海参多肽的制备工艺优化及其抗氧化测定

本文对海参酶解工艺条件进行优化，提取液经超滤和冷冻干燥获得海参多肽，并测定其组成及抗氧化活性。结果显示，中性蛋白酶对海参最佳的酶解工艺为：加酶量1800U／g，酶解温度为55℃，酶解pH值为7．5，酶解时间为3h。经超滤与冷冻干燥后，多肽得率为6．9％，蛋白质含量达94．9％。且在抗氧化方面具有较好的清除羟自由基和超氧自由基能力。     

海参水煮液酶解多肽的抗氧化活性

以海参水煮液的冻干粉为原料,选取中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶分别酶解制备多肽,测定其对·OH、O2-·和DPPH·自由基的清除能力,并与合成抗氧化剂TBHQ对比.结果表明,3种蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽对·OH、O2-·和DPPH·自由基的清除能力均随样品质量浓度的升高而增强;其中,中性蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽清除·OH、O2-·和DPPH·自由基的IC50值依次为8.565、6.658和2.015mg/ml,其对O2·的清除能力优于TBHQ.经液相色谱法测定,中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽分子量分别分布在＜2 500、＜3 500和＜1 000 D的小分子肽中.     

利用酶法制备菲律宾蛤仔抗肿瘤肽的研究

为确定酶解法提取菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)抗肿瘤活性多肽的最佳工艺条件,选用5种蛋白酶在相同的料液比、酶解时间和酶添加量、各自最适温度和pH的条件下酶解菲律宾蛤仔。通过甲醛电位滴定法和Cell counting kit-8(CCK-8)方法分别测定了菲律宾蛤仔酶解液氨基态氮含量和酶解多肽的抗肿瘤活性,分析了氨基态氮含量与A549抑制率之间的相关性。在单因素试验的基础上,以人非小细胞肺癌A549抑制率为指标,正交分析优化酶解工艺条件。结果显示,菲律宾蛤仔的5种酶解产物中,风味蛋白酶的酶解液中氨基态氮含量最高,而胃蛋白酶获得的酶解多肽抗肿瘤活性最高。胃蛋白酶酶解菲律宾蛤仔正交实验确定酶解最佳工艺条件为:料液比(w/w)1∶1,pH 2.0,酶解时间1 h,酶添加量2 000 U/g,酶解温度37℃。当设定最佳酶解工艺获得的酶解多肽浓度为20 mg/m L时,其对A549的抑制率为99.83%。研究表明,酶的种类对菲律宾蛤仔酶解液氨基态氮含量和酶解多肽的抗肿瘤活性有较大影响,菲律宾蛤仔酶解液中氨基态氮含量与A549抑制率没有直接的正相关性。     

北极参多肽酶解工艺优化

北极参(Cucumaria frondosa)营养价值高,体壁质厚,有极高的开发成多肽产品的潜能。本文以北极参为原料,研究最优酶解工艺。基本成分测定结果显示,北极参蛋白质含量95.03%,脂肪1.76%,灰分2.47%。以酶解液中多肽得率为检测标准,通过枯草杆菌中性蛋白酶与风味蛋白酶组成复合酶进行酶解,通过单因素试验与正交试验,优化加酶量、酶解时间、温度与pH,确定最优酶解工艺;正交试验结果显示北极参的最优酶解工艺为:酶解温度为50℃、pH为8.0、料液比1:5、酶解时间为5h、加酶量为2.09%,多肽得率为15.38%;酶解产物的氨基酸组成结果表明氨基酸总量占干重约85%;通过Sephadex G-50对北极参酶解液的多肽分子量进行分析,结果显示分子量范围在1080~12052 Da。     

海参营养口服液制备工艺研究

为了综合利用海参的活性功能成分,充分发挥其协同保健作用,对海参酶解工艺条件进行优化,提取液经超滤、调配获得海参营养口服液,并测定了其提高免疫力的效果。结果显示,采用复合风味蛋白酶酶解制备海参口服液效果最好,最佳酶解条件为:加酶量1 500 U/g,温度50 ℃,pH值7.0,酶解时间3 h。经蝶式离心机过滤的海参酶解液,其调配的最佳工艺配方为:绵白糖12 %,pH=4,蒸煮时间30 min。     

