猪喘气病病原霉形体膜致细胞病变作用

用低渗解体及反复冻融裂解的方法,制备了猪喘气病病原霉形体膜,将所制备的膜制品接种兔肾原代单层细胞,作生物学活性观察,在接种量按蛋白含量计算为25～50微克膜蛋白的细胞管中观察致细胞病变作用,在接种17.5微克膜蛋白的细胞管中作用不明显,接种6微克膜蛋白的细胞管无致细胞病变作用。     

PK-15细胞膜蛋白提取方法的比较及猪瘟病毒膜表面受体的初步鉴定

以猪肾细胞(PK-15)为材料,比较真核细胞膜蛋白提取试剂盒、超声破碎法、反复冻融法、低渗裂解法4种不同方法对PK-15细胞膜蛋白提取的影响,结果表明,通过超声破碎的膜制备方法提取的PK-15细胞膜蛋白较理想。用此方法提取PK-15细胞膜蛋白,经SDS-PAGE后转印NC膜,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定CSFV病毒的细胞受体。结果发现,PK-15细胞膜上有3种能与CSFV结合的蛋白质,分子量在90～100 ku之间,暗示这些蛋白可能是CSFV受体或者受体复合物。     

牛支原体膜蛋白6种提取方法的比较研究

为筛选最佳牛支原体(mycoplasma bovis,Mb)膜蛋白的提取工艺,本试验以牛支原体W70株为代表,分别比较了4种浓度的TritonX-100 、TritonX-114、TritonX-100和TritonX-114;3种浓度碘化钾(KI)复合提取;反复冻融和超声裂解等6种Mb膜蛋白提取工艺和参数.各方法所获膜蛋白经SDS-PAGE和Bradford定量分析表明:不同方法的提取物中蛋白多肽和蛋白浓度各异;其中以3％ TritonX-114和0.4％TritonX-100结合0.6 MKI两法提取的蛋白条带清晰度较好,蛋白浓度及蛋白收集率较高,蛋白多肽条数24～28条,蛋白相对分子质量分别在170 000～12 200和167 000～11 400之间;超声裂解及反复冻融法提取效果一般;而1.8 MKI法效果最差.研究发现3％TritonX-114或0.4 ％TritonX-100结合0.6 MKI是Mb膜蛋白较优的提取方法.     

用低渗膨胀试验评价黑猩猩冷冻精子的膜完整性

精液品质评定的常见方法有精子活力、畸形率和顶体完整率等指标,但这些指标不能评定精子的真实受精能力。目前低渗膨胀试验作为检验精子膜功能的一种方法得到广泛认可,利用它可检验具有完整膜的精子是否具有生化活性。本试验通过对冷冻2只黑猩猩精液进行低渗膨胀来评定冷冻精子的膜完整性。试验结果显示,本研究中的黑猩猩的冷冻精子在低渗溶液中的膨胀率较高,表明试验黑猩猩的冷冻精液有较高的活力,精子具有较高的穿透率和受精能力。     

丝素-壳聚糖共混膜的物理性能和细胞相容性探讨

采用共混法制备丝素-壳聚糖共混膜,并测定其力学性能,结果表明各种配比的丝素-壳聚糖共混膜均具有良好的机械性能,能够克服纯丝素膜刚而脆的弱点。扫描电镜显示纯丝素膜SF、共混膜SCP1表面致密光滑,SCG2、SCP2两种共混膜都有明显突起,而共混膜SCG1的表面凹凸不平。细胞培养结果显示,SCG1、SCG2、SCP1和SCP2等4种共混膜的细胞毒性都在0、1级,细胞增殖率在85%~105%之间,细胞附着率在24 h的达到90%以上,说明各种配比的丝素-壳聚糖共混膜都具有良好的细胞相容性,基本符合生物材料的应用要求。     

