溶藻细菌A3的溶藻特性

本研究以锥状斯氏藻(Scrippsiella trochoidea)、蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)、四尾栅藻(Scenedesmus quadricauda)、条纹小环藻(Cyclotella striata)作为实验藻种,将浓度为107 CFU/ml的菌株A3分别加入到4种微藻的单种藻液、2种藻混合藻液、3种藻混合藻液中,每48 h观察藻细胞形态并统计藻细胞数量,实验周期为10d,以探究菌株A3对4种微藻的溶藻效果.结果显示,在单种藻实验中,加菌组锥状斯氏藻细胞于第1天失去运动活性,细胞拉长变形,第5天细胞壁破裂溶解,第10天细胞密度为7.07× 102 cells/ml,显著低于对照组的2.90× 104 cells/ml (P＜0.05);实验期间,加菌组蛋白核小球藻细胞形态保持完整,第10天藻细胞密度为2.58× 107 cells/ml,显著高于对照组的2.09× 107 cells/ml (P＜0.05);加菌组四尾栅藻细胞形态保持完整,与对照组藻细胞密度无显著差异(P＞0.05);加菌组条纹小环藻细胞于第8天溶解,第10天对照组与加菌组藻细胞密度分别为4.38× 105 cells/ml、1.78×105 cells/ml,加菌组藻细胞密度显著低于对照组(P＜0.05).混合藻实验中,菌株A3对各种微藻的溶藻效果与单种藻实验结果类似,菌株A3对锥状斯氏藻生长具有显著的溶藻作用,对蛋白核小球藻与四尾栅藻无溶藻作用,对条纹小环藻生长具有较弱的溶藻作用.研究表明,菌株A3具有溶藻选择性,对锥状斯氏藻具有显著的溶藻作用,而对其他3种藻无溶藻作用或溶藻作用相对较弱.     

不同环境条件对溶藻弧菌粘附大黄鱼肠粘液的影响

研究了不同环境条件下溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用。采用细菌计数法测定溶藻弧菌的粘附作用。粘附的细菌经SYBR GreenⅠ染色后在荧光显微镜下观察，用数码相机拍照后在电脑上计数。试验结果表明，溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附量随菌浓度的升高而升高，并在1—1．5h内趋于饱和；粘附作用在15—30℃、pH偏酸时较强；盐度在5—35范围内对前肠粘液的粘附作用影响不明显，后肠粘液的粘附作用在此范围内随盐度增大而加强，在盐度为0时，溶藻弧菌对前、后肠粘液都无粘附作用；56℃热处理5min及60℃处理1h均能大幅减弱溶藻弧菌对两种肠粘液的粘附作用，表明溶藻弧菌表面的某些热敏结构在粘附作用中起着重要作用。根据以上结果，可以认为溶藻弧菌能够很好地粘附于大黄鱼肠粘液层，其粘附作用受温度、盐度、pH值等环境因子影响很大，溶藻弧菌表面的某些热敏结构可能在粘附过程中起着重要作用。研究结果表明，溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用是可控制的，这对于鱼类养殖疾病的控制有一定的参考价值。     

溶藻细菌的分离及溶藻特性研究

从爆发蓝藻水华的鱼池采集水样,以铜绿微囊藻为对象进行溶藻细菌筛选,得到R1、R2、R3、R5、R6、R8和R9共7株溶藻细菌,生理生化特征初步鉴定R5为海鱼弧菌,另6株为非发酵型细菌.R1、R3、R5、R8和R9细菌含量为105～108 cfu/ml时,对微囊藻的抑制率很高,效果优于R2和R6.对R1、R3、R5和R9...     