罗非鱼活性肽分离及抗氧化能力研究

利用正交试验L9(34),以清除超氧自由基能力为指标,分别对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶水解罗非鱼肉的水解条件进行优化,并对最佳清除率下的两种酶解物进行Sephadex G-50凝胶柱分离,检测了各组分对超氧自由基清除率及活性肽分子量分布情况.结果表明:中性蛋白酶在45 ℃、酶的质量分数2.0%、水解105 min及肉水比1∶3的水解条件下对超氧自由基有较好清除作用;木瓜蛋白酶在60 ℃、酶的质量分数2.0%、时间150 min及肉水比1∶2的水解条件下对超氧自由基有较好清除效果.木瓜蛋白酶酶解物在分子量为660 Da的多肽洗脱峰具有最大超氧自由基清除率,中性蛋白酶酶产物在分子量为1320 Da多肽洗脱峰具有最大超氧自由基清除率.     

鳙鱼蛋白酶解液清除自由基的研究

以鳙鱼肉为原料,通过对水解度的分析和对可溶性短肽的测定研究了不同蛋白酶的酶解效果,并分别利用分光光度法、Deoxyribose筛选法及邻苯三酚氧化法对鳙鱼蛋白酶解液在体外清除自由基的能力进行了比较。试验结果表明:鳙鱼蛋白经酶解后可提高对自由基DPPH.、.OH和O2.-的清除活性,水解至一定时间后酶解液的清除活性达到最大,随后减少;不同的酶对清除能力的影响不同,碱性蛋白酶Alcalase的酶解液清除能力较强;酶解液对不同的自由基表现出不同的清除活性,提示酶解液对不同自由基存在着不同的抗氧化机制。     

鲣鳔蛋白抗氧化酶解物制备工艺

为有效提高鲣鳔蛋白的附加值,研究以DPPH自由基清除率为抗氧化活性评价指标,采用蛋白酶酶解制备活性多肽的工艺,选用菠萝蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶7种酶在各自最适的条件下酶解,筛选出复合蛋白酶为最适用酶,通过单因素实验分别研究加酶量、溶液初始p H、酶解温度和时间对酶解物抗氧化活性的影响,在此基础上,根据响应面法优化鲣鳔抗氧化酶解物的制备工艺。结果显示,最佳酶解工艺条件为加酶量8.53 U/mg,p H 5.54,温度50.03°C,时间5.07 h。此外,利用超滤法对最佳条件下制备的酶解物进行初步分级,得到分子质量分别为大于10 000 u、3000~10 000 u和小于3000 u的3段组分,且这3段组分对DPPH自由基的半抑制浓度IC50值分别为0.64、0.52和0.37 mg/m L。研究表明,最优条件下制备的酶解物的DPPH清除率达72.00%,与模型预测值71.60%接近,且其中小于3000 u的组分具有较强的DPPH自由基清除活性。     

海参内脏胶原降解酶的纯化及性质研究

针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析、Phenyl Sepharose FF疏水柱层析及Mini Q离子交换柱层析等方法,从海参内脏中分离纯化出降解明胶的蛋白酶。利用荧光底物研究其酶学性质及其对海参体壁胶原蛋白的降解情况。结果表明,该酶最适温度为30 ℃,最适pH为7.5,可被金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA完全抑制,亦可被PMSF、Pefabloc SC等丝氨酸蛋白酶抑制剂完全抑制。底物特异性表明,该酶只对金属蛋白酶荧光底物有分解作用,推测其为金属蛋白酶。该酶在4和37 ℃下均能有效地分解海参体壁胶原蛋白,表明其在海参自溶过程中起重要作用。     

影响淡水鱼头酶解的因素研究

选用中性蛋白酶和碱性蛋白酶对草鱼鱼头进行水解,单因素分析和正交实验L9(34)相结合,对影响其酶解条件的因素进行了探讨.结果表明:碱性蛋白酶水解效果较中性蛋白酶好,其最佳酶解条件为酶用量0.018%、温度53℃、pH值7.6、水解5h,在此条件下酶解液中游离氨基酸可达1.25mg/ml.并分析了两种酶在最佳酶解条件下,可溶性蛋白质含量的变化.     

