够在体外成功培养;在含20?S、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L E2、7.14 nmol/L P4的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2饱和湿度的培养条件下最有利于体外培养的子宫内膜细胞和平滑肌细胞的生长。     

山羊PGCs用于分离与克隆类ES细胞

选择健康成年本地白山羊，自然发情，配种后44d取胎儿，以传统的原始生殖细胞（PGCs)分离与克隆的方法和PGCs与其胎儿生殖嵴周围组织细胞共同培养的方法获得类胚胎干细胞（类ES细胞），并对山羊类ES细胞在不同饲养层上进行培养。结果表明，采用传统方法与共培养的方法并添加细胞因子均能分离获得类ES细胞。分离获得的类ES细胞在同源（山羊）胎儿细胞饲养层上生长效果较好，可传4代或5代，而在小鼠原代成纤维细胞饲养层上类ES细胞仅传3代。另外，共培养不添加细胞因子组仅获1个ES细胞集落，传代后丢失。     

肥大细胞的功能

肥大细胞功能 ,一般多论及其在免疫超敏反应方面的作用 ,但近来发现 ,MC与肿瘤发生、清除血脂、血管生长、神经系统功能、生殖系统的周期变化以及寄生虫的排除、高原低氧等都有不同程度的关系。进而 ,MC在人体的免疫系统中起着抗菌的关键作用 ;这一新发现提高了运用自身免疫系统而不用抗生素来防治感染的可能性 ,MC还有可能用于治疗癌症、寄生虫感染等疾病     

几种鸡胚原代细胞的制备方法

在病毒分离、繁殖，中和试验及药物毒理试验中，细胞培养是经常被选用的技术。本文描述通过选择不同日龄的鸡胚，分别对皮肤上皮细胞、肝细胞和肾细胞进行了组织培养，确定了生长所需的培养液要求。认为１２日龄鸡胚适于皮肤上皮细胞的制备，１７～２０日龄鸡胚适合于肝细胞、肾细胞的制备，并确定了细胞生长的ｐＨ条件。     

胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

生殖细胞来源于原始生殖细胞,其在体内的分化机制已基本清楚。随着生殖细胞研究的不断深入,通过体外诱导途径获得生殖细胞已成为现实。将胚胎干细胞体外分化为上胚层样细胞,进而分化为原始生殖样或原始生殖细胞。将它们迁移入胎儿生殖腺,具有减数分裂及产生精子能力,与卵子结合移入缺生精管的生殖腺的新生鼠可以产生健康后代。为此,体外诱导生殖细胞的成功,进一步阐明了胚胎干细胞向生殖细胞分化的机制,为更有效利用干细胞造福人类奠定了基础。     

胚胎干细胞及种系嵌合体的研究进展

胚胎干细胞是着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞经体外分化抑制培养建立的多能性细胞系 ,具有与胚胎细胞相似的形态特征和分化潜能 ,体外培养时保持未分化状态 ,可以传代增殖。改变维持胚胎干细胞不分化的培养条件 ,胚胎干细胞可自发分化成多细胞结构。在一定诱导下 ,胚胎干细胞可向多个方向分化 ,并生成多种功能细胞。胚胎干细胞注入到胚泡期胚胎或与桑椹期胚胎聚合 ,可以参与包括性腺在内的各种组织的嵌合体的形成。胚胎干细胞在细胞分化与调控 ,胚胎发育 ,遗传病 ,肿瘤 ,免疫和组织或器官移植等研究中显示着广泛的应用前景。而种系嵌合体的获得是实现 ES细胞途径的决定步骤 ,低的种系嵌合率则是制约 ES细胞应用的关键。提高供体 PGCs在受体生殖腺中的比例 ,缩短 ES细胞的体外培养时间 ,以及注入早期发育阶段的受体胚胎等都能提高种系嵌合率。文章从多个方面综述了胚胎干细胞的最新研究成果 ,并着重以禽类 ES细胞为例论述了种系嵌合体的检测方法 ,种系嵌合率的影响因素以及提高种系嵌合率的方法