侧孢短芽孢杆菌溶藻活性代谢产物对虾池颤藻的溶藻效果

为改善对虾养殖水环境,研究了不同阶段的侧孢短芽孢杆菌无菌滤液和颤藻对溶藻效果的影响.通过测定溶藻过程中藻体干重、叶绿素a含量以及藻蓝蛋白含量,探究了溶藻效果的最佳作用阶段及其作用机理.结果显示,稳定期和衰亡期的无菌滤液对颤藻的溶藻效果极为显著,7d后颤藻干重分别减少了51.77％、47.04％,叶绿素a含量分别降低了67.60％、59.13％,藻蓝蛋白含量分别增加了33.51％、30.97％;溶藻细菌无菌滤液对延滞期颤藻的溶藻效果极显著,7d后颤藻干重减少了63.90％,叶绿素a含量下降了69.72％,藻蓝蛋白含量升高了54.17％.结果表明,侧孢短芽孢杆菌培养至稳定期的无菌滤液对延滞期颤藻的溶藻效果最好.     

溶藻弧菌单克隆抗体的制备及应用

小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0与经溶藻弧菌(1.1587)免疫的BALB3/C雌鼠脾细胞在PEG条件下融合,有45.8%的培养孔有杂交瘤细胞生长,其培养上清液抗体阳性率为77.4%.经反复有限稀释法克隆杂交瘤细胞,获得7株抗溶藻弧菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别为AC1-C9,AC1-C11,BB4-D4,AD1-A3,AD1-F3,AD2-E7,AD2-F7.取AD1-F3扩大培养,注射小鼠,制备了抗溶藻弧菌的单克隆抗体腹水,滴度为11000.该腹水与其他3株溶藻弧菌菌株有强交叉反应,与其他13株标准菌株无交叉反应.利用制备的单抗腹水,建立了检测溶藻弧菌的单抗-ELISA技术.该反应系统可应用于溶藻弧菌的快速诊断,反应时间为6-7h,检测灵敏度为104cells·-1.并利用该检测方法进行了11份待测菌样本溶藻弧菌的检测.     

溶藻细菌A3的溶藻特性

本研究以锥状斯氏藻(Scrippsiella trochoidea)、蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)、四尾栅藻(Scenedesmus quadricauda)、条纹小环藻(Cyclotella striata)作为实验藻种,将浓度为107 CFU/ml的菌株A3分别加入到4种微藻的单种藻液、2种藻混合藻液、3种藻混合藻液中,每48 h观察藻细胞形态并统计藻细胞数量,实验周期为10 d,以探究菌株A3对4种微藻的溶藻效果。结果显示,在单种藻实验中,加菌组锥状斯氏藻细胞于第1天失去运动活性,细胞拉长变形,第5天细胞壁破裂溶解,第10天细胞密度为7.07×10~2 cells/ml,显著低于对照组的2.90×10~4 cells/ml(P0.05);实验期间,加菌组蛋白核小球藻细胞形态保持完整,第10天藻细胞密度为2.58×10~7 cells/ml,显著高于对照组的2.09×10~7 cells/ml(P0.05);加菌组四尾栅藻细胞形态保持完整,与对照组藻细胞密度无显著差异(P0.05);加菌组条纹小环藻细胞于第8天溶解,第10天对照组与加菌组藻细胞密度分别为4.38×105 cells/ml、1.78×10~5 cells/ml,加菌组藻细胞密度显著低于对照组(P0.05)。混合藻实验中,菌株A3对各种微藻的溶藻效果与单种藻实验结果类似,菌株A3对锥状斯氏藻生长具有显著的溶藻作用,对蛋白核小球藻与四尾栅藻无溶藻作用,对条纹小环藻生长具有较弱的溶藻作用。研究表明,菌株A3具有溶藻选择性,对锥状斯氏藻具有显著的溶藻作用,而对其他3种藻无溶藻作用或溶藻作用相对较弱。     

侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)溶藻活性代谢产物对虾池颤藻(Oscillatoria sp.)溶藻效果研究