魁蚶蛋白胰蛋白酶酶解产物的抑菌活性

采用胰蛋白酶对魁蚶蛋白进行不同时间的酶解,比较酶解产物的抑菌活性。选取抑菌活性较好的胰蛋白酶酶解产物进行细菌呼吸抑制研究。通过RP-HPLC对该酶解产物进行分离纯化,采用质谱分析其氨基酸序列。结果表明,胰蛋白酶酶解0.5h所得到的酶解产物对金黄色葡萄球菌及希瓦氏菌具有较好的抑菌活性。其抑制金黄色葡萄球菌和希瓦氏菌的HMP途径。RP-HPLC分离纯化得到了4个抑菌活性较好的组分。对其中第2组分进行质谱分析得到3个目标多肽,其m/z分别为679、792及905,将这3个目标多肽导入De novo Explorer(TM)Software(AB SCIEX;Version 4.1)进行分析,获得了候选抑菌肽氨基酸序列。     

复合酶提取牡蛎抗氧化肽的工艺研究

以牡蛎为原料,首先从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中筛选出胰蛋白酶为内切酶,以水解度为指标,得到最佳的酶解工艺条件:时间4h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％(7 500 U/g),水解度为49.50％;同时以水解度为指标,得到外切酶风味蛋白酶的最佳酶解工艺:时间5h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％ (450 U/g),实际水解度50.95％.最后,以清除羟自由基能力和水解度为指标,探讨内切酶(胰蛋白酶)和外切酶(风味蛋白酶)不同复合酶解方式的抗氧化能力.最终确定,复合酶解制备牡蛎抗氧化肽效果最好,其酶解条件为胰蛋白酶为3％(7 500 U/g)、风味蛋白酶加酶量为3％ (450 U/g),pH8.0,时间5h,料水比1∶2,温度50℃时,水解度高达53.94％,体外清除·OH的EC50为0.56 mg/mL.     

菲律宾蛤仔酶解产物的抑菌活性

以菲律宾蛤仔为原料,比较其胃蛋白酶、酸性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解产物的抑菌活性;利用正交实验优化抑菌活性最强的酶解产物的制备工艺,并测定最优酶解条件下酶解产物的相对分子质量分布。结果表明,菲律宾蛤仔胃蛋白酶酶解产物的抑菌活性最强,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和副溶血弧菌均有一定的抑菌活性,其中对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌活性较高,对四联微球菌则未见明显的抑菌活性。胃蛋白酶的最优酶解工艺条件为：酶解时间2h,温度35℃,pH 2.0,加酶量3 000U/g,料水比1∶4;该条件下酶解产物的相对分子质量主要分布在5000以下。     

牡蛎酶解工艺条件的研究

比较选择了牡蛎酶解的有效蛋白酶，研究了牡蛎酶解的工艺中各主要因素对提取率的影响。结果表明，A．SI，398枯草芽跑杆菌中性蛋白酶和胰蛋白酶对牡蛎有较好的酶解效果。酶解温度、加酶量、底物浓度对酶解提取率影响较大。确定了牡蛎酶解的最佳工艺条件为：酶解温度50℃；加酶量0．5％；底物浓度6％；酶解时间2h。     

紫菜降血压肽酶法制备工艺的优化

摘要：降血压肽又称为血管紧张素转化酶抑制肽，是具有降血压活性的生物活性肽，对高血压患者有显著疗效。为探讨从紫菜中制备降血压肽的酶法工艺，本实验选用AS．1398中性蛋白酶、胰蛋白酶、复合酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶等6种蛋白酶分别对紫菜进行酶解，通过对其酶解液的ACE抑制活性和水解度的比较，发现采用AS．1398中性蛋白酶酶解的产物ACE抑制活性最高。对AS．1398中性蛋白酶的酶解工艺进一步优化，确定其最佳酶解工艺为：温度50℃、pH值7．5、加酶量E／S10000U·g^-1。在此条件下，酶解4h和10h的酶解产物抑制活性最高均达70％以上，并发现紫菜酶解液的ACE抑制率与水解度的增长不成显著的线性关系。     