猪肺炎支原体膜蛋白的电泳分析及免疫印迹检测

以猪肺炎支原体Z株为试验材料,采用SDS-PAGE和Western印迹对该菌膜蛋白进行了分析。研究表明:猪肺炎支原体经A_(26)液体培养基培养,15000 r/min离心收集菌体细胞,低渗超声法破膜获得膜制剂后,应用12.5％的凝胶对膜蛋白进行SDS-PAGE分离,在电泳图谱上呈现出36条蛋白带,相对分子质量范围为1.18×10~4～9.12×10~4。同时以膜制剂作为抗原,分4次免疫试验兔,心脏采血,提取抗血清,并分离纯化得到IgG,然后进行Western印迹法检测。其结果发现在SDS-PAGE分离得到的36种膜蛋白(或多肽)中,有6种蛋白具有免疫原性。     

鸡传染性法氏囊炎活疫苗(B87株)生产工艺的改进--鸡胚绒毛尿囊膜渗透接种法应用试验

采用绒毛尿囊膜渗透法给鸡胚接种病毒,收获感染的胎儿及绒毛尿囊膜,制备鸡传染性法氏囊炎（B87株）活疫苗,相比于传统的人工气室绒毛尿囊膜接种法和尿囊腔接种法,可降低鸡胚早死率且无存活鸡胚,提高了鸡胚利用率,降低了生产成本.     

冷冻保存绵羊精子质膜完整性检测的研究

为了探讨冷冻保存对绵羊精子质膜完整性的影响,研究采用低渗肿胀—伊红拒染(HOS-EY)法检测冷冻保存前后绵羊精子质膜的完整性。实验设计了5个HOS-EY低渗染液浓度梯度组合(110、130、1501、70、190mOsm),按精子尾部肿胀与否和头部着色与否区分为4种类型进行统计。结果表明:绵羊冻融精子头膜尾膜均完整的Ⅳ型精子率(22.36%)和头膜尾膜均损伤的Ⅰ型精子率(47.4%)与鲜精比较分别极显著减少(58.64%)和增多(20.94%)(P<0.01),表明冷冻-解冻过程对精子膜造成严重损伤;头膜损伤-尾膜完整的Ⅱ型精子率(28.82%)在冷冻过程中极显著增多(16.72%)(P<0.01),头膜完整-尾膜损伤的Ⅲ型精子在冷冻组发生率(1.72%)显著减少(2.58%)(P<0.05),表明精子头膜或尾膜的损伤是独立发生的,且头膜损伤易于尾膜,5种HOS-EY低渗染液中150 mOsm组对精子尾部肿胀的检测效果最好。     

聚乳酸/丝素共混膜的药物释放性能研究

使用聚乳酸对丝素蛋白膜进行改性，制备聚乳酸/丝素共混膜，期望改善丝素蛋白膜作为药物载体的药物释放效果。首先研究聚乳酸含量对共混膜断裂强力和溶失率的影响，接着以染料罗丹明B作为小分子模型药物，将共混膜作为药物载体，对其药释性能进行研究，并使用药释动力学模型对实验数据进行拟合，最后探讨药物的用量以及膜厚度等因素对共混膜的药释性能影响。结果表明，聚乳酸的加入能够显著地提高丝素蛋白膜的断裂强力，降低其溶失率；聚乳酸/丝素共混膜对供试药物罗丹明B具有较好的缓释性能，释放过程属于菲克扩散模型；适当增加药物罗丹明B的用量可以有效提高共混膜的药物释放速率，而共混膜厚度的增加则可抑制药物的释放速率。     

禽白血病病毒跨膜蛋白在膜融合及免疫抑制中的作用

禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）入侵宿主细胞的关键是病毒裳膜与宿主细胞膜的融合,AI。V在此过程中采用病毒一宿主细胞膜融合机制,这一机制的关键是病毒与细胞受体结合后跨膜蛋白一系列构象的变化。此外,ALV入侵宿主细胞后会引起严重的免疫抑制,继而引发肿瘤的产生。在对一些与ALV有相同感染机制的病毒的研究中发现,引起免疫抑制的关键区也是跨膜蛋白。因此进一步在分子水平上深入研究跨膜蛋白有助于正确认识病毒侵染的本质,做到更为有效的预防与治疗ALV感染。     