颤藻(Oscillatoria sp.)为对虾养殖池塘中的一种常见的有害蓝藻。本实验以侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)的除菌体滤液和颤藻为基础,研究各自在不同阶段的溶藻效果,通过测定藻体干重、叶绿素a含量以及藻蓝蛋白含量,探究溶藻效果的最佳作用阶段及其作用机理,为改善对虾养殖水环境提供一定的理论基础。实验结果表明：稳定期和衰亡期的除菌体滤液对颤藻的溶藻效果均影响极显著(P<0.01)：7天后颤藻干重分别减少了51.77%、47.04%,叶绿素a含量分别降低了67.60%、59.13%,藻蓝蛋白含量分别增加了33.51%、30.97%;溶藻细菌除菌体滤液对延滞期的颤藻溶藻效果影响极显著(P<0.01)：7天后颤藻干重减少了63.90%,叶绿素a含量下降了69.72%,藻蓝蛋白含量升高了54.17%。因此,本研究显示侧孢短芽孢杆菌培养至稳定期的除菌体滤液对延滞期颤藻的溶藻效果最好。     

地中海弧菌Vibrio mediterranei 117-T6的溶藻活性

很多藻类致病菌具有广谱溶藻活性。本研究发现紫菜黄斑病致病菌地中海弧菌Vibrio mediterranei 117-T6（Vm 117-T6）对赤潮异湾藻、颗石藻、叉编金藻和东海原甲藻等微藻也具有较强的溶藻活性，可使其叶绿素含量显著降低，是一株广谱性溶藻细菌。Vm 117-T6能在40 min内使赤潮异弯藻的活动能力下降，光合作用受抑，感染120 min即可导致藻体裂解并产生白色絮状沉淀。Vm 117-T6能降解卡拉胶，不能降解果胶、纤维素和几丁质。菌体、胞内及胞外提取物均具有较强的溶藻活性，其胞外溶藻物质易溶于水、不溶于石油醚和乙酸乙酯，具较强极性；耐高温、不易被活性炭吸附、乙醇处理会降低溶藻活性。Vm 117-T6在常规与易感条件下的关键差异蛋白包括大量的ABC转运蛋白、外膜蛋白、鞭毛蛋白及少量Toxin。这些研究结果提示Vm 117-T6毒力效应物中含有极性非蛋白质类物质，且与毒力因子转运、分泌以及细胞黏附相关的蛋白可能在其毒力作用中发挥重要作用。上述研究结果表明：多种溶藻机制参与了Vm 117-T6的溶藻过程。     

致病性溶藻弧菌生物膜形成特性研究

采用改良的微孔板法研究静置培养条件下致病性溶藻弧菌ND-01在酶标板上成膜情况。结果显示,溶藻弧菌的生物膜的OD590在16h达到峰值后,随培养时间延长出现下降;在102～108cfu/mL范围内,不同的初始菌密度对生物膜的OD590影响并不显著;NaCl质量分数为4.5%时,所形成生物膜的OD590最高;30℃,溶藻弧菌的生物膜OD590显著高于其他温度组(P0.05);在胰蛋白胨大豆肉汤培养液中加入质量分数1.5%的CaCl2,能够显著促进生物膜形成,而加入MgCl2对于生物膜的影响则不显著;经过大黄鱼表皮黏液包被后,96孔板中生物膜的OD590显著高于其他部位组织提取液包被组(P0.01)。致病性溶藻弧菌ND-01能够在聚苯乙烯材料的96孔酶标板表面形成稳定而明显的生物膜,且其生物膜的形成与多种环境因素有着密切关系。     

温度和盐度对二种观赏海藻微繁与生长的影响

为了建立观赏海藻大规模微繁技术,研究了温度和盐度对台湾锯齿藻(Prionitis formosana)和海木耳藻(Sarcodia montagneana)生长及叶绿素含量的影响。结果表明,在实验范围内,台湾锯齿藻在35℃的条件下死亡,5~15℃藻体负生长,适宜生长温度为20~25℃;盐度为22条件下生长正常,其余盐度下均生长不良;叶绿素含量在25℃和盐度22时达到最高。海木耳藻在5℃与35℃时出现死亡,5~15℃时负生长,适宜生长温度为25~30℃;最适生长盐度为10,其余盐度下均有不同程度的生长,并且随着温度的增加生长率下降;叶绿素含量在30℃和盐度10时达到最高。     