牡蛎酶解液的抗氧化活性

检测了牡蛎(Crassotera gigas)木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性。由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析牡蛎酶解液,得到具抗氧化活性组分的分子量分布。分子量为1191 D和826 D左右的木瓜蛋白酶酶解活性肽组分的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.184 mg/mL和0.673 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别为53.6%和66.5%;分子量分别为1074 D和735 D左右的中性蛋白酶酶解活性肽的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.166 mg/mL和0.830 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别57.6%和70.5%。HPLC分析结果表明,木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的活性肽组分分别由几种抗氧化肽组成。抗氧化活性最强的木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的肽组分在质量浓度为2.5 mg/mL时,活性分别可达83.6%和80.8%。用牡蛎原浆与各酶解液灌胃昆明小白鼠。研究结果表明,用木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解原液及经超滤纯化的酶解液对小白鼠实施灌胃,其肝脏组织的SOD活力都显著提高(P<0.05);灌胃经超滤纯化的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液,小白鼠肝脏组织GSH-PX活力、GSH含量显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。     

海参肽果汁复合饮料的研制

以诺维信复合蛋白酶酶解海参获得的海参肽为原料,研制一种海参肽果汁复合饮料。对海参肽制备工艺和海参肽果汁复合饮料制备工艺进行了详细研究。结果表明,海参肽的最佳制备工艺条件为:在pH为6、酶解5h、温度为40℃以及加入重量百分比为0.5%诺维信复合蛋白酶条件下进行酶解溶于40mL水的2g海参粉。由感官评价得到的海参肽果汁复合饮料的最佳配比为:蜂蜜4.5g,柠檬汁3.0mL,海参肽粉0.03g,蓝莓果汁:红提果汁比例为1∶3。制得的海参肽果汁复合饮料呈深蓝色、酸甜适中、有浓郁的水果清香。     

刺参肠、性腺酶解多肽体外抗氧化作用研究

刺参（Apostichopus japonicus）肠和性腺是刺参加工过程中的副产物,为丰富其高值化利用的基础理论,研究了刺参肠、性腺酶解过程中可溶性蛋白和氨基酸态氮质量浓度变化,分析了酶解多肽对11-二苯基苦基苯肼（DPPH·）、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2^-·）的体外清除效果。结果显示,刺参肠和性腺经生物酶水解后,水解度分别为53.63%和63.40%,酶解液中可溶性蛋白质量浓度分别为4.62 mg·mL-1和5.01 mg·mL-1,氨基酸态氮质量浓度分别为0.43 mg·mL-1和0.56 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽清除DPPH·的半抑制质量浓度（IC50）分别为3.31 mg·mL-1和0.88 mg·mL-1,清除·OH的IC50分别为9.53 mg·mL-1和8.81 mg·mL-1,清除O-2·的IC50分别为6.42 mg·mL-1和3.22 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽具有一定的体外抗氧化效果,应用前景广阔。     

复合蛋白酶在即食海参加工中的应用

用复合蛋白酶处理盐渍海参,作为加工冻干即食海参的预处理样品,研究其酶处理最适工艺。试验结果表明,酶处理温度40℃,处理50 m in,水浸泡13 h,酶用量为肉重0.075%时,处理后的海参胶原蛋白溶解度(DD%)为(38.14±0.52)%,与水发海参接近[(39.34±0.47)%],口感达到最佳。从酶处理海参和盐渍海参的红外光谱分析可知,二者的营养成分无明显差异,达到生产冻干即食海参的要求。     

鳕碎肉酶解物清除羟自由基作用研究

通过测定鳕碎肉酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从海洋蛋白酶YS-894、海洋蛋白酶YS-80、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中,筛选出海洋蛋白酶YS-894作为酶解鳕碎肉制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的水解酶;用正交试验L9(34)对该酶的水解条件进行优化,并确定了水解的最佳肉水比。最终工艺条件为40℃、酶解45 m in、pH 9.0、酶解质量分数0.25%、底物∶水=1∶3的条件下进行水解,水解物对羟自由基的清除效果较好,清除率为68.88%。