镉对鸡脾淋巴细胞膜磷脂组分和膜流动性的影响

随着镉资源开发和利用的增加,镉的污染也随之加重,严重威胁着人畜的健康.镉吸收入血后并随血流分布到各器官,对人和动物造成多器官组织损伤、细胞毒性[1].细胞膜是镉进入细胞,发挥其生物毒性作用所必须经过的第一道关卡,镉的毒性可能归结于使膜结构和功能发生改变,这种改变与膜脂质的改变密切相关[2],但镉对淋巴细胞膜磷脂的损伤和膜流动性的影响还未见报道,因此本试验以体外培养鸡脾淋巴细胞为研究对象,探讨镉对膜磷脂组分和膜流动性的影响,为进一步认识镉的毒理提供依据.     

SOE-PCR法检测PRRSV ORF5缺失跨膜区的融合蛋白基因片段的研究

PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒,含有8个开放阅读框（open reading frames,ORFs）,其中ORF5—7分别编码PRRSV主要的结构蛋白：糖基化囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。糖基化囊膜蛋白（E）又称GP5蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性,分子质量约为25ku。重叠延伸PCR技术简称SOE—PCR,又称重叠区扩增基因拼接法、交错延伸剪接PCR技术或套叠PCR技术。此技术利用PCR技术在体外进行有效的基因重组和定点突变,而且不需要内切酶消化和连接酶处理。研究在分析了GP5蛋白跨膜区之后,采用SOE—PCR的方法将跨膜区基因缺失,对GP5蛋白编码跨膜区外的基因片段进行了克隆,旨在为获得高表达、高活性的基因产物打下基础。     

二肽在仔猪小肠刷状缘膜囊中跨膜转运的动力学特点研究

为研究二肽在仔猪小肠刷状缘膜囊（Brush border membrane vesicles,BBMV）中跨膜转运的动力学特点,采用同位素示踪及体外孵育技术,观察了几种不同条件下Gly-Pro的跨膜转运量。结果表明：（1）在有Na^＋和无Na^＋的条件下,Gly-Pro的转运均受到Leu-Gly、Ala-His、Gly-Leu和His-Leu等二肽的极显著抑制（P〈0.01）,但不受甘氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-精氨酸、L-谷氨酰胺和L-蛋氨酸的影响;（2）仔猪小肠BBMV对Gly-Pro的转运呈现非线性关系,但是遵从Michaelis-Menten动力学方程,其Kt（亲合常数）值为0.64 mmol/L,而Vmax为7.42 nmol/（min.mg）膜蛋白;（3）仔猪小肠BBMV对Gly-Pro的摄取是由于Gly-Pro直接进入BBMV内部的结果,而不是仅仅结合在BBMV上所引起的。结果提示,Gly-Pro在仔猪小肠BBMV中的跨膜转运具有载体介导的转运特点。     