两种海洋微藻内源醛类对中华哲水蚤繁殖的影响

通过室内实验研究了中肋骨条藻和海洋原甲藻对中华哲水蚤繁殖的影响,并采用顶空固相微萃取-气相色谱质谱法对两种微藻内源醛类进行定性定量分析。结果表明,与海洋原甲藻相比,中肋骨条藻对中华哲水蚤的存活率、产卵率和孵化率都存在负面影响。在微藻内源醛类分析中,检测到中肋骨条藻中含有6种醛类,而在海洋原甲藻中仅检测到两种醛类。不论是从单种醛类的含量上,还是醛类总含量上,中肋骨条藻中醛类含量都明显高于海洋原甲藻,这意味着硅藻释放的醛类物质对中华哲水蚤的繁殖和存活具有潜在的抑制作用。     

碳、氮、磷营养对7种海洋微藻种群增长的影响研究

文章采用批次培养方式研究双胞旋沟藻(Cochlodinium geminatum)、米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)、中肋骨条藻(Skeletonema costatum)、牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)、球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)、亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)和眼点拟微绿球藻(Nannochloropsis oculata)在不同碳(C)、氮(N)、磷(P)条件下的生长特性,以期为养殖尾水的原位处理筛选优良藻种(株)。结果表明,这7种微藻的比生长速率与C、N、P浓度总体呈正相关。相较对照组,C对旋沟藻、骨条藻和拟微绿球藻比生长速率的促进作用分别为35%、19%和19%,P对比生长速率的最大促进作用介于25.01%~446.60%,硝酸盐为16.54%~77.52%,铵盐为15.79%~88.82%,尿素为25.16%~71.43%。7种微藻的最大比生长速率与细胞体积总体呈负相关,棕囊藻的比生长速率最高,拟微绿球藻和扁藻最大比生长速率与其他藻华种相比无显著差别。微藻的氮磷吸收速率随细胞体积增加呈升高趋势,单位氮磷利用效率随细胞体积增加呈降低趋势。培养液中P吸收速率显著高于N,氮磷比均呈升高趋势。眼点拟微绿球藻和亚心形扁藻可用于养殖尾水氮磷的快速去除。     

钝顶螺旋藻营养生理的研究III．钝顶螺旋藻对磷酸盐的吸收利用

利用均匀设计法设计得到的12种培养基及对照Zarrouk培养基对钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)S6品系进行培养，研究了添加磷酸盐的不同培养基下螺旋藻对磷酸盐的吸收利用。结果表明，螺旋藻S6对磷酸盐的净利用量在0.20～0.86mmol/L之间，且与螺旋藻生长速度呈线性关系；磷酸盐为螺旋藻生长利用的主要磷源，含量不足会限制螺旋藻的正常生长；培养基中的磷酸盐添加量以1.16mmol/L左右最为适宜，既可满足藻体的最佳生长，又可降低约60%的磷源养殖成本。     

Effect of Salinity Change on Biomass and Biochemical Composition of Nannochloropsis oculata

Salinity fluctuation is an important factor affecting outdoor microalgae culture. This investigation examined the effect of salinity change (Tr‐1:35–15 g/L, Tr‐2:35–25 g/L, Tr‐3:35–35 g/L, Tr‐4:35–45 g/L, and Tr‐5:35–55 g/L) on growth and the biochemical composition of Nannochloropsis oculata, a candidate for biodiesel production in indoor photo‐bioreactors. Results showed that the algae increased in absorbency and dry biomass as salinity decreased. When the salinity increased, the specific growth rate (SGR) of the algae decreased significantly. The salinity stress also affected the pigments of the algae, the chlorophyll‐a, and carotenoid contents of the algae which decreased with the increase of salinity from 45 to 55 g/L. The fatty acid methyl esters (FAME) content (% of dry biomass) increased with the increase of salinity (e.g., Tr‐4 and Tr‐5). The algae was rich in C16:0 (palmitic acid), C16:1n‐7 (palmitoleic acid), and C20:5n‐3 (eicosapentaenoic acid), and C16:0 content increased with decreasing salinity from 35 to 15 g/L, but C16:1n‐7 content was high in all the treatments ranging from 25.25 ± 1.42% in Tr‐1 to 27.05 ± 1.13% in Tr‐5.     

