苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R~2=0.990),其IC_(50)为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。     

山东莱阳毛芋头栽培技术

~~山东莱阳毛芋头栽培技术@刘迎新$山东省泰安市农业环境保护监理站!271000 @张磊$山东省泰安市农业环境保护监理站!271000 @邹辉$山东省泰安市农业环境保护监理站!271000     

无籽西瓜种子催芽技术

近几年来 ,我国无籽西瓜栽培面积逐年扩大。由于无籽西瓜种子受遗传特性的影响 ,种子发芽率和成苗率较低 ,影响了无籽西瓜的大面积推广。如何采取有效措施提高无籽西瓜种子的发芽率 ,是无籽西瓜生产栽培中所要解决的重要问题。1　无籽西瓜种子的特点栽培无籽西瓜所需要的种子为三倍体西瓜种子。三倍体西瓜种子具有四倍体种子的厚硬种壳 ,木栓化程度高 ,尤其是喙部特别肥厚 ,口紧。种胚发育不完全 ,种胚的重量较低 ,种胚重占种子重的 38.5%左右 ,种胚体积占种壳内腔的 6 0 %～ 70 %。同时 ,还有相当比例的畸形胚 ,如大小胚和折叠胚。由于上述…     

有机蔬菜生产技术

１有机蔬菜的定义指在蔬菜生产过程中不使用化学合成的农药、化肥、除草剂、生长调节剂等物质，以及基因工程生物及其产物，而是遵循自然规律和生态学原理，采取一系列可持续发展的农业技术，协调种植平衡，维持农业生态系统持续稳定，且经过有机认证机构鉴定认可，并颁发有机证书。在此基础上，生产的蔬菜为有机蔬菜。２有机蔬菜基地的基本要求２．１基地的完整性有机蔬菜基地的土地应是完整的地块，其间不能夹有进行常规生产的地块，但允许夹有有机转换地块；有机蔬菜基地与常规地块交界处必须有明显标记，如：河流、山丘、人为设置的隔离…     

葛根素缓解镉对大鼠股骨胫骨中成骨细胞分化的抑制作用

旨在探究葛根素对镉（cadmium,Cd）抑制大鼠股骨胫骨中成骨细胞（osteoblast,OB）分化的缓解效应。选取40只3周龄SD雄性大鼠,随机分为4组,分别为对照组（CON）、镉组（Cd）、葛根素组（Pur）和镉+葛根素组（Cd+Pur）,每组10只。其中,对照组和镉组大鼠灌服超纯水,连续5周;含葛根素组（葛根素组和镉+葛根素组）大鼠每日灌服葛根素溶液（200 mg·kg^-1BW）,连续5周;从第5周开始,对照组与葛根素组大鼠每日腹腔注射生理盐水,含镉组（镉组和镉+葛根素组）大鼠每日腹腔注射醋酸镉（2.5 mg·kg^-1BW）,连续1周。通过原子吸收光谱法检测大鼠股骨胫骨中Cd、钙（Ca）与磷（P）的含量,qRT-PCR方法检测OB标志基因（RUNX2、OCN、ALP和OSX）的水平,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白（β-catenin、Wnt3A、LEF1和TCF1）的表达。结果显示,与对照组相比,镉组股骨和胫骨中镉含量极显著上调（P<0.01）,OB标志基因均下调,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白极显著下调（P<0.01）,但Ca和P含量无显著变化（P>0.05）;葛根素组股骨胫骨中镉、Ca与P含量无显著变化（P>0.05）,OB标志基因（RUNX2、ALP和OCN）极显著上调（P<0.01）,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白极显著上调（P<0.01）;与镉组相比,镉+葛根素组股骨胫骨中镉含量极显著下调（P<0.01）,OB标志基因极显著上调（P<0.01）,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白极显著上调（P<0.01）,但骨中Ca与P含量无显著变化（P>0.05）。结果表明,葛根素对镉抑制大鼠OB分化具有一定的缓解效应,该过程涉及Wnt/β-catenin信号通路。     

Fas对镉激活PC12细胞线粒体凋亡通路的影响

旨在探究死亡受体Fas在镉致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）凋亡中的作用及其对线粒体通路的调控机制,用10 μmol·L^-1镉处理Fas基因沉默的PC12细胞株12 h,通过Western blot检测BH3相互作用域死亡激动剂（BID）、半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）的活化情况,Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、凋亡诱导因子（AIF）、核酸内切酶G（Endo G）的表达情况,以及细胞色素C（Cyt C）在细胞内的分布情况,免疫荧光染色检测AIF核转位。结果显示,镉极显著上调tBID/BID比值和Bax/Bcl-2比值,诱导Cyt C从线粒体释放到细胞质,激活caspase-9、caspase-3和PARP,增加AIF和Endo G蛋白表达水平（P<0.01）,并诱导AIF核转位;沉默Fas极显著抑制镉引起的tBID/BID比值和Bax/Bcl-2比值升高,Cyt C从线粒体释放到胞浆,caspase-3、PARP蛋白活化和AIF、Endo G蛋白表达水平极显著升高（P<0.01）,显著抑制镉激活的caspase-9（P<0.05）,并抑制AIF核转位。综上表明,Fas通过调控线粒体通路参与镉致PC12细胞凋亡。     

小西瓜早春拱棚栽培技术

西瓜"3+1"栽培即是三层薄膜加一层草苫栽培,采用大棚、小拱棚和地膜三层覆膜方式,小拱棚上再盖草苫.一般每公顷产西瓜78000公斤,产值8.5～11.2万元.其栽培技术如下.     

秸秆反应堆在日光温室中的应用

秸秆反应堆就是利用作物秸秆、壳皮、杂草等农作物下脚料，接上相应菌种进行发酵分解反应，反应过程中产生的二氧化碳、热量及抗病虫微生物孢子直接供温室作物生长发育和抗病虫所需。多年应用实践证明，其效果显著，现将主要技术要点介绍如下。