葛根素缓解镉对大鼠股骨胫骨中成骨细胞分化的抑制作用

旨在探究葛根素对镉（cadmium,Cd）抑制大鼠股骨胫骨中成骨细胞（osteoblast,OB）分化的缓解效应。选取40只3周龄SD雄性大鼠,随机分为4组,分别为对照组（CON）、镉组（Cd）、葛根素组（Pur）和镉+葛根素组（Cd+Pur）,每组10只。其中,对照组和镉组大鼠灌服超纯水,连续5周;含葛根素组（葛根素组和镉+葛根素组）大鼠每日灌服葛根素溶液（200 mg·kg^-1BW）,连续5周;从第5周开始,对照组与葛根素组大鼠每日腹腔注射生理盐水,含镉组（镉组和镉+葛根素组）大鼠每日腹腔注射醋酸镉（2.5 mg·kg^-1BW）,连续1周。通过原子吸收光谱法检测大鼠股骨胫骨中Cd、钙（Ca）与磷（P）的含量,qRT-PCR方法检测OB标志基因（RUNX2、OCN、ALP和OSX）的水平,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白（β-catenin、Wnt3A、LEF1和TCF1）的表达。结果显示,与对照组相比,镉组股骨和胫骨中镉含量极显著上调（P<0.01）,OB标志基因均下调,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白极显著下调（P<0.01）,但Ca和P含量无显著变化（P>0.05）;葛根素组股骨胫骨中镉、Ca与P含量无显著变化（P>0.05）,OB标志基因（RUNX2、ALP和OCN）极显著上调（P<0.01）,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白极显著上调（P<0.01）;与镉组相比,镉+葛根素组股骨胫骨中镉含量极显著下调（P<0.01）,OB标志基因极显著上调（P<0.01）,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白极显著上调（P<0.01）,但骨中Ca与P含量无显著变化（P>0.05）。结果表明,葛根素对镉抑制大鼠OB分化具有一定的缓解效应,该过程涉及Wnt/β-catenin信号通路。     

2种方法诱导形成的破骨细胞特性比较

采集ICR小鼠骨髓单核细胞在体外培养过程中加入25.0 μg/L M-CSF+50.0 μg/L RANKL诱导形成破骨细胞,同时选择RAW264.7细胞培养过程中添加100.0 μg/L RANKL诱导分化为破骨细胞.通过检测抗酒石酸碱性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色阳性数及骨吸收陷窝,比较小鼠骨髓单核细胞和RAW264.7细胞株诱导形成的破骨细胞活性.结果显示,小鼠骨髓诱导的细胞TRAP阳性数显著低于RAW264.7细胞株(P＜0.05),而小鼠骨髓诱导的破骨细胞所形成骨吸收陷窝的面积显著大于RAW264.7细胞株(P＜0.05).结果表明,2种方法均可诱导形成具有典型特征的破骨细胞,骨髓单核细胞诱导形成的破骨细胞活性更强,但破骨细胞的数量和纯度明显低于RAW264.7细胞株.     

鸡破骨细胞分离和培养方法的改进

为获得大量有活力的鸡破骨细胞(Osteoclast,OC),本试验选取18日龄鸡胚,从长骨中提取骨髓细胞,用胰酶消化,40%和70%的percoll梯度离心分离骨髓间质细胞。在此基础上,用60 ng/mL核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、50 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导培养。采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨吸收陷窝以及标志性蛋白TRAP、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织蛋白酶K检测鉴定破骨细胞。结果显示,诱导后的TRAP阳性细胞剧增,TRAP、MMP-9和组织蛋白酶K蛋白表达极显著上调,可在牛骨上形成大量的骨吸收陷窝。研究表明,该方法是一种快速、实用、高效的鸡破骨细胞分离培养技术。     

骨保护素对破骨细胞活性的影响

旨在探讨骨保护素(osteoprotegerin,OPG)对破骨细胞(osteoclast,OC)活性的影响.采用小鼠原代OC模型,在体外培养的基础上添加不同浓度OPG,通过TRAP阳性细胞计数、细胞骨架F-actin染色、骨吸收功能检测等手段,观察OPG对体外培养OC的作用.结果发现,OPG能够直接作用于OC,减少其数量,破坏其F-actin环,减弱其骨吸收活性,且随OPG浓度的增加,对OC的影响更加明显.结果表明,OPG能够减少OC数量并抑制其骨吸收活性,呈现剂量效应.     

MAPK信号通路介导的自噬调控破骨细胞分化的研究进展

破骨细胞具有骨吸收活性,与骨组织稳态密切相关。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路是细胞介导胞内外刺激传导的信号通路,参与细胞的增殖、分化、自噬等多种生理过程。MAPK介导的自噬在调控破骨细胞分化中具有重要作用。探究MAPK的三条经典通路(ERK1/2、JNK及p38 MAPK信号通路)介导的自噬与破骨细胞分化之间的关系,对于寻找与破骨细胞相关的骨代谢疾病的新疗法具有重要意义。     

siRNA在调控破骨细胞分化和骨吸收中的研究进展

RNAi是指将外源性或内源性的双链RNA导入目的 mRNA序列,特异性转录后基因沉默,又称为转录后基因沉默,广泛应用于基因组学、疾病治疗筛选、药物靶点等众多领域。本文主要介绍破骨细胞(OC)分化和吸收过程中重要的调控分子及信号通路,应用RNAi技术特异性地干扰OC分化和吸收中的相关调控分子及信号通路,找到骨代谢相关疾病的关键靶点,旨在为预防及治疗骨代谢相关疾病提供新的方向和思路。     

NAC通过抑制大鼠肺细胞凋亡缓解镉致肺组织损伤

本试验旨在探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）在镉（Cd）致去卵巢大鼠肺细胞凋亡和肺组织损伤的缓解作用。40只雌性SD大鼠随机分为假手术对照（Control）组、Cd组、NAC组和NAC+Cd组，每组10只。18个月后，取大鼠肺组织，镜检观察组织HE染色与Masson染色后的病理学变化，应用火焰原子吸收光谱法检测组织中Cd的含量，应用qRT-PCR法检测组织纤维化关键蛋白Col-I和Col-III mRNA水平，并应用Western blot检测凋亡关键蛋白（Bcl-2、Bax及cleaved caspase-3）及p53的表达与Akt磷酸化。结果显示，与Control组相比，Cd组肺组织中肺泡结构消失和纤维组织增生，Cd的含量极显著增加（P<0.01），Col-I和Col-III mRNA水平、Bax/Bcl-2比值、cleaved caspase-3与p53的表达极显著上调（P<0.01），Akt磷酸化受抑制。与Cd组相比，NAC+Cd组减轻了肺组织病理变化，显著（P<0.01）降低了肺组织中Cd的含量，下调了Col-I和Col-III mRNA水平和Bax/Bcl-2比值、cleaved caspase-3与p53的表达，提高了Akt磷酸化水平。综上表明，NAC对Cd致大鼠肺组织损伤和肺细胞凋亡具有较好的缓解作用。