发酵豆粕替代藻粉对刺参(Apostichopus japonicus)生长及体组成的影响

为研究发酵豆粕替代藻粉对刺参(Apostichopus japonicus)生长及体组成的影响,以发酵豆粕分别替代基础饲料中的藻粉及鱼粉藻粉混合物(2:15),配制9组等氮实验饲料,饲喂初始体重为17.7 g左右的刺参幼参70 d.结果显示,随替代藻粉比例的升高,实验刺参的增重率及特定生长率先升后降(P＜0.05);随替代混合物比例的升高,D8、D9组增重率及特定生长率显著低于前3组(P＜0.05),但前3组之间无显著差异(P＞0.05);替代藻粉降低了体壁粗脂肪含量(P＜0.05);替代混合物降低了粗灰分含量(P＜0.05);替代藻粉降低了体壁甘氨酸、蛋氨酸及半胱氨酸含量(P＜0.05),提高了苯丙氨酸和组氨酸含量(P＜0.05);替代混合物降低了丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、赖氨酸及组氨酸含量(P＜0.05),提高了精氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸及半胱氨酸含量(尸＜0.05);替代藻粉降低了体壁Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Cr、Mn及Pb含量(P＜0.05);替代混合物降低了Ca、Mg、Zn、Cu、Cr及Pb含量(P＜0.05),提高了Fe及Mn含量(P＜0.05).以增重率为评价指标,经SAS REG曲线拟合,发酵豆粕替代藻粉的最佳比例为29.75％;经SAS NLIN曲线拟合,替代46.46％的鱼粉藻粉混合物对刺参生长无显著影响.     

绍兴市凡纳滨对虾围垦滩涂养殖池塘的理化环境和浮游植物

2016年和2017年分别调查了位于浙江省绍兴市滨海新区的12口凡纳滨对虾围垦滩涂养殖池塘内的理化环境和浮游植物。结果显示:池塘内盐度变化范围为0~2,溶氧为6.2~13.9 mg/L,pH为7.5~9.8,总氨氮(TAN)为0.00~0.72 mg/L,亚硝酸盐氮(NO_2~--N)为0.00~1.70 mg/L,硝酸盐氮(NO_3~--N)为0.18~4.77 mg/L,总氮为1.74~6.08 mg/L,总磷为0.20~2.72 mg/L,总有机碳为1.88~42.57 mg/L,C/N为10~39。池塘内浮游植物种类隶属6门、24科、42属,其中蓝藻和绿藻为优势种。浮游植物生物量为(0.15~2.30)×107cell/L,叶绿素a(Chl.a)为2.62~37.24μg/L。Chl.a与蓝藻生物量显著正相关。NO_2~--N和NO3--N均与pH显著负相关。初步分析认为高pH可能是导致2016年池塘养殖凡纳滨对虾死亡率较高的重要原因,因此采取措施控制蓝藻生物量和水体的p H应有助于提高对虾养殖的存活率。     

Changes in Lipid and Fatty Acid Compositions of European Oysters Fattened with Skeletonema Costatum Diatom for Six Weeks in Ponds

To improve the condition index of European oysters (Crassostrea gigas), Skeletonema costatum was fed to adult oysters. However, the consequences of this practice on compositional traits of oysters were not investigated. This study deals with the chemical changes in oysters fed with Skeletonema costatum for six weeks in ponds.The results showed that:1. Supplying Skeletonema costatum to oysters for six weeks improved the condition index (from 26 to 56) as a consequence of an increase in glycogen content (from 5.0 to 24.4 g·100 g ^–1 of dry flesh) while lipid content remained steady (9.9 g·100 g^–1 dry flesh).2. Large changes in fatty acid composition of neutral lipids were observed. Some fatty acids of Skeletonema costatum such as 16:1 7 and 20:5 3, were directly accumulated into lipid fractions.3. 16:1 7 was elongated into 18:1 7 showing that oysters are able to elongate 16 carbon mono-unsaturated fatty acids into the corresponding 18 carbon fatty acids.4. Fatty acids typical of Skeletonema costatum (16:4 1, 16:2 4, 16:3 4) were poorly accumulated into neutral lipids and phospholipids of oysters suggesting that oysters discriminate these fatty acids.     