鸡胚绒毛尿囊膜渗透法在鸡新城疫活疫苗(Ⅰ系株)生产中的应用试验

与传统尿囊腔接种方法相比，用绒毛尿囊膜渗透接种的方法感染鸡胚，收获胚液制备疫苗，解决了接种后部分鸡胚在规定时间内不死的问题，可明显提高鸡胚利用率和降低生产成本。     

用丝蛋白加工的创伤覆盖膜

一般生物体受到创伤，都有自愈能力，对烧伤创口只要覆上柔软而刺激性小的材料，并防止病菌感染，即能促进其自愈能力。以往人们曾用猪以作为创面覆盖材料，但效果不一定理想，究其原因，覆盖材料应是具备刺激性小，能紧贴创面又不会产生杂菌感染的材料。另外，在患者活动躯体时，能与创面的伸缩相配合的柔软材料，作为天然结昌性蛋白纤维的生丝，过去之所以用作手术缝线，是因为它对创口刺激小而又不会导致炎症，从这一观点出发，人们开展了以生丝为素材的创伤覆盖膜的研究，非结晶性丝素膜的研制方法是以蚕茧，生丝，废丝为原料，通过碱水烧煮，除胶，然后获得丝蛋白纤维，再用氯化钙等中性盐进行溶解，使之成为丝素液，再置于水中透析，脱盐，成为丝素水溶液，然后浇注在玻璃或塑料膜上干部，即成为创伤覆盖膜。对实验动物小白鼠身上的真皮切割后，将丝素膜附于创面上，覆盖膜充分吸收有愈伤作用的浸出液而变软，这有利于创面的恢复。另一方面，紧贴于创面的覆盖膜发生溶争，覆盖膜上的浸出液也通过蒸发，在创面上形成自愈伤痂，这有助妻创面的不受擦伤与防止病菌的感染，总之，以生丝为原料，开发创伤覆盖膜，是大有前途的。     

葡萄三膜覆盖生产技术初报

应用三膜覆技术，可以起到避雨、增温、抑草、促进着色等作用，以达到节本增效的目的。     

一种新的鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗生产工艺改进试验--绒毛尿囊膜渗透法

采用一种新的鸡胚绒毛尿囊膜接种方法,即绒毛尿囊膜渗透法来制备鸡痘鹌鹑化弱毒活疫苗.此法不必做人工气室,减少了鸡胚早死率及人为污染率,减化了生产工艺并使鸡胚利用率大大提高.     

用抗虫体表膜抗原抗体测定犬细粒棘球绦虫粪抗原

利用Echinococcus granulosus(Eg)成虫表膜抗原抗体夹心ELISA方法检测犬细粒棘球绦虫感染的粪抗原.首先提取Eg成虫表膜抗原,制备抗Eg成虫表膜抗原的血清,然后用间接ELISA和Western blotting方法检测其抗原抗体反应及免疫原性,用间接免疫组化方法对Eg成虫表膜蛋白进行组织定位.利...     

鸡毒支原体p24蛋白的原核表达及膜定位研究

为研究p24蛋白在鸡毒支原体中的定位，对p24基因序列进行分析，PCR扩增p24基因并构建原核表达载体，表达p24蛋白，制备多克隆兔抗血清，ELISA测定其效价，提取鸡毒支原体总蛋白、膜蛋白、胞浆蛋白通过Western blot进行亚细胞定位。结果显示：p24基因高度保守，全长576 bp,编码192个氨基酸；成功构建表达载体pCold-p24,经转化、诱导表达后获得重组蛋白rp24,大小约为35 kDa; ELISA检测兔抗rp24血清效价为1∶12 800,说明rp24蛋白具有很好的免疫原性；Western blot显示rp24蛋白在膜蛋白免疫印迹条带较亮，在胞浆蛋白中条带弱，证明p24主要分布在膜表面，是鸡毒支原体的膜蛋白。试验结果为后续基因工程疫苗研制、诊断试剂盒研发、致病机理研究奠定基础。     

丝素/明胶共混膜的结构与溶解性能的初探

将丝素溶液与明胶溶液按不同共混比在不同条件下进行混合,制备成丝素/明胶共混膜。用环境扫描电镜、红外光谱仪、差示扫描量热分析系统分别测定共混膜的结构与热性能,采用烘干质量法测定共混膜的溶胀率和溶解率。结果表明:丝素与明胶的共混性好,共混膜结构改变,热稳定性好;烘干时间对共混膜的溶胀率和溶解率影响不显著,不同浓度乙醇处理对溶胀率有极显著影响,不同共混比则对溶胀率和溶解率都有极显著影响。