同安湾浮游植物与赤潮生物的初步研究

根据2002年5月对同安湾6个采样点所采集样品的分析，共鉴定网采浮游植物2门35属74种，其中硅藻门67种，甲藻门7种。优势种为奇异棍形藻(Bacillaris paradoxa)，其次为海生斑条藻(Grammatophora marina)和中肋骨条藻(Skeletonema costatum)，浮游植物种类以广温广盐种为主。调查期间共发现赤潮生物27种，主要种类有奇异棍形藻和中肋骨条藻等。同安湾赤潮的发生与海水中无机氮和活性磷酸盐含量高密切相关。     

春季大辽河口碎波带浮游植物群落结构的昼夜变化

大辽河口地处辽东湾北岸,在辽宁省营口市汇入渤海。2013年春季对大辽河口碎波带浮游植物的群落结构进行了昼夜采样调查。结果表明,春季大辽河口碎波带浮游植物共计8门76种属,数量、生物量均值总计分别为373．83x10ind·L-1、2．5753mg·L-1。浮游植物以硅藻和绿藻的种类组成、数量为主（硅藻34种属,167．45×104ind·L-1;绿藻22种属,137．36×104ind·L-1）,生物量以硅藻为主（73．7％）。优势种主要是硅藻门的种类,优势种中除普生性种类、中盐性种类外,广温、广盐的中肋骨条藻Skeletonemacostatum、扁藻Platymonassp．也占优势。春季大辽河口碎波带浮游植物呈现出明显的昼夜变化,浮游植物种类组成、数量的昼夜变化高峰出现在12：00和0：00,生物量高峰出现在16：00。浮游植物的种类数（P=0．013）、数量（P=0．002）与盐度呈显著负相关;生物量与温度呈显著正相关（P=0．019）。     

坛紫菜响应高光胁迫的分子机制

坛紫菜（Neoporphyra haitanensis）生活于中高潮区，退潮后会遭受到周期性的强光胁迫，但高潮复水后坛紫菜叶状体可以快速恢复正常生长，表明坛紫菜具有极强的耐高光能力。然而，其耐高光机制尚不明确。为此，本研究挑选了两个耐高光能力具有显著差异的坛紫菜新品系作为研究对象（绿色品系：9-IV；桔色品系：WO141-3），测定了高光胁迫下两个品系藻体的光合速率、抗氧化酶活性等生理指标，构建了两个品系的差异转录表达谱，并结合荧光定量分析技术获得了调控坛紫菜耐高光的关键通路和基因。具体结果如下：在高光胁迫下，两种坛紫菜品系叶状体的丙二醛含量均显著上升，光系统部分基因表达量显著降低，藻体光合能力显著下降。进一步分析发现，WO141-3品系在高光处理1 h具有更强的高光抗性，而9-IV品系在处理4 h后具有更强的高光抗性，造成这种差异的主要原因是：高光胁迫处理1 h时，WO141-3品系具有更高的活性氧清除能力、更强的非光化学淬灭能力以及更低的色素含量和捕光蛋白基因表达量；而在高光胁迫处理4 h时，9-IV品系的活性氧清除能力和非光化学淬灭能力更强，色素含量和捕光蛋白基因表达量都更低。以上结果说明，坛紫菜藻体可以通过激活非光化学淬灭机制和抗氧化系统，以及降低色素含量和捕光蛋白基因表达应对高光胁迫，避免遭受过度光损伤和氧化损伤。本研究结果为阐明紫菜的耐高光机理奠定了理论基础。